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Articles by Anne-Sophie Arnold in JoVE
JoVE Neuroscience
Une unité fonctionnelle du moteur dans la boîte de culture: La co-culture d'explants de la moelle épinière et les cellules musculaires
Biozentrum, University of Basel
Les cellules musculaires en culture sont un modèle inadéquat de récapituler les muscles innervés
Other articles by Anne-Sophie Arnold on PubMed
Construction D'un Plasmide Contenant Humain SMN, Le SMA, Déterminer Le Gène, Couplé à L'EGFP
Nous décrivons ici la construction du plasmide pEGFP-C3/SMN, portant le gène humain de la SMN couplé à la séquence de la protéine fluorescente verte (GFP). La mutation du gène SMN est responsable de l'atrophie musculaire spinale (SMA), une maladie génétique infantile humaine fréquente. Nous avons introduit le cDNA de SMN dans le site multiple de clonage de pEGFP-C3. Ce plasmide porte la séquence de la résistance à la néomycine et la meilleure de la protéine fluorescente verte (EGFP). Il se traduit par l'expression d'une protéine de fusion portant le SMN couplé à une balise GFP carboxy-terminal, utilisée pour les études de localisation de fluorescence. Transfection des primaires myoblastes humaines avec C3-pEGFP ou pEGFP-C3/SMN a révélé que EGFP est localisée dans les cellules dans le cytosol, ainsi que dans le noyau, tandis que la protéine de fusion EGFP-SMN localisées à l'intérieur du noyau dans des structures ressemblant à des points appelés "joyaux". Ces résultats démontrent que les cellules musculaires humaines de primaire peuvent être efficacement transfectées et peuvent avoir des implications importantes pour le développement de stratégies thérapeutiques en SMA.
Réduction De L'expression Des ACHaRS Nicotiniques Dans Les Myotubes De Spinal Muscular Atrophie J'ai Les Patients
Atrophie musculaire spinale (SMA) est une maladie autosomique récessive caractérisée par une dégénérescence des motoneurones et atrophie du muscle squelettique. Dans sa forme la plus sévère, elle conduit à la mort avant l'âge de 2 ans. Alors que la dégénérescence des neurones moteurs primaire est bien établie dans cette maladie, et cela se traduit par une atrophie neurogène du muscle squelettique, nous avons déjà rapporté des preuves d'un défaut de muscle principal. Dans cette étude, nous avons utilisé des cultures primaires de cellules de muscle squelettique humain embryonnaire de patients atteints de SMA et des contrôles pour examiner les effets de la différenciation de la fibre musculaire en l'absence d'un composant de nerf. Des cellules de muscle squelettique de SMA sont incapables de fusionner correctement pour former les polynucléaire myotubes, précurseurs des myofibres. Nous montrons également qu'induite par l'agrine agrégats des récepteurs nicotiniques de l'acétylcholine, une des premières étapes de formation de la jonction neuromusculaire, ne peuvent être visualisés par microscopie confocale sur cellules de patients atteints de SMA. Dans des expériences de liaison, nous démontrons que ce regroupement est due à déficit d'expression des récepteurs nicotiniques de l'acétylcholine dans les myotubes de SMA patients tandis que l'affinité de l'alpha-bungarotoxine pour son récepteur reste inchangée, indépendamment du type de cellule du muscle (SMA ou contrôle). Ces observations suggèrent que les cellules musculaires de patients de SMA ont des anomalies intrinsèques qui peuvent affecter la formation adéquate de la jonction neuromusculaire.
Livraison Efficace De SiARN Insulinome Stimulée Par La Cytokine Expression De Fas Silences Des Cellules Et Inhibe L'apoptose Induite Par Fas
Les interactions Fas/FasL ont été proposées comme une mort de bêta-cellules médiatrices mécanisme potentiellement important dans le diabète de type 1. Les investigations récentes suggèrent l'interférence ARN, offerte par les petits ARN interférents (siARN), peut fournir un gène précis et robuste silencieux dans les cellules de mammifères. La présente étude a tenté d'étudier les effets de faire taire les expression de Fas avec siARN sur l'apoptose médiée par Fas dans les cellules de souris insulinome après incubation de cytokine. Nos résultats indiquent que les siARN est capable d'inhibition rapide de cytokine Fas ARNm production et cell surface Fas protéine induite. Une suppression totale de la protéine Fas totale a été observée seulement après une incubation prolongée avec siARN, suggérant un turn-over lente de la protéine Fas. En outre, siARN inhibe de façon significative bêta-cellulaire Fas apoptose évalués par la Caspase-3 et terminale de deoxynucleotidyl transférase Biotine-dUTP nick end essais, dont l'étendue est positivement corrélée avec le niveau de la surface cellulaire Fas d'étiquetage. Ces observations fournissent des preuves supplémentaires, un rôle de soutien pour le médié par le SAF dans la destruction des cellules bêta et suggèrent que siARN ciblant Fas peut être de valeur thérapeutique à prévenir le diabète de type 1 et d'améliorer la viabilité des cellules îlot dans la transplantation.
En Comparant Les Réactifs Pour La Transfection Efficace Des Myoblastes Primaires Humaines : FuGENE 6, Effectene Et ExGen 500
Cette étude a comparé trois différents réactifs synthétiques (FuGENE 6, Effectene et ExGen 500) pour la transfection des myoblastes primaires humaines. Nous avons examiné l'efficacité, la cytotoxicité et la taille des complexes formés en présence de différentes quantités de vecteur et de l'ADN et avec des quantités variables de sérum. Taux de transfection étaient relativement élevés pour les piles primaires, surtout avec FuGENE 6 (20 %), ce qui semblait être le meilleur réactif de transfection pour ces cellules, même en présence de 10 % de sérum. Les myoblastes humains cultivés constituent un outil intéressant pour l'étude des maladies neuromusculaires et sont potentiellement utiles pour les études de thérapie de transfert de myoblastes. En outre, l'efficacité de ces réactifs de transfection dans un milieu contenant 10 % de sérum est prometteuse pour les protocoles de thérapie génique possible pour les maladies musculaires.
Beta1-adrénergique Spécifique Faisant Taire Avec Petits ARN Interférents Abaisse La Pression Artérielle Et Améliore La Fonction Cardiaque Chez L'ischémie Myocardique
Les bêta-bloquants sont largement utilisés et efficace dans le traitement de l'hypertension et l'insuffisance cardiaque, infarctus aigu du myocarde (MI), mais ils présentent des effets secondaires principalement en raison de l'antagonisme des récepteurs bêta2-adrénergiques (AR). Actuellement disponibles bêta-bloquants sont sélectifs au mieux mais pas spécifique pour la bêta 1 ou bêta 2-AR.
[PGC-1alpha Contrôle La Jonction Neuromusculaire Et Offre Une Nouvelle Cible Thérapeutique Dans La Dystrophie De Duchenne?]
Myosines Cellulaire Non Musculaires IIA HCNM Et NMHC-IIB Et Cœur De Vertébrés En Boucle
Flectin, une protéine décrite précédemment pour s'exprimer d'une manière gauche dominante au coeur de l'embryon de poulet pendant une boucle, est membre de la classe de protéines musculaires myosine II (HCNM-II). Au cours de la boucle, tant HCNM-IIA et IIB-HCNM sont exprimés dans le coeur de souris embryonnaire jour 9,5. Les modèles de localisation de HCNM-IIB, plutôt que de HCNM-IIA chez la souris une boucle de coeur et dans les cellules de la crête neurale, sont équivalentes à ce que nous avons rapporté précédemment pour flectin. Expression humaine pleine longueur de HCNM-IIA et IIB - 10 T1/2 cellules ont démontré que les anticorps flectin reconnaît les deux isoformes. La microscopie électronique révèle que l'anticorps flectin localise en bref processus cellulaires de cardiomyocyte s'étendant de la couche basale de le cardiomyocytes dans la gelée cardiaque. Flectin anticorps reconnaît également des fibrilles de contrainte dans la gelée cardiaque dans le coeur de souris et de poussin ; alors que les anticorps de HCNM-IIB ne fonctionne pas. Bouclage anormalement les coeurs de la Nodal (Delta 600) des embryons de souris homozygotes montrent une diminution HCNM-IIB expression sur les niveaux de l'ARNm et de protéines. Ces résultats document la caractérisation des flectin et étendent l'importance des HCNM-II et l'actomyosine du cytosquelette complexe au cœur des mammifères et cardiaques en boucle.
L'impulsion De Stimulation électrique Des Cellules Musculaires Murines Reproduit Changements D'expression Génétique De Muscle De Souris Formés
Des niveaux adéquats de l'activité physique sont au centre d'un mode de vie sain. Cependant, les mécanismes moléculaires qui interviennent dans les effets bénéfiques de l'exercice restent énigmatiques. Cette lacune dans les connaissances est causée par l'absence d'un système modèle expérimental prêtent. Par conséquent, nous avons optimisé l'impulsion de stimulation électrique des cellules musculaires de près récapituler les changements plastiques dans l'expression des gènes observées dans un muscle squelettique formé. Les conditions exactes expérimentales ont été établies en utilisant le peroxysome proliferator-activated receptor gamma coactivateur 1alpha (PGC-1alpha) en tant que marqueur pour une fibre musculaire d'endurance formés. Nous avons ensuite comparé les changements dans l'expression relative de gènes métaboliques et myofibrillaires dans le système des cellules musculaires à celles observées dans le muscle de souris in vivo à la suite soit un des épisodes aigus ou répétés de l'exercice sur tapis roulant. Fait important, dans stimulées électriquement cellules musculaires de souris C2C12, les adaptations qualitatives de transcription étaient presque identiques à celles dans le muscle formé, mais diffèrent des effets aigus de l'exercice sur l'expression des gènes musculaires. En outre, des modifications importantes dans l'expression de protéines myofibrillaires indiquent que cette stimulation pourrait être utilisée pour moduler la fibre-type de cellules musculaires en culture. Nos données ainsi décrire un modèle de cellule expérimentale de la culture pour l'étude d'au moins quelques-uns des aspects de la transcription de l'adaptation du muscle squelettique à l'activité physique. Ce système sera utile pour l'étude des mécanismes moléculaires qui régulent l'adaptation des exercices musculaires.
PGC-1α Et Myokines Dans Le Vieillissement Musculaire - Un Mini-examen
Le vieillissement est associé à de profonds changements dans les fonctions physiologiques résultant de la morbidité et finalement la mort. Liée à l'âge de fragilité, l'insécurité et la réduction de l'activité physique contribuent à une perte progressive de la masse musculaire et la fonction, communément appelée sarcopénie. En raison de l'augmentation de l'espérance de vie dans de nombreux pays, la perte de masse musculaire et son gain en pertinence conséquences pour la santé publique. Dans le même temps, les mécanismes moléculaires qui sous-tendent la sarcopénie sont mal comprises et, par conséquent, les approches thérapeutiques sont limitées. Fait intéressant cependant, l'endurance, la force et étirements est significativement supérieure à toutes les interventions pharmacologiques connus, nutritionnel et hormonal pour la stabilisation, la réduction de la sarcopénie et à inverser. Ainsi, l'augmentation des connaissances sur les changements plastiques du muscle squelettique après l'activité physique et les facteurs de signalisation qui interviennent dans les effets bénéfiques de l'exercice sur d'autres organes pourrait donner une meilleure compréhension de la maladie et ouvrent de nouvelles voies pour le traitement. Ici, nous discutons de la façon dont les découvertes actuelles sur le peroxysome proliferator-activated receptor γ coactivateur 1α-(PGC-1α), un facteur clé dans l'exercice musculaire, et myokines, les facteurs de production et sécrétée par les fibres musculaires actives, élargir notre vision des changements pathologiques et les options thérapeutiques pour la sarcopénie.
