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Articles by Angela Pollard in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Toxoplasma gondii parete formazione di cisti in attivo dal midollo osseo macrofagi e condizioni Bradyzoite
Department of Medical Microbiology and Immunology, University of Wisconsin
Toxoplasma gondii converte in una forma cisti in risposta a stress ambientali, che può essere imitato in modelli di colture di tessuti. Questo video mostra le tecniche per esaminare la formazione di cisti muro attivando midollo osseo macrofagi o modificare il pH medio di crescita in cellule di fibroblasti.
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Altamente Polimorfico Famiglia Degli Antigeni Di Superfici Glicosilfosfatidilinositolo Ancorati Con Evidenza Del Regolamento Sullo Sviluppo Di Toxoplasma Gondii
Il ciclo di vita dell'Apicomplexa parassita Toxoplasma gondii richiede che una cisti infettiva sviluppare ed essere mantenuto per tutta la vita dell'ospite. Le molecole visualizzate sulla superficie del parassita sono importanti nel controllo della risposta immunitaria al parassita. T. gondii è una superfamiglia di glicosilfosfatidilinositolo (GPI)-ancorati gli antigeni superficiali, definiti l'antigene di superficie (SAG) e SAG-relativi antigeni superficiali, che sono evolutivamente regolati durante l'infezione. Utilizzando un algoritmo di clustering, abbiamo identificato una nuova famiglia di 31 proteine di superficie che sono previsti per essere GPI ancorate, ma sono correlate alle proteine SAG, e così abbiamo chiamato questi proteine non correlate SAG superficie antigeni (SUSA). L'analisi della densità single nucleotide polymorphism ha mostrato che i membri di questa famiglia sono i più polimorfici geni all'interno del genoma di T. gondii. Immunofluorescenza di SUSA1 e SUSA2, due membri della famiglia, ha rivelato che si trovano sulla superficie del parassita. Abbiamo confermato che SUSA1 e SUSA2 sono GPI ancorate da fosfolipasi clivaggio. Analisi di espresso sequence tags (ESTs) ha rivelato che SUSA1 aveva 22 dei 23 ESTs da infezione cronica. Analisi del mRNA e proteina ha confermato che SUSA1 è altamente espresso in forma cronica del parassita. Sieri da topi con T. gondii infezione cronica ha reagito al SUSA1, che indica che SUSA1 interagisce con il sistema immunitario ospite durante l'infezione. Questo gruppo di proteine probabilmente rappresenta una nuova famiglia di polimorfici GPI-anchored superficie antigeni che vengono riconosciuti dal sistema immunitario dell'ospite e la cui espressione è regolata durante l'infezione.
Caratterizzazione Strutturale Di Haemophilus Parainfluenzae Lipooligosaccharide E Delucidazione Del Suo Ruolo in Aderenza Utilizzando Un Mutante Del Nucleo Esterno
L'agente patogeno opportunistico Haemophilus parainfluenzae è un batterio gram-negativo trovato nell'orofaringe degli esseri umani. Haemophilus parainfluenzae è un membro della famiglia Pasteurellaceae in cui è più strettamente imparentato Afroteri Haemophilus e Actinobacillus. Caratterizzazione della superficie visualizzata lipooligosaccharide ha individuato i componenti cruciali in aderenza. Abbiamo esaminato la struttura oligosaccaride di lipooligosaccharide da 2 isolati clinici di H. parainfluenzae. Oligosaccaride core è stato isolato dai metodi standard da lipooligosaccharide purificato. Informazioni strutturali nasce da una combinazione di analisi monosaccaride e metilazione, spettroscopia di risonanza magnetica nucleare e spettrometria di massa rivelando le seguenti strutture: R-(1-6)-beta-Glc-(1-4)-D,D-alpha-Hep-(1-6)-beta-Glc-(1-4)-sostituendo un nucleo interno tri-Eptoso-Kdo di L,D-alpha-Hep-(1-2)-L,D-alpha-Hep-(1-3)-L,D-alpha-Hep-(1-5)-alpha-Kdo in posizione prossimale l, D-alfa-Hep residuo di Kdo e con un residuo di tetranitrato di pentaeritrite in posizione 6 della centrale L 4Residuo D-alfa-Hep. Nel ceppo di 4282 il sostituente R è beta-galattosio e nel ceppo 4201 non non c'è alcun sostituente presso il glucosio distale. Queste analisi hanno rivelato che gli aspetti strutturali multipli di H. parainfluenzae lipooligosaccharide sono paragonabili con nontypeable Haemophilus influenzae lipooligosaccharide. Questo studio ha inoltre identificato un galactan nel ceppo 4201 e un glucano nel ceppo 4282. Haemophilus parainfluenzae è stato mostrato di aderire a una linea di cellule epiteliali bronchiali nella stessa misura come nontypeable H. influenzae. Tuttavia, un mutante di H. parainfluenzae manca il nucleo esterno del lipooligosaccharide ha mostrato diminuita aderenza alle cellule epiteliali, suggerendo che H. parainfluenzae lipooligosaccharide gioca un ruolo nella colonizzazione dei tessuti.
Una Proteina Superficiale Contenenti Dominio Transmembrana Da Toxoplasma Gondii Potenzia Replica Nelle Cellule Immunitarie Attivate E Istituzione Di Un'infezione Cronica
Mutanti gondii Toxoplasma identificati come difettoso nell'istituzione di infezione cronica sono stati proiettati per isolare quelli specificamente alterati nella loro capacità di replicarsi all'interno di macrofagi attivati. Uno dei mutanti identificati contiene un inserimento del gene ipotetico TGME49_111670. Complementazione genetica ripristina la capacità di mutante di replicarsi in cellule del sistema immunitario e produrre cisti nel cervello dei topi. Mentre il mutante è più sensibile di ossido nitrico che è suo ceppo parentale, non è difettoso nella sua capacità di sopprimere l'ossido nitrico. La proteina perturbata non ha alcuna significativa omologia delle proteine con funzioni note, ma si prevede di avere un dominio transmembrana. Immunofluorescenza dimostra la proteina sulla superficie del parassita, anche nei macrofagi attivati, colocalizing con un antigene di superficie tachyzoite, SAG1 e orientato con la sua estremità C-terminale esterno. Analisi occidentale rivelano che la proteina è downregolata in bradyzoites. Nonostante la specificità di tachyzoite di questa proteina, topi infettati con il mutante soccombono all'infezione acuta similmente a quelli infettati con il ceppo. I campioni di siero da topi con infezione cronica T. gondii da reagiscono ad un polipeptide da TGME49_11670, che indica che la proteina è visto dal sistema immunitario durante l'infezione. Questo studio è il primo a caratterizzare una proteina di T. gondii superficiale che contiene un dominio transmembrana e mostrano che la proteina contribuisce alla replica del parassita nelle cellule immunitarie attivate e l'istituzione dell'infezione cronica.
Il Ruolo Di Molecole Specifiche Di Toxoplasma Gondii Nella Manipolazione Dell'immunità Innata
L'infezione con il parassita Toxoplasma gondii stimola una risposta immunitaria innata nell'host. T. gondii inoltre induce alterazioni infetti monociti e cellule dendritiche che probabilmente contribuiscono alla sua capacità di diffondere e in definitiva di stabilire infezione persistente. Recenti progressi ha collegato molecole parassita specifico di stimolazione immunitaria o la capacità del parassita di sovvertire le vie di segnalazione intracellulare in cellule infettate per eludere l'immunità.
