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Articles by Alexandra Fuchs in JoVE
JoVE Bioengineering
マイクロパターン細胞を用いた薬物の効果の改善可視化と定量分析
1CYTOO Cell Architects, Grenoble, France, 2Centre Commun de Quantimétrie, Faculté de Médecine Rockefeller, Lyon, France
細胞構造を正常化する接着剤微細パターンは、薬剤の効果の検出感度を向上させる再現性を改善し、自動画像収集と分析を簡素化するために使用できます。そのような技術は、従来の細胞培養担体上で実行し、結果的に過剰な細胞間のばらつきを患っている薬剤/ siRNAのスクリーニングアッセイを、利益になる。
Other articles by Alexandra Fuchs on PubMed
心臓移植：原発性心臓肉腫の治療へのアプローチ？
心臓移植（HTX）で希少な、主要な心臓の軟部組織肉腫（C-STS）を処理することは議論の余地がある。従来の腫瘍の切除は部分的にしか病気を軽減し、患者は、腫瘍の遠隔転移や局所再発で死亡している。心臓移植は完全に原発性悪性腫瘍を根絶するための機会を提供しています。 C-STSを示した4症例の経験では、HTXは、長期的な結果には影響しません術後の化学療法に続く。しかし、術前化学療法は化学療法に感受性のあるC-STSの腫瘍を退縮することができ、潜在的に早期の微小転移を根絶。レスポンダーのための連続したHTXは、長期生存の機会を提供することがあります。
非ウイルストランスフェクションの最適化：Vsを増殖におけるリポソームによる遺伝子導入に影響を及ぼす変数。ブタ再狭窄モデルを用いた培養およびin Vivoでの静止状態の細胞
カチオン性リポソーム/ DNA複合体は、広く臨床的および実験的な試験で遺伝子を提供するためのベクターを使用されています。ウイルスの遺伝子導入と比較して、生体内で比較的低い伝達効率は、ローカルアプリケーションを使用して改善することができます。加えて、著しく増加し、転送効率は、リポソームトランスフェクションに影響を与える既知の変数の最適化を経由して、in vitroおよびin vivoで達成することができる。さまざまな条件下でリポフェクションは、様々な細胞株および初代ブタ平滑筋細胞で行われた。試験管内で見つかった最適化条件は、ブタの再狭窄モデルを用いたin vivoで確認されました。毒性は、細胞の代謝を解析し監視した。転送効率と安全性が、組織学、ガラクトシダーゼアッセイ、PCR、およびRT-PCRを形態計測を用いて測定した。最大転送効率を可能にする最も重要な変数は、DNA /リポソーム使用される細胞の種類とカチオン性脂質に依存して選ばれた比率、および第三の増殖の状態を第二に、まず、トランスフェクションする細胞タイプのカチオン性脂質の適切な選択であった標的細胞。転送条件は増殖細胞に設立された条件の使用と比較して静止細胞での最適化実験から外挿したときにin vivoでのトランスフェクションは、2〜五倍高い転送効率を実証した。最適化された転送条件を使用してセクロピンための治療用遺伝子のアプリケーションでは、β-ガラクトシダーゼの制御遺伝子を用いてトランスフェクションと比較して有意に減少し新生内膜形成をもたらした。したがって、この血管のモデルでは、in vivoで、適切な治療遺伝子の選択とローカル配信に続いて文化の中で静止細胞におけるリポフェクションの初期化が著しく向上し、転送効率、遺伝子発現、生物学的効果につながった。静止した培養細胞は、in vivoの状況でより現実的にシミュレートするため、in vivo実験、将来のより良いモデルを表すことができる。さらに、リポソームの利点は、取り扱いが容易、低毒性、発がん性または免疫原性反応の欠如です。
血管内皮増殖因子（VEGF165）と様々な血管床における血管新生対動脈形成への影響
異なる発達の起源の動脈における血管新生と動脈形成に血管内皮増殖因子（VEGF（165））のいずれかの地区に固有の影響を決定するために、ローカルの遺伝子送達を使用します。
非外科閉塞モデルを用いたブタ冠動脈および末梢動脈、ローカル配信、およびリポソームによる遺伝子導入の血管内皮増殖因子応答
血管新生と動脈形成は、高度な血管閉塞性疾患において重要な役割を果たしている。血管新生や動脈形成が主体では、既存の側副血管のネットワーク、咬合の種類と場所、および動脈の異なる発達の起源に依存するかどうか。血管新生と動脈形成は、新しく開発されたブタ動脈閉塞モデルを用いて、閉塞性動脈疾患において重要な別の動脈の血管内皮増殖因子（VEGF）の治療後に検討した。ブタ冠動脈および末梢動脈は盲目ステントグラフトを使用してinterventionally閉塞させた。遺伝子導入、遺伝子キャリアとしての針注入カテーテルおよびカチオン性脂質DOCSPERを用いて行った。動脈組織中のDNAと遺伝子発現は、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）及び逆転写酵素（RT）-PCRを用いて検討した。容器の開発は、血管造影、免疫組織化学、および毛細血管密度の測定により決定した。トランスフェクトした遺伝子とその発現は、アプリケーションは、次の3ヶ月発見された。冠状動脈に隣接した組織では、大幅に強化された毛細血管密度が血管造影スコアの増加はありました。対照的に、末梢動脈周囲の組織は、毛細血管密度のない強化が血管造影スコアの向上を示さなかった。これらの結果は、血管新生や動脈形成のいずれかに主に生じる冠状動脈および末梢動脈におけるVEGF治療に差動応答を示しています。 VEGFシグナル伝達経路の詳しい調査の結果、心血管系治療薬の設計上の潜在的な影響を与える可能性があります血管の開発のプロセスをより良く理解するために必要です。
NADPHオキシダーゼの負の調節因子としてのリン酸化P40PHOX
NADPHを犠牲にして酸素から（ - ）白血球のNADPHオキシダーゼはO（2）の生産を触媒する。酵素の活性化は細胞質因子P47（phoxの）、膜結合型チトクロムb（558）とP67（phoxの）、およびRAC2の相互作用を必要とします。両親媒性活性剤の非存在下でsemirecombinant無細胞系におけるオキシダーゼの活性化は、プロテインキナーゼCのもう一つの細胞質因子p40の（phoxの）によって細胞質因子P47（phoxの）のリン酸化によって達成することができることは最近であることが示されたセリンとNADPHオキシダーゼの活性化にスレオニン残基上でリン酸化が、刺激と抑制の両方の役割が報告された。本研究では、無細胞系にリン酸化されたP40（phoxの）の添加は、C-リン酸化P47（phoxの）プロテインキナーゼ、リン酸化p40の（phoxの）で認められない効果によって活性化NADPHオキシダーゼを阻害することを示しています。さらに、リン酸化p40の（phoxの）は、酵素の完全な活性化の前または後に追加された場合オキシダーゼを阻害する。プロテインキナーゼCのコンセンサス部位の直接的な突然変異誘発が発生するp40の抑制効果（phoxの）のために必要とされる私たちはスレオニン154のリン酸化を締結することができます。リン酸化変異体および非リン酸化変異体はまだプルダウンアッセイにP47（phoxの）とP67（phoxの）の両方と相互作用することができるが、トロンビン処理の際、タンパク質分解パターンは、リン酸化および非リン酸化変異体との間のコンフォメーションの違いを示唆している。我々は、スレオニン154にP40（phoxの）のリン酸化を仮定すると、阻害的役割とブロックオキシダーゼ活性化に向かってバランスをシフトさせる抑制コンフォメーションにつながります。
血管細胞のゲノムDNA、cDNA、成熟したC型ナトリウム利尿ペプチド遺伝子の塩基配列の機能解析
本研究の目的は、様々なC型ナトリウム利尿ペプチド（CNP）の配列（ゲノムDNA [CNPDNA]成熟したCNP [CNP22aa]の22アミノ酸をコードするcDNAをmRNAに由来する[CNPcDNA]、およびシーケンスの効果を調査することであった）プライマリブタの血管細胞の成長。
インターロイキン-6および心肺バイパスで心臓手術を受ける子どもの血清中のプロカルシトニン
私たちの研究の目的は、心肺バイパスを使用して外科的矯正を受け先天性心疾患児における全身性炎症反応を調査した。我々は、心肺バイパスに全身性炎症反応症候群のコンポーネントとしてインターロイキン6とプロカルシトニンを議論し、合併症のないコースの場合には、これらのパラメータの術後の動態を評価したかったのです。
C型ナトリウム利尿ペプチドは、気球拡張した腎動脈において再内皮化を損なうことなく、収縮性リモデリングを抑制する
C型ナトリウム利尿ペプチド（CNP）バルーン血管形成術に続いてブタ腎動脈の再狭窄にプラスミド対CNP蛋白質の局所的、リポソーム媒介遺伝子伝達の長期的影響を調べた。
MEDOS / HIAアシストデバイスと幼児と成人における機械的循環補助
機械的循環補助が正常に低心拍出量の患者に適用されます。 MEDOS / HIA-Systemは、小児および成人患者のための拍動、心室支援を提供しています。 MEDOSと13の連続した患者の経験が報告されます。周術期の生存率は84.6％、合併症は61％（31％thrombembolism、23％rethoracotomy、7％の感染症）が発生しました。サポートの平均期間は17.6だった+ / - 14.6日（1から45日間）。クレアチニン1.6から+ / - 1から1.4 + / - 0.8 mg / dLの;乳酸5.8 + / - 4.2から1.7 + / - 1.5（P - 2.3から2.7 + / - 1.6 mg / dLのビリルビンは、+ / 3.9から減少= 0.027;ウィルコクソン）。その後の心臓移植（13の6、46％）を受けたすべての患者は病院から退院した。患者の38.5％がない臓器提供は受信されませんでした。 MEDOS / HIA-システムと機械的循環補助は、移植へのブリッジング用に正常に実行することができます。二次器官の機能は、この拍動循環支援の下に改善します。出血と血栓塞栓症は、最も頻繁に合併症である。
マイクロリットルサイズのサンプルからの単一の生細胞の電子ソートおよびリカバリ
数千細胞以下を含むサンプルから特定の住んでいる細胞を選別すると回復は、このような幹細胞研究、細胞治療および細胞ベースの診断などの希少細胞の探査で大きなハードルとなっています。ここでは10万人以上の独立した電極と生存率と増殖能力を維持しながら、10,000個の細胞までの個人と平行単一細胞操作を可能にするセンサアレイを統合しマイクロチップに基づく新技術について説明します。操作は、電子インタフェースによって制御される動的な誘電泳動トラップを用いて行われる。また、ラベルの付いていない集団から個々の住んで蛍光を発する細胞をソートして回収することにより、チップの機能を示しています。
再狭窄の低減のためのC型ナトリウム利尿ペプチド：遺伝子導入は、単一のペプチドの管理上も優れている
再狭窄はまだバルーン拡張術やステント移植後の長期的な治療の成功を制限する重要な臨床的問題である。新しいアプローチが必要阻害する新生内膜の形成と同時に、再内皮化を推進しています。したがって、外膜リポソーム媒介C型ナトリウム利尿タンパク質（CNP）の遺伝子と再狭窄後の血管形成のためのブタモデルにおけるCNPのペプチドアプリケーションの長期的な治療効果を検討した。
小児の心臓移植後の神経再生：短時間心拍変動試験の結果
成人で報告されているように、心臓や心臓肺移植（TX）の後に子どもたちの短期的な心拍変動（HRV）に障害を検出します。 HRVの周波数領域解析を用いてドナーの心拍数に対する迷走神経と交感神経の影響を評価する。
固形臓器移植後の子供の移植後リンパ増殖性疾患の貧しい人々の生存のための危険因子として中枢神経系や骨髄への関与
固形臓器移植後の小児の移植後リンパ増殖性疾患（PTLD）の生存の予後因子を識別することができます。
血管形成術に続いて血栓症の可能性のあるソリューションとしてReendothelializationを損なうことなく、再狭窄の形成を阻害する？
ステント血栓症は、さまざまなタイプのステント留置後の重要な問題である。この問題に対する潜在的な解決策は、C型ナトリウム利尿ペプチド（CNP）のような異なった細胞タイプのデュアル·エフェクトと血管作用薬かもしれません。したがって、in vitroおよびCNPのin vivo効果のブタ再狭窄モデルで検討した。ブタの血管細胞の培養におけるCNPの遺伝子導入は、平滑筋細胞の増殖した（p <0.05）の30％削減まで認めたが、内皮細胞増殖のない抑制がCNPを使用していない。生体内で適用され、血管造影では、3ヵ月後CNP遺伝子またはβ-ガラクトシダーゼ（β-Gal）を制御遺伝子で処理されたバルーン負傷したブタ動脈の縮小再狭窄形成の傾向を明らかにした（2.59 + / - 2.04倍の減少、P = NS） 。組織学的には、形態計測では、CNPによる治療後に有意に減少し新生内膜形成を明らかにしたプラスミド（7.26 + / - 1.44倍に減少、p <.05）。エバンスブルー染色は、すでに3週間CNPを使用して、介入後の完全な内皮細胞の修復を実証した。 CNP遺伝子の伝達は、内皮の修復を損なうことなく、新生内膜形成の有意な阻害をもたらした。したがって、CNP遺伝子の使用は、亜急性または遅発性血栓症を防止しながら、再狭窄の形成を抑制するためのソリューションを提供することがあります。
メタアナリシスでは、薬剤溶出型ステント、ベアメタルステント、または血管形成術後の血栓症の関連リスクを表示します。
冠状動脈ステント血栓症は、さまざまなタイプのステント留置後の重要な問題である。本研究では、バルーン血管形成術に比べて薬剤溶出ステント（離散事象システム）、ベアメタルステント（BMSS）の使用に関連付けられているステント血栓症のリスクを検討する。 5612対7639対2994 DES、BMS、またはバルーン血管形成術で治療冠状動脈性心臓病患者を含む28の無作為化試験のメタ分析は、したがって、実施した。 DES対BMSの注入を比較すると、DESは15ヶ月（オッズ比[OR] = 0.86、95％信頼区間[CI] 0.58から1.3、P <0.48）に血栓症の危険を増加させることが見出されていませんでした。亜急性血栓症（SAT）またはDES対BMSSグループ（OR = 0.86、0.50から1.5、P、95％CI <0.6およびOR = 0.92、95の遅発性ステント血栓症（LST）の危険性に有意差もありませんでした％CI 0.50から1.68まで、それぞれp <0.78）。 BMSのバルーン血管形成術や移植を受けている患者でステント血栓症の発生率を比較すると、率が（OR = 0.93、95％0.61 CIにも似ていたバルーン血管形成術群（1.7％SAT）対BMS群（1.8％がSAT）のSAT 1.4、P <0.71）。最後に、離散事象システムのさまざまなコーティングのステント血栓症の発生に有意差は認められなかった。結論としては、DESの使用はBMSまたはバルーン血管形成術の注入と比較して、ステント血栓症のイベントに大きな影響を与えることが観察されていません。
胸部移植後の子供のワクチン予防可能疾患に対する血清学的耐性の欠如
我々は、後の子どもたちが心（HTX）または心臓肺移植（HLTx）は予防接種のスケジュールが完了している要因は血清免疫に影響を与えているかどうか、推奨される予防接種に対する防御抗体レベルを示すかどうかを調べた。小児胸部送信後の46人の患者に特異的な抗体の定量化 - 私たちは、断面ELISAを行った。調査結果は、ワクチン接種歴、送信時の年齢、臨床経過および免疫抑制レジメンに相関していた。我々は59％で30％と肺炎球菌に対するインフルエンザ菌b型に対して、22％に破傷風、患者の74％にジフテリアに対する防御抗体レベルを発見した。弱毒化生ワクチンに対する抗体濃度は、人生の最初の2年間に移植小児で有意に低かった。 34パーセント/ 63％で、早期移植の子供の81％、66％/ 94％、ムンプス30％/ 56％の風疹および水痘のために - 抗体は、後半の55％で麻疹のために欠席した。我々は、Txで低抗体濃度と年齢の有意な相関関係を発見した。防御抗体濃度のない患者は、ステロイドのかなり長い使用していた。予防接種スケジュールは、不完全または病院前のテキサス州日以上に関連付けられている患者の大半が遅れていた。我々の研究では、移植前の予防接種のスケジュールと、抗体レベルの移植後のモニタリングに近い付着が移植患者に必要とされるかを示します。
胸部移植後の子供にジフテリアと破傷風ワクチンに障害細胞性免疫応答
ジフテリアと破傷風ブースターワクチン接種の安全性と免疫原性は、胸部移植後28子どもたちで評価した。有害事象は患者日誌に記載されていた。血液は前に採取し、4週間の接種後だった。特異的な抗体濃度はELISA法により測定した。リンパ球は刺激の有無にかかわらず、フローサイトメトリーおよび増殖アッセイによる活性化マーカー（CD25、HLA-DR）の発現を調べた。ワクチン接種後の抗体価は、より多くのジフテリアに対する防御抗体レベルを有する患者（P <0.02）、破傷風（P <0.001）で、ワクチン接種前（P <0.001）よりも高かった。ワクチン接種後の非刺激または刺激の文化ではなく増殖の増加はありませんでした。ワクチン抗原によって活性化Tリンパ球の数は、事前と事後の予防接種同様であった、刺激および非刺激CD4（+）T細胞上のHLA-DR発現はは大幅に増加した。抗体の増加は、負のタクロリムス投与量と相関していたし、障害細胞性免疫は、高用量タクロリムスとステロイドの使用に関連していた。有害事象は、一般集団と同等であった。重篤な有害事象と拒絶反応は発生しませんでした。不活化ワクチンの接種は、胸部移植後の免疫抑制子供の安全に行われ、大多数の患者で防御抗体レベルを誘導することができます。特定の細胞性免疫の障害の誘導は、免疫抑制の強さと相関していると抗体の減少の持続可能性を説明することがあります。
