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Articles by Aih Cheun Lee in JoVE
JoVE General
성장 콘스의 고해상도 이미징을위한 Aplysia에서의 연결을 셀 문화
Department of Biological Sciences, Purdue University
Aplysia californica의 뉴런 성장 콘 운동성 및지도 고해상도 이미지를위한 최고의 아르 문화의 큰 성장 콘을 개발. 여기서 우리는 절개 및 Aplysia 가방 셀 뉴런의 도금뿐만 아니라 라이브 셀 이미징을위한 챔버를 설정을위한 프로토콜을 제시한다.
Other articles by Aih Cheun Lee on PubMed
신경 성장 원뿔 형태 비교 원자 힘 및 광학 현미경의 고해상도 분석
신경 성장 원뿔은 축 삭, 대상 셀 쪽으로 방향 움직임으로 지도 정보를 transducing의 끝에 메구미 감각 구조. 광학 기술;가 되어 잘 특징 형태 및 신경 성장 원뿔의 역학 그러나, 아주 작은 양적 정보는 3 차원 구조 및 개별 구역의 기계적 특성에 있습니다. 현재의 연구에 우리 원자 힘 현미경 (AFM)과 직접 화학 고정에 비해 우리의 데이터 이미지 가벼운 현미경 검사 법 방법으로 획득 한 후 큰 Aplysia 성장 원뿔 몇 군데. 포스 먼 측정 함께에서 연락처 모드로 일정 힘 영상 공개 200의 평균 높이 주변 (P) 도메인, 800 nm 및 1200 nm 중심 (C) 도메인에 대 한 전환 (T) 영역에 대 한 각각. AFM 이미지 표시 filopodial F 말라 번들은 F 말라 네트워크 주변 보다 더 뻣 뻣 합니다. 확대 filopodia 팁은 60 nm 해당 샤프트 보다 높은. AFM과 특정 성장 원뿔 영역의 기계적 특성의 측정 T 존 P와 C 도메인 보다 엄격한 밝혔다. AFM과 차동 간섭 콘트라스트와 형광 현미경 검사 법에 의해 취득 하는 광학 데이터의 직접 비교 이러한 이미징 방법 사이 좋은 상관 관계를 공개 했다. 그러나, AFM 자주 셀룰러 구획의 볼륨을 추정 하는 데 사용 하는 형광 방법 보다 더 높은 해상도에서 높이 볼륨 정보를 제공 합니다. 이 발견은 라이브 성장 원뿔의 AFM 측정 어떻게 단백질 다른 성장 원추 영역 간에 이동할 수의 정량적 이해를 제공할 것입니다 것이 좋습니다.
접착 중재 성장 원뿔 지도 Microtubule 역학의 정량 분석
신경 성장 접착 중재 동안 콘 지도 microtubules 주요 재배열을 받 다. 그러나 microtubules 말라 microtubule 상호 작용의 변화 때문에 플러스 최종 중 합 또는 전 역학에서 변경으로 인해 접착 사이트로 확장 여부 그들은 말라 cytoskeleton의 조직 개편에 따라 하기 때문에 알려져 있지. 여기, 형광 얼룩 현미경 사용 하는 세포 접착 분자 apCAM 코팅 구슬 쪽으로 차례 대로 microtubule Aplysia 성장 원뿔에서 말라 역학을 직접 계량. 접착 형성의 초기 단계에서 주변 도메인에서 동적 microtubules 우선적으로 성장 원뿔 형태와 말라 퇴행 성 변화 이전에 apCAM-비즈 탐구 흐름. 흥미롭게도, 이러한 초기 microtubules 중 합 률을 변경 하지 않고 하지만 퇴행 성 전 말라 흐름에서 분리 시 때문에 적은 시간을 보내고. 또한, microtubules 접착 사이트 탐험 depolymerization에 적은 시간을 보내고. 트랙 션의 나중 단계 동안 세대를 강제 하 고 중앙 도메인 이동 주변 도메인에 더 많은 microtubules 말라 흐름의 감쇄와 F 말라 구조체의 확장. 그러나 전환 영역 및 중앙 도메인 microtubules 각각 말라 호 및 번들, 함께 접착 사이트 쪽으로 이동 합니다. 우리는 차동 성장 콘 지역에 따라 microtubule 말라 커플링과 말라 움직임을 조절 하 여 크게과 하지 플러스 엔드 중 합 속도 제어 하 여 접착 분자 가이드 신경 성장 원뿔 및 기본 microtubule 재배열은 결론.
Cortactin Filopodial 말라와 Colocalizes 및 IgCAM 접착 사이트 Aplysia 성장 원뿔에서 축적
Igcams와 말라 cytoskeleton 신경 성장 원뿔 운동 성 및 지도에 중요 한 역할을 재생합니다. 그러나, 그것 아니다 분명 어떻게 IgCAM 수용 체 transduce 말라 리 모델링 유도 플라즈마 막에서 신호. 이전 연구 로컬 클러스터링 및 apCAM, 보안, Aplysia 체 immobilization Src 키 니 아 제 활동 및 교양된 Aplysia 가방 셀 성장 원뿔의 주변 도메인의 F-말라 합 유도 것으로 나타났습니다. 따라서, 우리는 Src 니 기판 및 말라 레 귤 레이 터 cortactin Src 활동과 apCAM 중재 성장 원뿔 지도 말라 어셈블리 사이의 분자 링크 될 수 있는지 여부를 테스트 싶 었 어 요. 여기, 우리가 Aplysia cortactin 복제 및 신 경계에서 풍부한은 보여주었다. 성장 원뿔의 Immunostaining F 말라 filopodial 번들 및 lamellipodia의 첨단에서 cortactin의 강력한 colocalization을 공개 했다. 섭 동 된 cytoskeleton의 표시 cortactin 배포 크게 말라 필 라 멘 트에 따라 다릅니다. 또한, 활성 Src 말라 어셈블리, 첨단 filopodia 팁 등의 지역에서 cortactin와 colocalized. 마지막으로, 우리가 관찰 F 말라 처럼 그 cortactin apCAM 접착 사이트 성장 원뿔 지침을 중재 localizes. 모두, 이러한 데이터는 cortactin IgCAM 트리거 말라 어셈블리 성장 원뿔 운동 성 및 지도에 관련 된의 중재자입니다 것이 좋습니다.
지형과의 Nanomechanics 라이브 신경 성장 원뿔 원자 힘 현미경으로 분석 했다
신경 성장 원뿔 세포 외 지도 정보 방향 움직임으로 변환 하는 축 삭의 끝에 있는 운동 구조에 있습니다. 성장 원뿔 신경 개발 및 재생에 중요 한 역할에도 불구 하 고 상대적으로 작은 지형에 대 한 알려져 있다 하 고 뚜렷한 subcellular 성장 원추 영역에서의 기계적 특성 라이브 조건. 이 연구에서는 P 도메인, T 존, C 도메인의 라이브 Aplysia 성장 원뿔을 공부 하 고 AFM을 사용 했습니다. 이 지역의 평균 높이 연락처 모드 AFM 이미지 수 33, 274, 1322 164 + + /-690 + 183에서에서 계산 된 nm, 각각. 이러한 결과 고정된 성장 원뿔의 라이브 및 연락처 모드 이미지의 동적 모드 이미지에서 파생 된 데이터와 일치 합니다. 나노 들여쓰기 측정 표시 C 도메인과 지역 물결이 T 존의 신축성 moduli 각각 3-7, 7-23 인민군 사이 ranged. P 도메인의 측정 된 탄성 계수 범위는 10-40 kPa. P 도메인의 높은 해상도 이미지는 filopodia에 말라 번들 및 lamellipodia에서 말라 필 라 멘 트의 조밀한 채널에서 상대적으로 높은 탄성 계수 결과를 것이 좋습니다. P와 T 도메인의 증가 된 기계적 강성 높습니다 지원과 transduce 성장 콘 조 타 하는 동안 개발 하 고 긴장 해야 합니다.
Preassembled Alphavirus Nucleocapsid 코어에서 전염 성 입자의 구조
Alphaviruses는 작고, 구형, 엔벌로프된 긍정적인 감지, 단일 가닥 RNA 바이러스 상당한 인간과 동물 질병에 대 한 책임. Preassembled 코어의 microinjection 도구를 사용 하는 시스템 어셈블리 Sindbis 바이러스는 alphaviruses의 형식 멤버는 싹 트는 과정을 공부 하 고 설립 되었습니다. Sindbis 바이러스 봉투 glycoproteins 다음 microinjection Sindbis 바이러스 nucleocapsids의 감염 된 세포의 세포질에서 정화를 표현 하는 셀에서 전염 성 바이러스 같은 입자의 릴리스 보여 줍니다. 또한, nucleocapsids 조립 체 외 모방 그 엔벌로프된 virions microinjection 다음에 통합 하는 능력에 대해 감염 된 세포의 세포질에 격리 표시 됩니다. 이 시스템과 신진 본격적인 감염의 과정에 관계 없이 alphavirus의 연구에 대 한 수 있습니다 바이러스 성 연구 및 신진에 대 한 호스트 요구 사항에 플랫폼을 제공 합니다.
