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Articles by Ana Yepes in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Singola cella Analisi Bacillus subtilis I biofilm usando la microscopia a fluorescenza e citometria a flusso
Institute for Molecular Infection Biology (IMIB), University of Würzburg
Biofilm microbici sono generalmente costituiti da distinti sottopopolazioni di cellule specializzate. Cella singola analisi di queste sottopopolazioni richiede l'uso di reporter fluorescenti. Qui descriviamo un protocollo di visualizzare e monitorare diversi subpopulationswithin
Other articles by Ana Yepes on PubMed
Sovrapproduzione Di Thermus Enzimi in Streptomyces Lividans Ad Alto Livello
Biotecnologia ha bisogno di esplorare la capacità degli organismi differenti di sovrapproduzione di proteine di interesse a basso costo. In questa carta, mostriamo che Streptomyces lividans è un host adatto per l'espressione dei geni di Thermus thermophilus e relazione la sovrapproduzione di proteine corrispondente. Questa capacità è stata confermata dopo la clonazione dei geni corrispondenti a una fosfatasi alcalina (un enzima periplasmico in T. thermophilus) e quello corrispondente a un beta-glicosidasico (un enzima intracellulare) in Escherichia coli ed in S. lividans. Confronto della produzione in entrambi gli host ha rivelato che l'espressione della proteina attiva realizzata in S. lividans era molto superiore in e. coli, soprattutto nel caso dell'enzima periplasmico. Infatti, il peptide segnale nativo della fosfatasi thermophilus T. era funzionale in S. lividans, in corso di elaborazione presso lo stesso legame peptidico in entrambi gli organismi, consentendo la sovrapproduzione e la secrezione di questa proteina per il surnatante di cultura S. lividans. Come e. coli, la termostabilità delle proteine espresse ha permesso un fattore enorme purificazione dopo denaturazione termica e precipitazione delle proteine ospite. Concludiamo che S. lividans è un ospite molto efficiente e industria-friendly per l'espressione delle proteine termofili da Thermus spp.
Espressione Del Gene Di Streptomyces Lividans PST è Regolata Dalla Fonte Di Carbonio Ed è Parzialmente Indipendente Del Regolatore PhoP
File PST è una lipoproteina di fosfato-associazione che fa parte del sistema di trasporto ad alta affinità fosfato. Streptomyces lividans accumula quantità elevate di proteina PST nel surnatante liquido culture coltivate in presenza di fonti di carbonio differenti, come il fruttosio o il mannosio, ma non in presenza di glucosio o in mezzo complesso basale.
Romanzo Sistemi Bi-componente Impliciti Nella Produzione Di Antibiotici in Streptomyces Streptomycesè
L'abbondanza di sistemi del due-componente (TCSs) nel genoma di Streptomyces Streptomycesè mini indica la loro importanza nella fisiologia di questo batteri del suolo. Attualmente, TCSs diversi hanno stato relative al regolamento agli antibiotici, e lo scopo di questo studio è stata la caratterizzazione dei cinque TCSs, selezionati da omologia di sequenza con il sistema ben noto absA1A2, che potrebbe anche essere associato con questo importante processo. Null mutanti del cinque TCSs sono stati ottenuti e due mutanti (ΔSCO1744/1745 e ΔSCO4596/4597/4598) ha mostrato differenze significative nella produzione antibiotica e differenziazione morfologica e sono stati rinominati come abr (regolatore di antibiotico). Nessun cambiamenti rilevabili nella produzione di antibiotici sono stati trovati i mutanti nei sistemi che includono ORFs SCO3638/3639, SCO3640/3641 e SCO2165/2166 in una qualsiasi delle condizioni di coltura dosate. Il sistema SCO1744/1745 (AbrA1/A2) è stato coinvolto nella regolazione negativa di produzione antibiotica e ha agito anche come un regolatore negativo della differenziazione morfologica. Al contrario, il sistema SCO4596/4597/4598 (AbrC1, C2, C3), composto da due chinasi istidina e regolatore di una risposta, ha avuto effetti positivi su entrambi lo sviluppo morfologico e produzione di antibiotici. Analisi di Microarray della transcriptomes ΔabrC1/C2/C3 e selvaggio-tipo rivelato rispettivamente downregulation dei geni actII-ORF4 e cdaR, il actinorhodin e regolatori specifici pathway antibiotici calcio-dipendente. Questi risultati hanno dimostrato il coinvolgimento di questi nuovi sistemi bicomponenti in produzione antibiotica e differenziazione morfologica di approcci diversi. Uno è un regolatore negativo pleiotropico: abrA1/A2. L'altro è un regolatore positivo composto da tre elementi, due chinasi istidina e regolatore di una risposta: abrC1/C2/C3.
Espressione Indotta Da Streptomicina in Bacillus Subtilis Di YtnP, Una Proteina Omologa Lactonase Che Inibisce Lo Sviluppo E La Streptomicina Produzione in Streptomyces Griseus
Bacillus subtilis induce l'espressione del gene ytnP in presenza della streptomicina antimicrobica, prodotto dal batterio Streptomyces griseus Gram-positivo. ytnP codifica per una proteina omologa lactonase che è in grado di inibire la via di segnalazione necessaria per la produzione di streptomicina e lo sviluppo del micelio aereo in S. griseus.
