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Articles by Andrea L. Ambrosio in JoVE
JoVE General
In vivo et in vitro de l'adaptateur-clathrine Interaction
Department of Biochemistry and Molecular Biology, Colorado State University
Clathrine endocytose dépend de protéines adaptatrices qui coordonnent la sélection de fret et de l'assemblage manteau de clathrine. Nous décrivons ici les procédures pour étudier l'adaptateur clathrine interaction physique et imagerie des cellules vivantes approches utilisant comme modèle la levure Sla1p endocytose protéine adaptatrice.
Other articles by Andrea L. Ambrosio on PubMed
Isolement Des Lectines De Deux Nouveaux Mannan - Et L-fucose-liaison De L'algue Verte Enteromorpha Prolifera : Caractérisation Biochimique De L'EPL-2
EPL-1 et EPL-2 représentent les lectines isolées de l'algue verte Enteromorpha prolifera. Les lectines sont des protéines de glycosylées de chaîne unique, 20 – 22 kDa. Analyse de la séquence N-terminale des peptides qui représentent plus de 70 % de leurs structures primaires montre que EPL-1 et EPL-2 représentent de nouvelles protéines. Expériences d'équilibre de sédimentation-diffusion ont montrent que EPL-1 et EPL-2 masses moléculaires moyennes de 60000 +/-6000 Da (EPL-1) et 59500 +/-3000 Da (EPL-2), indiquant que l'EPL-1 et EPL-2 ont une tendance à l'auto-association en plus ordre agrégats, éventuellement des homodimères et des HOMOTETRAMERES, en équilibre. La spécificité de liaison aux glucides de l'EPL-2 a été étudiée par dosage immunoenzymatique lectine et les mesures de fluorescence intrinsèque. Les résultats montrent que le site de combinaison d'EPL-2 est compatible avec le D-mannose et le L-fucose, qui se partagent la conformation des groupes hydroxyles aux positions 2 (axiale) et 4 (équatoriale) et comprend des sous-sites pour les substituants à O1 et pour les résidus de mannose ramifiés.
Signalisation De Dorsale-ventral Embryonnaire : Sécrétée Crépus Protéines Comme Inhibiteurs Des Protéases à Tolloid
Nous rapportons ici un rôle inattendu pour la protéine Frizzled sécrétée (sFRP) grillé/Ogon comme un inhibiteur de la réaction protéolytique extracellulaire qui contrôle BMP signaling au cours de la gastrulation Xenopus. Les expériences de microinjection suggèrent que le domaine Frizzled de grillé régule l'activité des Xolloid liés (Xlr), une métalloprotéase qui dégrade Chordin, par la voie moléculaire suivante : Szl-| XLR-| CHD-| BMP--> P-Smad1--> Szl. Dans les épreuves biochimiques, la protéinase Xlr a des affinités similaires pour son substrat endogène Chordin et pour son inhibiteur compétitif grillé, qui résiste à la digestion enzymatique. Taux extracellulaires de grillé et Chordin dans les constantes de réaction gastrula embryon et enzyme était tous dans la gamme de 10(-8) M, compatible avec un rôle physiologique dans la régulation de la structuration de la dorsale-ventral. Grésillait est également un inhibiteur naturel de BMP1, une métalloprotéase de Tolloid d'intérêt médical. En outre, la souris sFRP2 inhibée Xlr, suggérant un rôle plus large pour ce mécanisme moléculaire.
Crossveinless-2 Est Un Inhibiteur De Rétroaction BMP Qui Lie Chordin/BMP Pour Réglementer La Structuration Embryonnaire De Xenopus
Vertébrés Crossveinless-2 (CV2) est une protéine sécrétée qui peut potentialiser ou antagoniser BMP signaling. Grâce à des expériences embryologiques et biochimiques, nous constatons que: (1) CV2 fonctionne comme un inhibiteur de rétroaction BMP4 dans les régions ventrales de l'embryon de Xenopus. (2) CV2 complexes avec Twisted gastrulation et BMP4 ; (3) CV2 n'est pas un substrat pour tolloid protéinases ; (4) CV2 se lie à la protéine purifiée de Chordin avec une haute affinité (K(D) dans la gamme de 1 nM) ; (5) CV2 se lie encore plus fortement pour les fragments protéolytiques Chordin résultant de la digestion Tolloid ou pleine longueur complexes Chordin/BMP ; (6) CV2 l'appauvrissement entraîne l'embryon de Xenopus devenir hypersensible aux effets anti-BMP de Chordin surexpression ou l'inhibition de la tolloid. Nous proposons que l'interaction CV2/Chordin peut aider à coordonner la diffusion de BMP vers la face ventrale de l'embryon, en veillant à ce que PGO libérée de Chordin inhibition par pic de cause de protéolyse tolloid niveaux de signalisation.
