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Articles by Andreas Franz in JoVE
JoVE General
显微切割的黑寡妇蜘蛛丝绸生产腺体
Department of Biological Sciences, University of the Pacific
在这里，我们描述了一个有效的策略，以消除雌性黑寡妇蜘蛛腹部的丝生产腺体。此过程允许的七个不同的丝绸生产腺体高度纯化的时尚，一个调查研究蜘蛛丝的生产和纤维大会的重要的过程中迅速隔离。
Other articles by Andreas Franz on PubMed
远距离的糖基转移反应在气相中的证据。
远距离糖基转移反应，指出碰撞诱导解离傅里叶变换 （CID 英尺） 质谱苄胺标记和标记 9 aminofluorene 奶-N-fucopentaose 的我 (LNFP 我) 和奶-N-difucohexaose 我 (LNDFH 我）。转移反应有人为质子化分子而不是 sodiated 分子。远距离的糖基转移反应涉及优先标记 LNDFH I.CID 的两个 L-岩藻糖单位之一实验与标记 LNFP 我和标记的 LNFP II 确定与最大的移民倾向的岩藻糖。进行了进一步的试验，以确定迁移的岩藻糖的最终目的地。分子建模支持实验和反应机制的建议。
非共价杯芳烃-氨基酸络合物形成进行质谱联用。
氨基酸之间形成的非共价键物和衍生物的杯 [6] 芳烃在进行质谱质谱法得到遵守。甲基、 乙基、 和丙酯衍生物的杯 [6] 芳烃产生氨基酸配合物，虽然小杯 [4] 芳烃类似物却没有这样做。同样的长链的杯 [6] 芳烃和杯 [4] 芳烃没有生成络合物。氨基酸配合物几乎所有 20 种氨基酸的飞行时间 (TOF) 分析中观察到。在傅里叶变换质谱法 (飞轮) 分析中，但是，只有最基本的氨基酸精氨酸、 组氨酸、 赖氨酸形成稳定复合物。配合了丰富基质辅助激光解吸电离 （马尔迪) 条件下，这表明主机和来宾的良性互动。
Disaccharidic 2，3-enopyranosyl 氰化物和 2-C-2-脱氧 Pyranosyl 轻度合成氰与 Hg(CN) 2/HgBr 2/TMSCN。
单声道和 disaccharidic 每个-O-乙酰化 glycals Lewis 酸催化二聚了 di 和 tetrasaccharidic O-乙酰 C-苷，分别。2、 3 Enopyranosyl 氰化物新的、 温和的异 S (N) 从每个-O-乙酰化 glycals'-乙酰氧基位移与 Hg(CN) 2/HgBr 2/TMSCN。每个-O-乙酰化 2-C-2-脱氧-pyranoses 都将转换为 pyranosyl 氰化物相同的试剂。从二聚体与 D-半乳糖-和 L-fuco-配置空前乙酸消除伴随 S (N)-在这些条件下的位移。耦合常数为 2，3-enopyranosyl 系统的新的 (1) 设置 H 核磁共振用于组态指派的复杂的四模仿。
多肽编码组合库高吞吐量一珠一化合物方法： 单个 TentaGel 珠进行质谱-质谱分析。
药理有前途化合物 （铅化合物） 从组合库鉴定常常受到雇用的分析技术的吞吐量。傅里叶变换质谱 (飞轮) 提供了高灵敏度、 大规模精度 (m/Deltam > 500 000) 和测序能力。给高吞吐量分析单珠从与基质辅助激光解吸/进行质谱质谱肽编码组合库的迅速和有效的方法。确定和结构上的特点进行质谱-飞行时间 (TOF) 和超高进行质谱傅立叶变换离子回旋共振 （FT ICR） 质谱单珠上编码的多肽。制定一项战略的探针在样品制备，尽量减少处理的珠子。
去质子 C-H-化介导远程的 Syn 轴氧基 — — 空前的双键形成二聚体从 L Fucal 氰化后。
更换的异醋酸氰化物集团在二聚体的 di-O-乙酰-L-fucal 轻度路易斯酸的行动 [Hg(CN) 2-HgBr (2)-我 (3) SiCN]，不仅导致所需的变换，而且在引入额外的双键 C 2A 与 C 3A 之间。因为它的配置，远程 C 4A 乙酰氧基组可能便利，去质子化运作作为内部的基地。1 H 核磁共振光谱和 x 射线晶体学表明构象的环 A 和 B 中生成的 C 链接 disaccharidic 糖基氰化物，4-O-acetyl-2-C-(4-O-acetyl-2,3-dideoxy-alpha-L-threo-hex-2-enopyranosyl)-2,3-dideoxy-2-eno-alpha-L-fucopyranosyl 氰化物，在溶液中其相对方向几乎完全相同的晶体结构。
改进毛细管电泳分离和质谱检测的低聚糖。
我们制定了 CE 标记有 N 季铵盐苄胺低聚糖的结构异构体的分离方法。减少两端聚糖是由还原胺化跟季铵化以产生一个固定的阳离子标签与苄胺衍生化。苄胺衍生化的低聚糖铵醋酸缓冲和离线的基质辅助激光解吸电离 （马尔迪) MS CE 紫外分析。该方法被应用到 1 nmol 样本 (LNDFH 1) 模型低聚糖。此示例从 38 fmol 稀释的标准被检测到。苄胺标有产品的季铵化大大改善 CE 中性低聚糖以及几个结构异构体分离。两个 hexasaccharide 异构体 （LNDFH 和 LNDFH 第二） 是解决使用铵醋酸缓冲区的基线。这种方法也是成功应用到分析从核糖核酸 B.糖蛋白释放的低聚糖释放的跟些糖 6 pmol 的显示与对应 100 fmol 的一个组件的所有组件的检测。Micropreparative 集合的 CE 清理启用成功离线 CE-马尔迪-MS 没有附加的示例。本报告提供了简单和快速的方法来分离和分析低聚糖。
对新的多功能寡糖标记进行标记的低聚糖进行质谱 TOF 和-质谱分析。
1 度氨基组与新的多功能低聚糖标签是合成和特点。低聚糖标签还原胺化，引入几个中性低聚糖和衍生品进行分析的基质辅助激光解吸/电离 (马尔迪） 飞行时间 (TOF) 和 (ESI) 电喷雾电离质谱分析法。它表明贴标的反应是令人满意，只要 50 pmol 的起始材料可以有效地标记有副反应的最小损失。从核糖核酸酶 B 释放高甘露糖蛋白糖的混合物被标记。标签似乎不干扰质谱法测定低聚糖的结构表征。带标签的低聚糖的 N 季铵化导致大大增加只要 100 fmol 上检测到的探针检测的灵敏度。氘编码的标记为低聚糖混合物，混合物成分的相对丰度进行了调查。一种协议的高效液相色谱法标记低聚糖的混合物的色谱分离开发，并在这里报道。
Tris(1,9-diethyladeninium) 三 Diiodide。
复合标题 x 射线分析揭示了三个 crystallographically 不同阳离子 1.9 diethyladeninium、 两个碘化阴离子和非对称单元，提供六个残留和公式 3C9H14N5 + 一三阴离子。I3-.2I-.标准嘌呤术语用来标识每个腺嘌呤结构的原子。氢键是观察到之间原子 N6、 N7 一双阳离子 [N...N = 4/2.902 2.885 (3) 和 2.854 3 2.854 （3） A]，与其他氢键对我阴离子通过其他 N6 H 原子 [N...我 = 3.708 (3) 3.738 (3) 和 (3) A 3.638]。三阴离子不参与氢键。债券的长度和角度的 1.9 diethyladeninium 阳离子与文献值相比较，并确认亚胺 tautomer 的形成。
二硫化债券模式的大马哈鱼蛋奇努克鲑鱼 Tshawytscha 第 24 K 凝集。
特定的半乳糖凝集素的奇努克鲑鱼 tshawytscha 蛋从 SEL 24 K 二硫键质谱法确定。四预测中硅工具被用来确定序列和可能的二硫键位置的半胱氨酸氧化状态。胰酶消化、 高效液相色谱法分离和化学修饰的组合被用于建立七个二硫键和一对免费的半胱氨酸的位置。后水解，包含一个或两个二硫键的肽确定了减少和质谱图比较。进行质谱质谱化学改性 (iodoacetamide) 和硅消化中得到支持。二硫键的分配进一步证实了质谱碎片研究，其中包括源代码中解离 (ISD) 和碰撞诱导解离 (CID)。实验确定的二硫键和免费的 Cys 残留只是部分符合那些由几种自动化公共域算法生成的。
Deglycosylated Anti-amyloid Beta 抗体减少小胶质细胞吞噬功能和细胞因子的生产，同时保留的能力，促使淀粉样肽螯合。
淀粉样 beta (Abeta) 的积累是阿尔茨海默病的病理特点及降低 Abeta 是一种有前途的治疗方法。完整的反 Abeta 抗体减少脑 Abeta 通过两个途径： 增强小胶质细胞吞噬功能和 Abeta 转让从大脑到边缘 (Abeta 螯合作用）。虽然激活小胶质细胞，这是必不可少的小胶质细胞吞噬功能，一定伴随意外的 neuroinflammatory 事件的固碳能力似乎不会链接到这种影响。我们和其他群体已经发现简单 Abeta 绑定代理足以减少脑 Abeta 通过螯合作用通路。在这项研究，我们旨在消除潜在有害从抗体的免疫激活而不会影响诱导固碳能力。免疫球蛋白的糖部分认真参与包括 Fc 受体和补体 c1q ； 免疫效应器的交互消除了这些交互，同时抗原 （Abeta） 的蛋白质去糖基-亲和维护。在此研究中，我们调查是否 deglycosylated 抗 Abeta 抗体减少小胶质细胞吞噬功能和 neuroinflammation，而不会改变的能力，促使 Abeta 螯合。Deglycosylated 抗体保持 Abeta 绑定亲和。Deglycosylated 抗体并没有能够加强 Abeta 吞噬功能或主要培养小胶质细胞，而完整的抗体这样做大大释放的细胞因子。静脉注射 deglycosylated 抗体升高血浆 Abeta 和诱发类似或更大程度上与在阿尔茨海默氏症转基因小鼠模型中没有完整抗体或与 Abeta 斑块病理比较 Abeta 螯合作用。我们得出的结论 deglycosylated 抗体有效地诱导 Abeta 固不挑起 neuroinflammation ；因此，这些 deglycosylated 抗体可能是最佳的螯合疗法治疗阿尔茨海默病。
叶酸偶联亲肿瘤靶向药物输送的合成。
叶酸是专门在其 γ-羧基组，以保留其配体结合活动到叶酸受体 α (FRalpha) 目前对 HeLa 细胞衍生化。由共轭链长伯胺直接或通过二胺连接器到叶酸的 γ-羧基组编写了两亲分子标记的叶酸。此外编写了叶酸亲标有荧光 7-氨基-4-carbamoylmethylcoumarin (ACC)，若要可视化的亲中叶酸受体阳性细胞吸收。新的化合物的结构进行了核实质子核磁共振和进行质谱 TOF 质谱法。亲形成胶束在水中。临界胶束浓度 （诊所） 是由叶酸亲和上升的遗传物质标记双亲分子毛细管高度方法的芘荧光方法决定的。亲军在 ph 值为 8 的缓冲溶液中加以分析和从 2 到 64 microM。胶束的形成增加溶解度的紫杉醇，模型的亲脂性抗癌化合物，80%以上。大量的遗传物质标记双亲分子是内在化成癌细胞已知表示 FRsalpha 与 caco-2 细胞不表示 FRalpha 相比。因此，叶酸标记亲显示承诺靶向 FRalpha 表示肿瘤细胞的抗肿瘤药物。
表达式和重组人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂 (公司) 蛋白的毕赤酵母中的表征。
人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂 （公司） 表明拥有 anti-protease、 抗炎和抗菌性能。它在唾液中的存在被相信是口头传播人类免疫缺陷病毒-1 的一个主要障碍。11.7KDa 肽是分泌，nonglycosylated 蛋白质丰富的二硫键。目前，重组公司才可用作为一种昂贵的细菌表达产品。我们调查了甲醇酵母毕赤酵母中产生和分泌公司用 C 终端 c-myc 和 polyhistidine 标记的实用程序。Post-transformational 矢量放大协议被用来隔离与增加的拷贝数株，培养参数不尽相同，以优化公司表达。分泌、 重组蛋白就会从无细胞发酵培养基与钴亲和层析分离允许的分离纯化过程的修改。本源性酵母公司表明它具有 anti-protease 的活动，商业上可用的细菌产品相媲美。因此，体育酵母生产公司的结构功能分析研究，以及广泛的潜在治疗应用提供了高效、 具有成本效益的系统。
气相争先恐后的二硫化债券基质辅助激光解吸电离/质谱法分析过程。
描述光诱导激进二硫键气相期间基质辅助激光解吸电离/质谱法 (进行质谱 MS) 置乱的证据。有人指出胰酶肽胰岛素的分析过程和证实测定从奇努克鲑鱼 tshawytscha 的鼠李糖结合凝集素 SEL24K 二硫键的现象。建议这个令人吃惊的置乱的可能机制。这一发现，尽管在 SEL24K 中的二硫化债券模式由进行质谱质谱法结合多酶消化战略毫不含糊地分配。找到该模式是对称的 SEL24K 串联重复序列中。据我们所知的最好的这是二硫键争先恐后气相进行质谱-质谱法分析过程中的第一次报告。这一观察已明确分配的二硫键的重要影响。
分泌蛋白水解的外源蛋白融合大肠埃希氏大肠杆菌麦芽糖结合蛋白在毕赤酵母中。
大肠埃希氏大肠杆菌麦芽糖结合蛋白 (MBP) 已被利用作为平移融合伙伴提高外国蛋白在大肠杆菌中进行表达。当位于的 N 终端向其货物蛋白，MBP 增加细胞内蛋白质的溶解度和细菌系统的改善分泌蛋白的出口。我们初步探讨了是否 MBP 甲醇酵母毕赤酵母中，流行的外源蛋白表达真核主机具有相同的效果。时 MBP 融合作为 N 终端合作伙伴到几个 C 终端货物蛋白质表示，此酵母蛋白质降解发生之间两个多肽，并且 MBP 达成其货物孤寡老人的胞外区域。然而中的两个三个实例，货物蛋白达到胞外区域以及和其初始附件 MBP 增强及其分泌物从该单元格。虽然它没有导致更改蛋白酶在目标站点中融合蛋白，所确定的质谱广泛诱变的髓鞘碱性蛋白和其 C 终端货物蛋白质之间的分隔区域可能不会阻碍劈裂。两者合计，这些结果表明无体育酵母蛋白酶 MBP 域，包括分隔和货物区域的不同地点 C 终端地区攻击但 MBP 域可仍采取行动，加强某些货物蛋白质的分泌。
加强的生产和生物活性人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂 (公司) 在毕赤酵母中的一种改进的方法。
人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂 (公司) 是 11.7 的 kD 富含半胱氨酸蛋白，已被证实拥有 anti-protease、 抗炎的抗菌性能。通过使用生产过剩蛋白质二硫键异构酶 (PDI) 的毕赤酵母工程菌，我们获得大于 5 倍的更高水平的公司比株表示正常水平的 PDI 和包含公司基因的多个副本。PDI 水平升高还通过帮助它实现适当的三级结构增强分泌的公司的特定活动。质谱法分析表明有更多的公司生产的相比，在正常 PDI 水平与菌株生产公司的 PDI 表达应变二硫键。虽然其他人已经利用了类似的策略，以增加产量，我们相信这是被证明为加强折叠，从而提高生物活性蛋白制作在酵母体育酵母中的 PDI 过度表达的第一个示例。
从梨状蛛丝蛋白 2，发现在 Orb 编织蜘蛛附件光盘胶丝蛋白纺人造蜘蛛丝纤维。
蜘蛛附件光盘蚕丝纤维是纺成粘性液体，迅速固化，胶合拉索与运动或 web 建设为基底的真丝纤维。在这里我们报告的鉴定和人工纺的新型附件光盘胶丝，梨状蛛丝蛋白 2 (PySp2)，从金色 orb 韦弗 Nephila clavipes。MS 研究支持 PySp2 是纺成附件光盘的梨状腺的成分。PySp2 蛋白质结构的分析表明，相对于其他丝绸家庭成员，包括 cob 韦弗胶丝素 PySp1 序列发散。PySp2 包含由两个 subrepeat 单位组成的内部块重复： 一个由 Ser、 谷氨酰胺，和 Ala 和富含其他脯氨酸占主导地位。人工旋转的重组 PySp2 截断显示 Ser 谷氨酰胺 Ala 富 subrepeat 是足够的高分子谷蛋白亚基和随后的纤维形成的程序集。这些研究支持这两个 orb 和 cob 编织蜘蛛已经高度极地块重复序列与组装成纤维，提出一项战略，在液体环境中的附件光盘允许纤维制作的能力。
5' 非编码区 (5'UTR) 的醇氧化酶 1 (AOX1) 分析基因重组蛋白在毕赤酵母中的表达。
毕赤酵母是甲醇酵母的基因表达价值为工业、 制药和基本研究目的的一千多名外源蛋白工程化。在大多数情况下，5' 非翻译区 （编码） 的醇氧化酶 1 (AOX1) 基因融合到此酵母蛋白表达的重组基因的编码序列。因为 AOX1 5'UTR 对蛋白表达的影响不已知的以减少或增加这一区域的长度进行定点突变。这两种类型的更改了显示影响转化效率，谈话内容不稳定。虽然明显增加 5 ' UTR 长度比例的方式减少的 β-半乳糖苷酶记者表达，删除分析表明 AOX1 5'UTR 包含复杂混合物的积极和消极的顺式作用元件，建议建设的合成 5'UTR 优化为更高水平的表达可能具有挑战性。
