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Articles by Anke Scholz in JoVE
JoVE General
Isolation und genetische Manipulation von Adult Herzmuskelzellen für konfokale Imaging
Institute for Molecular Cell Biology, Universty of Saarland
Adult Herzmuskelzellen sind primäre Zellen, die aus tierischen Herzen isoliert und kultiviert für mehrere Tage. Innerhalb dieses Zeitraums Kultur adenoviralen Gentransfer können verwendet werden, um genetisch kodierte Biosensoren (GEBS) oder fluoreszierende Fusionsproteine zu exprimieren. Beide Ansätze erlauben zellulären Untersuchungen mittels der konfokalen Mikroskopie.
Other articles by Anke Scholz on PubMed
Die Phosphorylierung Von Saccharose-Synthase an Serin 170: Auftreten Und Die Mögliche Rolle Als Signal Für Die Proteolyse
Umbau Von Ca2 + Handhabung Organellen in Den Erwachsenen Ratte Ventrikuläre Myocytes Während Der Langfristigen Kultur
Es ist bekannt, dass für Cardiomyocytes, Isolierung und Kultivierung weitgehend unbekannte Filialumbauten Prozesse auslösen. Analysieren wir Veränderungen in der Struktur der Zelle Abteile mit optischen Techniken wie konfokale Mikroskopie und Fluoreszenz Umverteilung nach Photobleaching adenoviral-vermittelte Transduktion gezielte fluoreszierende Proteine und niedermolekularer Farbstoffe beschäftigt. Wir haben charakteristische Filialumbauten Prozesse identifiziert: die T-Membran Röhrensystem wurde nach und nach verloren, durch einen Prozess, genannt "sequenzielle Kneifen Weg", nach außen. Mitochondrien verliebte sich in eine der drei Klassen, sehr klein (0,9 Microm Länge), mittellang (1,8 Microm) oder erweiterter Form (3,6 Microm) Organellen. Über die Kultivierung Zeit Mitochondrien allmählich verschmolzen. Bleichen von einzelnen Mitochondrien offenbart Assoziation zwischen scheinbar getrennte Mitochondrien durch "Tunneling" über Sub-resolution Organell-Leitungen. Tunnelling dabei war die culturing Zeit erhöhen. Ein allmählicher Verlust der Kreuz-Rasterung Anordnung in den sarcoplasmic/endoplasmic Reticulum visualisiert wurde. Analyse von großen Populationen von Ca(2+) Funken von Video-konfokale 2D-Scan offenbarte erhebliche, wenn auch geringen Tarifänderungen dieser elementaren SR-Ca(2+) Freigabe-Ereignisse in den Erwachsenen Cardiomyocytes, die auf Änderungen der SR-Ca(2+) Inhalten anstatt Ruhe Ca(2+) Konzentration bezogen werden konnte. Abschließend werden primäre isolierte Cardiomyocytes von Erwachsenen Herzen eine klar definierte, aber reproduzierbare subzellulare Umbau während optimierte langfristige Kultur unterzogen.
Optische Aktionspotential Screening Auf Erwachsene Ventrikulären Myozyten Als Eine Alternative QT-Bildschirm
QT-Intervall-Bildschirme werden immer wichtiger für kardiale Sicherheit auf alle neuen Medikamente. Bisher Vertrauen Untersuchungen auf Tierversuche oder Zell-basierte Bildschirme hERG-Kanäle in Zelllinien, die ein hohes Maß an Automatisierung ermöglicht ausschließlich Sondierung für Leitwert Änderungen in heterologously ausgedrückt werden. Erwachsene Cardiomyocytes können nicht durch automatisierte Patch-Clamp-Konfigurationen behandelt werden. Daher gilt die optische Überprüfung der primären isolierten ventrikulären Myozyten als Alternative. Mehrere optische Spannungssensoren ratiometrisch Messungen berichtet worden, aber sie alle beeinflusst die naiv-Aktionspotential. Ziel der vorliegenden Studie war zu erforschen die Aufnahmebedingungen und Einstellungen, mit denen optische QT-Intervall-Bildschirme zu definieren.
Funktionelle Und Morphologische Erhaltung Der Erwachsenen Ventrikulären Myozyten in Der Kultur Von Sub-micromolar Cytochalasin D Ergänzen
Im kardialen Myozyten wurde Cytochalasin D (CytoD) berichtet, als ein Aktin-Disruptor und mechanischen Entkuppler. Konfokale verwenden und superauflösende STED-Mikroskopie, zeigen wir, dass CytoD die Aktin-Filament-Architektur der Erwachsene Ratte ventrikulären Myozyten in Kultur bewahrt. Fünfhundert Nanomolar CytoD war die optimale Konzentration beider Erhaltung der T-tubuläre Struktur während der Kultur Perioden von 3 Tagen und Erhaltung der wichtigsten funktionellen Eigenschaften wie Aktionspotentiale, Kalzium-Transienten und allem der kontraktilen Eigenschaften der einzelnen Myocytes zu erreichen. Daher schließen wir, dass der Zusatz von CytoD zur Kultur der Erwachsenen kardialen Myozyten tatsächlich verwendet werden kann, ein Volumenmodell einzellige generieren, die Morphologie und Funktion des frisch isolierten Zellen bewahrt. Darüber hinaus zeigen wir einen vermeintlichen Zusammenhang zwischen Zytoskelett und T-tubuläre Umbau. Ohne CytoD, wir beobachteten einen Verlust von T-Tubuli, die zu erheblichen Dyssynchronous Ca(2+) Ca(2+)-induzierte Freisetzung (CICR), in Gegenwart von 0,5 μM geführt CytoD, T-Tubuli und homogene CICR majorly beibehalten wurden. Solche Daten vorgeschlagen, einen möglichen Zusammenhang zwischen der Aktin-Zytoskeletts, T-Tubuli und synchrone, zuverlässige Erregung-Kontraktion-Kopplung. Also T-Pellets Reorganisation in der Zellkultur zusätzliche beleuchtet auf ähnliche Prozesse bei vielen Herzerkrankungen gefunden und Zytoskelett Änderungen mit Änderungen in subzellulären Ca(2+) Signalisierung offenbart unter pathophysiologischen Bedingungen verknüpfen.
