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Articles by Anne-Sophie Arnold in JoVE
JoVE Neuroscience
培養皿内の機能モーターユニット：脊髄外植片と筋細胞の共培養
Biozentrum, University of Basel
培養筋細胞は、神経支配のある筋を再現するために不十分なモデルである
Other articles by Anne-Sophie Arnold on PubMed
人間のサンタマリアノヴェッラ、遺伝子、決定する SMA を含むプラスミドの構築 EGFP を結合します。
ここでプラスミド pEGFP-C3/召の建設に緑色蛍光タンパク質 (GFP) のシーケンスを結合した人間のサンタマリアノヴェッラの遺伝子を軸受について説明します。サンタマリアノヴェッラの遺伝子の突然変異は、脊髄性筋萎縮のため （SMA） は頻繁に人間の乳児遺伝病の責任です。我々 の pEGFP C3 多重クローニング サイトに召 cDNA を導入しました。このプラスミッドのクマのネオマイシン抵抗シーケンスと強化緑色蛍光タンパク質 (EGFP)。ベアリング結合蛍光局在の研究のため使用はカルボキシ末端 GFP タグに召融合タンパク質の発現結果します。PEGFP C3 または pEGFP-C3/召プライマリ人間筋芽細胞のトランスフェクション EGFP が細胞内核のようにも細胞質内にローカライズされて、融合蛋白質 EGFP 召内ローカライズが著名なドットのような構造における核「宝石」と呼ばれるを明らかにしました。これらのデータは、人間プライマリ筋細胞が効率的に導入することができ、SMA の治療戦略の開発の重要な含意がありますを示しています。
乏しく筋脊髄からのニコチン性 AChRs の発現は萎縮患者。
脊髄性筋萎縮症 （SMA） は、運動ニューロンと骨格筋萎縮の変性によって特徴づけられる常染色体劣性障害です。その最も深刻な形で 2 歳の年齢の前に死に します。プライマリ変性運動ニューロンがこの病気でよく確立され、この結果、骨格筋の神経因性萎縮の間、我々 は以前プライマリ筋肉の欠陥のための証拠を報告しています。本研究では, 筋線維分化神経のコンポーネントの不在の影響を調べるに SMA の患者とコントロールから胚骨格筋細胞の初代培養を使用しました。培養骨格筋細胞の SMA が正しくヒューズの多核乏しく、筋線維の前駆体を形成することができます。またアグリン誘起凝集体のニコチン性アセチルコリン受容体は、神経筋接合の形成の初期手順は SMA の患者由来細胞共焦点顕微鏡による視覚化できません. します。バインディングの実験ではアフィニティは、その受容体 α-ブンガロトキシン筋肉細胞の種類に関係なく (SMA またはコントロール) は変わりませんに対しクラスタ リングのこの欠如欠陥式乏しくの SMA 患者におけるニコチン性アセチルコリン受容体のためであることを示します。これらの観察は、SMA 患者の筋肉細胞の神経筋接合部の適切な形成に影響を与える可能性があります組み込みの異常が示唆されました。
SiRNA の効率的な配信にサイトカイン刺激インスリノーマ細胞無音 Fas 発現と Fas 媒介アポトーシスを阻害します。
Fas/FasL の相互作用は 1 型糖尿病の潜在的に重要なメカニズム媒介 β 細胞死として提案されている.最近の調査は小さい干渉の RNAs (siRNA) によって与えられる、RNA 干渉は哺乳類細胞での特定と堅牢な遺伝子のサイレンシングを提供できますをお勧めします。現在の研究は、Fas 式マウス インスリノーマ細胞のサイトカイン インキュベーション後における Fas 媒介アポトーシス siRNA とサイレンシングの効果を調査ましょう。その siRNA はサイトカイン誘発 Fas mRNA の生産と細胞表面 Fas 蛋白質の急速な抑制が可能ですが示唆されました。合計 Fas タンパク質の完全な抑制は Fas 蛋白質の遅いターン オーバーを示唆 siRNA と長期培養後のみ観察されました。また、siRNA はカスパーゼ 3 および切断端トランスフェラーゼ ビオチン dUTP ニック終了ラベリングの範囲には細胞表面 Fas のレベルと相関アッセイによって評価 Fas 媒介ベータ細胞のアポトーシスを有意に抑制しました。これらの観察は、ベータ細胞の破壊における Fas 媒介経路の役割をサポートする追加の証拠を提供して Fas をターゲットは siRNA の治療的価値は防止タイプ 1 糖尿病と改善の膵島細胞生存移植でかもしれない提案します。
人間プライマリ筋芽細胞の効率的なトランスフェクション試薬を比較する: FuGENE 6、Effectene、ExGen 500。
この研究 3 つの異なる合成試薬 (FuGENE 6、Effectene、ExGen 500) 人間プライマリ筋芽細胞のトランスフェクションを比較しました。我々 は、効率、細胞毒性およびベクトルと DNA と血清の変数量をさまざまな量の存在下で形成された複合体のサイズを検討しました。トランスフェクションの料金は、特に最高のトランスフェクション試薬 10% 血清の存在下でも、これらの細胞のように見えた FuGENE 6 (20%) での一次電池比較的高かった。人体筋芽細胞培養神経筋疾患研究のための興味深いツールであり、潜在的筋芽細胞転送療法研究に有用です。また、これらのトランスフェクション試薬 10% 血清を含む培地での効率は可能な遺伝子治療プロトコルの筋肉病気のため有望であります。
低分子干渉 RNA がサイレンシング特定の Beta1 アドレナリン受容体は高血圧を下げる、心筋虚血の心臓の機能を向上させます。
Β 遮断薬が広く使用され、高血圧、急性心筋梗塞 (MI)、心不全の治療に有効ですが、β 2 アドレナリン受容体 (AR) の拮抗作用を主因の副作用を提示します。現在利用可能な β 遮断薬の最高の状態で選択がない特定の beta1 または beta2 着は
細胞非筋細胞ミオシン IIA NMHC および NMHC IIB と脊椎動物の心をループします。
Flectin、ループ中の鶏胚心に左支配的方法で表現すること前述タンパク質非筋細胞ミオシン II (NMHC II) タンパク質クラスのメンバーです。ループ中に, NMHC IIA、IIB NMHC マウス心臓におけるを胚当日 9.5 表されます。ローカリゼーション NMHC IIA ではなく、NMHC IIB の心臓をループ マウスおよび神経堤細胞のパターンは何我々 以前の flectin 報告に同等です。式のフルレングス人間 NMHC IIA、IIB - 10 T1/2 セルの両方のアイソ フォームの flectin 抗体の認識を示した。電子顕微鏡その flectin 抗体は要するに、心筋細胞の基底層から心臓のゼリーに拡張心筋細胞プロセスをローカライズを明らかにしました。Flectin 抗体はまたストレス線維心臓ゼリー マウスおよびニワトリの心臓で認識;NMHC IIB 抗体はしませんが。異常節点 (デルタ 600） の心をループ ホモ接合体マウス胚は mRNA および蛋白質のレベルに減少 NMHC IIB 式を示します。これらの結果は、flectin のキャラクタリゼーションを文書化し、NMHC II と哺乳類心臓と心臓のループに複雑な骨格のアクトミオシンの重要性を拡張します。
培養マウス筋細胞の電気パルス刺激、訓練を受けたマウスの筋肉の遺伝子発現の変化を再現
身体活動の十分なレベルでは、健康的なライフスタイルの中心にあります。しかし、運動の有益な効果を媒介する分子機構は謎のままです。知識のこのギャップは従順実験モデルシステムの欠如によって引き起こされます。したがって、我々は密接に訓練された骨格筋で観察された遺伝子発現の可塑的変化を再現するために筋細胞の電気パルス刺激を最適化されています。正確な実験条件は、持久力訓練を受けた筋線維のマーカーとしてペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γコアクチベーター1αの（PGC-1α）を用いて確立された。私たちは、その後トレッドミル運動の急性または反復発作は、次のいずれかのin vivoでのマウスの筋肉で観察されたもので、筋肉細胞系で代謝および筋原線維の遺伝子の相対発現の変化を比較した。重要なのは、電気刺激C2C12マウス筋細胞では、定性的な転写の適応は、訓練を受けた筋肉のものとほぼ同じであったが、筋の遺伝子発現に対する運動の急性効果は異なります。さらに、筋原線維タンパク質の発現に有意な変化は、この刺激が培養中の筋細胞のファイバ型を調節するために使用することができることを示しています。我々のデータは、このように物理的な活動への骨格筋の適応の転写面の少なくともいくつかの研究のための実験的な細胞培養モデルについて説明します。このシステムは、筋肉の運動適応を制御する分子機構の研究のために有用であろう。
PGC-1αおよびエージング筋のMyokines - ミニレビュー
エージングは、罹患率と最終的に死に至る生理機能の遠大な変化に関連付けられています。加齢に伴う虚弱、不安と低身体活動は、一般的にサルコペニアと呼ばれる筋肉の量と機能の進行性の喪失に貢献しています。多くの国で平均寿命の増加、筋肉量の損失および公衆衛生のための関連で、その結果の利得のために。同時に、サルコペニアの根底にある分子メカニズムはほとんどわかっていないため、治療法は限られています。興味深いことに、耐久性、強度、ストレッチ運動は、サルコペニアを軽減し、逆に、安定化のためにすべての知られており、薬理学、栄養やホルモンの介入が有意に優れています。したがって、身体活動と疾患の理解を得られ、治療のための新しい道を開く可能性のある他の器官に運動の有益な効果を仲介するシグナル伝達因子の後に骨格筋の可塑的変化についての知識を増加させた。ここでは、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（PGC-1α）γコアクチベーター-1αについてどのように現在の発見を議論する、主要な運動筋肉の要因、およびmyokines、アクティブな筋線維によって生成され、分泌される要因は、病理学的変化の我々のビューを展開とサルコペニアの治療オプションがあります。
