Fotoablazione Del Due-fotone Microscopia-guidati-laser a Femtosecondi Di Cardiogenesis Aviaria: Creazione Non Invasiva Delle Cardiopatie Localizzata

American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. Nov, 2010  |  Pubmed ID: 20709864

Formazione del cuore embrionale è guidato dal complesso feedback tra stimoli emodinamici e genetici. Clinica cardiopatia congenita (CHD), tuttavia, spesso manifesto come malformazioni localizzate microtissue con nessuna mutazione genetica sottostante, suggerendo che alterata emodinamica durante lo sviluppo embrionale può svolgere un ruolo. Un'indagine di questo rapporto ha stata alterata da una mancanza di strumenti sperimentali che possono creare perturbazioni cardiaci localmente mirate. Qui abbiamo sviluppato tecniche ottiche non invasive che possono modulare cardiogenesis aviaria per sezionare la relazioni tra alterazioni nella segnalazione meccanica e CHD. Abbiamo usato Microscopia di fluorescenza eccitata due-fotone a cuscino monitor e dinamica ventricolare e pulsato femtosecond laser fotoablazione a volumi bersaglio di dimensioni micrometriche dentro il cuore di pulcino pestaggio. Abbiamo photoablated selettivamente una regione piccola (∼100 μm raggio) del superiore cuscino atrioventricolare (AV) in embrioni di pulcino 24 Hamburger-Hamilton. Abbiamo quantificato tramite gli ultrasuoni che l'interruzione provoca il rigurgito AV, che ha portato in un pool venoso del sangue e costrizione arteriosa grave. A postablation di 48 h, quantitativa imaging di tomografia microtomografia a raggi x ha dimostrato una crescita stentata ventricolare e pronunciato dilatazione atriale sinistra. Un'analisi istologica ha dimostrato che l'ablazione laser prodotto difetti localizzati il cuscino superiore AV: una piccola regione quasispherical del tessuto del cuscino è stata completamente cancellata, e la zona adiacente alla parete del miocardio è stato meno cellularized. Miocardio e cuscini erano significativamente minori rispetto ai controlli sham-operated. I nostri risultati evidenziano che due-fotone eccitato fluorescenza accoppiato con femtosecond laser pulsato fotoablazione deve essere considerato un potente strumento per lo studio emodinamico segnalazione in cardiaco morfogenesi attraverso la creazione di Microscala localizzato i difetti che possa imitare CHD clinico.