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Articles by Angela L. Elwell in JoVE

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10ナノグラムのトータルRNAからシングルリードとペアエンドのmRNA - seqのイルミナライブラリ


JoVE 3340 10/27/2011

1Regenerative Biology, Morgridge Institute for Research, 2Department of Cell & Regenerative Biology, University of Wisconsin, 3Department of Molecular, Cellular, & Regenerative Biology, University of California

ここでは、T7リニアRNA増幅に基づく遺伝子発現解析用のライブラリーのシークエンシングの両方シングルリードとペアエンドイルミナのmRNA - seqの製造方法を説明します。このプロトコルは、トータルRNAを始めるのは10ナノグラムを必要とし、全体の転写産物を表す非常に一貫性のあるライブラリを生成します。

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親の環境次の世代の成長と発展シロイヌナズナの種子サイズ効果からを分離します。

植物の成長と開発は深く影響実験室実験は通常コントロールする試行環境条件によって。しかし、成長条件は間または研究所とし、開発が知られている植物の成長のこれらの違いの影響範囲内であっても統一されていません。野生型シロイヌナズナとの実験は、成長と開発、次世代の親の環境および種子の大きさの影響を定量化する設計されました。種子の 1 つ多くだった六つの環境の部屋で植えし、成熟に成長します。生産種子は機械的に、一般的な環境で成長し、一連のライフ サイクルにわたるアッセイに受ける小規模および大規模サイズのクラスにふるわれただった。分散分析の種子サイズ効果主根の成長と重力屈性、しかしまた開花時期に影響を与える開発の初期段階、特に重要なことを実証しました。親の環境では、次代の発芽時間、開花、子孫を生産する種子の重さを影響を受けます。いくつかのケースでは、親の環境影響の大きさ (相互作用) 観察された種子サイズ効果。これらのデータは、親の世代の生活史事情成長と発展を次世代に遺伝学的研究を実行するときに考慮すべき程度のライフ サイクルに影響をすることができることを示しています。

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