JoVE General
Adam M. McCoy, Michelle L. Collins, Luis A. Ugozzoli
Gene Expression Division, Bio-Rad Laboratories, Inc.
Questa procedura mostra come utilizzare il sistema di elettroporazione Gene Pulser MXcell di identificare rapidamente e facilmente le migliori condizioni di elettroporazione di fibroblasti embrionali di topo (MEF) o altre cellule primarie. Considerazioni per la risoluzione dei problemi vengono discussi anche nel video associato.
JoVE General
Adam M. McCoy, Claudia Litterst, Michelle L. Collins, Luis A. Ugozzoli
Gene Expression Division, Bio-Rad Laboratories
Questa procedura descrive un flusso di lavoro rapido e facile per introdurre siRNA difficile trasfezione in linee cellulari e seguire l'espressione genica mediante real-time PCR. L'utilizzo di un contatore di cellule automatizzati, multi-pozzetti elettroporazione, e la stazione di elettroforesi automatizzata fornire risultati rapidi e affidabili, senza bisogno di costosi movimentazione robotica.
Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Sep, 2010 | Pubmed ID: 20736348
Con parassiti della malaria (Plasmodium spp.), Toxoplasma e molte altre specie di importanza medica e veterinaria suoi rappresentanti iconici, al protistan phylum Apicomplexa lungamente è stata definita come un gruppo composto interamente da parassiti e patogeni. Vi presentiamo qui una relazione di un Apicomplexa benefico: il mutualistiche endosimbionti marino Nephromyces. Per più di un secolo, le caratteristiche strutturali e di sviluppo peculiari di Nephromyces e il suo habitat insolito, hanno ostacolato la caratterizzazione dell'affinità filogenetica di questo microbo negli eucarioti. Utilizzando sequenze di DNA (SSU rDNA) ribosomiale breve-subunità come prove chiave, con identità di sequenza ha confermato per l'ibridazione in situ (FISH), mostriamo che Nephromyces, inizialmente classificato come un fungo chytrid, è in realtà un Apicomplexa. Inferenze da dati rDNA sono ulteriormente supportate dalle diverse caratteristiche strutturali Apicomplexa-come in Nephromyces, tra cui soprattutto la forte somiglianza delle Nephromyces stadi infettivi di sporozoiti Apicomplexa. Il sorprendente emergere del Nephromyces mutualistiche da un clade tipicamente parassitaria accentua la promessa di questo organismo e la simbiosi di tre partner di cui fa parte, come un modello per sondare i fattori sottostanti l'evoluzione del mutualismo, patogenicità e malattie infettive.