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Articles by Alice A. Bickerstaff in JoVE
JoVE General
Murine Renal Transplantation
1Department of Surgery, The Ohio State University, 2Integrated Biomedical Sciences Graduate Program, The Ohio State University
Renal Transplantation bei Mäusen ist eine technisch anspruchsvolle Verfahren, dass eine sorgfältige postoperative Betreuung und Behandlung für den Erfolg benötigt.
Other articles by Alice A. Bickerstaff on PubMed
Der Nachweis, Dass Eine ähnliche Reihe Von Alloimmuner Antworten Können in Murinen Und Humanen Allogenen Empfänger Zu Entwickeln
Allograft Akzeptanz Trotz Differential Stamm-spezifische Induktion Von TGF-beta/IL-10-mediated Immunregulation
Ein Fließen Cytometry Basierende Methode Zum Erkennen Von Antikörperantworten Murinen Zytomegalievirus-Infektion
Basiert auf Zielzellen infiziert mit grün fluoreszierenden Proteins beschriftet murinen Zytomegalievirus (GFP-MCMV) und dual Farbe Durchflusszytometrie zum Nachweis von Antikörpern gegen MCMV wird beschrieben. Kinetik der Anti-MCMV-IgG-Antikörper-Reaktion wurde nach der Optimierung Bedingungen für diese Technik, anfällig (BALB/c) und (C57BL/6) Maus Resistenzen nach primären MCMV-Infektion getestet. Zuvor wurden veröffentlichte Antikörper Kinssetics anfällig Mäuse, mit Peak-IgG-ansprechen gesehen etwa 8 Wochen nach der primären Infektion, Senkung bis 20 Wochen nach der Infektion bestätigt. Im Gegensatz dazu zeigte MCMV beständig C57BL/6 Mäusen signifikant niedrigere IgG-Antikörperantworten als anfällig Mäuse. Obwohl verschiedene Techniken zum Erkennen von murinen Antikörper-Reaktionen auf MCMV, nukleare anti-complement Immunfluoreszenz, virale Immunoblotting Ergänzung Fixierung, indirekte Immunfluoreszenz, indirekt Hemagglutination und Enzym-mochte Immunosorbent Assay Techniken, zuvor beschrieben wurden sind diese Techniken alle zeitaufwändig und mühsam. Die Technik dargestellt ist eine einfache Zeit effiziente Alternative zu bisherige MCMV Antikörperantworten bei experimentell infizierten Mäusen zu erkennen.
Bewertung Der Immun-Verordnung Bei Transplantationspatienten Unter Verwendung Der Trans Vivo Verzögerte Art Überempfindlichkeit Probe
Allograft Empfänger IL-10 und/oder Umwandlung von Wachstumsfaktor-Beta (TGF-Beta) abhängigen entzündungshemmende T-Zell-verzögert Typ Überempfindlichkeit (DTH) Antworten auf Spender abgeleitet Antigene oder regulatorische T-Zell-Antworten, sind bei Nagetieren erprobt und transplant Patienten, die unter Verwendung einer zuvor beschriebenen Trans Vivo-DTH-Probe. Wir diese Probe verwendet, um festzustellen, die Inzidenz von Empfänger entzündungshemmende T-Zell-Antworten zum Spender-Antigene in einer großen Kohorte (n = 420) der primären Nieren und simultane Nieren-Pankreas Transplantationspatienten getestet einen Mittelwert von 4,8 Jahre nach der Transplantation. Die Ergebnisse wurden mit klinischen Ergebnissen und das Vorhandensein von nachweisbaren zirkulierende Alloantibodies verglichen. Wir fanden eine unerwartet hohe Inzidenz (21,9 %) dieser entzündungshemmende T-Zell-Reaktion gegen Antigene des Spenders in diese Empfänger. Es gab eine signifikante Korrelation zwischen dieser T-Zell-Phänotyp und die Anwesenheit von zirkulierenden Alloantibodies nachweisbar (p = 0,03). Es gab keine Korrelation zwischen dieser T-Zell-Phänotyp und dem Grad der HLA-Konflikt. Darüber hinaus das Vorhandensein einer entzündungshemmende DTH Reaktion gegen Antigene des Spenders mit einem verbesserten klinischen Ergebnis ein Median von fast 5 Jahre nach der Transplantation nicht korrelieren. Diese Forschungsergebnisse legen nahe, dass die Erkennung einer entzündungshemmende T-Zell-Antwort gegen Antigene des Spenders nicht Patienten identifizieren, die Transplantat schützende, regulatorische T-Zell-Antworten entwickelt haben.
Spontane Renal Allograft Akzeptanz "rechtlichen" Dendritischen Zellen Und IDO Zugeordnet
MHC-nicht übereinstimmende DBA/2 renale Herztransplanate sind spontan von C57BL/6 Mäusen von schlecht akzeptierten verstandenen Mechanismen, aber immun-Verordnung und Transplantat Akzeptanz ohne exogene Immunmodulation entwickeln. Frühere Studien haben gezeigt, dass dieses Modell der spontanen renal Allograft Annahme TGF-Beta-abhängigen immun Verordnung vorschlagen für regulatorische T-Zellen eine Rolle zugeordnet. Die aktuelle Studie zeigt, dass TGF-Beta-immun-Verordnung 30 Tage Posttransplant entwickelt, sondern ist von 150 Tagen Posttransplant verloren. Trotz Verlust der nachweisbaren TGF-Beta-immun-Verordnung, renale Herztransplanate für normal zu funktionieren weiterhin > 200 Tage Posttransplantation. Auf Grund ihrer Fähigkeiten vor kurzem beschrieben immunregulatorische wir studierte IDO Ausdruck in diesem Modell und gefunden, dass Intragraft IDO-Genexpression schrittweise erhöht im Laufe der Zeit, und dass IDO im "rechtlichen" dendritischen Zellen (RDC) kann dazu beitragen, Verordnung, die langfristige Erhaltung der renalen Herztransplanate zugeordnet. Immunohistochemistry Evaluierung bestätigt die Anwesenheit von Foxp3 + T-Zellen und IDO + DCs in anerkannten renale Herztransplanate, und Lokalisierung von beide Zelltypen in anerkannten Herztransplanate legt die synergistische Beteiligung Allograft Annahmeverzug. Interessant ist, in der Zeit RDCs im Milzen der Allograft Acceptors nachweisbar geworden, akzeptieren ca. 30 % von diesen Mäusen mit Spender passende Haut Herztransplanate in Frage gestellt diese Hauttransplantationen, Fortschreiten zu "wahre" Toleranz demonstrieren. Zusammen, schlagen diese Daten, dass spontane renal Allograft die Annahme entwickelt sich durch eine Reihe von Transienten Mechanismen, beginnend mit TGF-Beta und regulatorische T-Zellen, die zusammen Entwicklung robuster Verordnung RDC und IDO zugeordneten stimulieren können.
