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Articles by Anne-Sophie Arnold in JoVE
JoVE Neuroscience
Una unidad motora funcional en la placa de cultivo: Co-cultivo de explantes de la médula espinal y las células musculares
Biozentrum, University of Basel
Las células cultivadas del músculo son un modelo inadecuado para recapitular músculo inervado
Other articles by Anne-Sophie Arnold on PubMed
Construcción De Un Plásmido Que Contiene Humano SMN, El SMA Determinar Genes, Junto a EGFP
Aquí describimos la construcción del plásmido pEGFP-C3/SMN, teniendo el gen SMN humano juntado a la secuencia de la proteína verde fluorescente (GFP). La mutación del gen SMN es responsable de la atrofia muscular espinal (SMA), una enfermedad genética infantil humana frecuente. Introdujimos el cDNA de SMN en el sitio de clonación múltiple de pEGFP-C3. Este plásmido lleva la secuencia de la resistencia a la neomicina y la proteína verde fluorescente mejorada (EGFP). Resulta en la expresión de una proteína de fusión teniendo SMN juntada a una etiqueta GFP de carboxi-terminal, utilizada para estudios de localización de fluorescencia. Transfección de mioblastos humanos primaria con pEGFP-C3 o pEGFP-C3/SMN reveló que EGFP intracelular se localiza en el citosol, así como en el núcleo, mientras que la proteína de fusión EGFP-SMN localizada en el núcleo en estructuras punto prominentes denominado "gemas". Estos datos demuestran que las células musculares primarias humanas pueden ser eficientemente transfectadas y pueden tener implicaciones importantes para el desarrollo de estrategias terapéuticas en SMA.
Expresión Reducida De AChRs Nicotínicos En Miotubos De Muscular Espinal Atrofia I Pacientes
Atrofia muscular espinal (SMA) es un trastorno autosómico recesivo caracterizado por la degeneración de las motoneuronas y atrofia del músculo esquelético. En su forma más grave, conduce a la muerte antes de la edad de 2 años. Mientras que la degeneración de las neuronas motoras primaria está bien establecida en esta enfermedad, y esto se traduce en atrofia neurogénica del músculo esquelético, hemos divulgado previamente evidencia de un defecto primario del músculo. En este estudio, utilizamos cultivos primarios de células de músculo esquelético humano embrionario de pacientes con SMA y de controles para examinar los efectos de la diferenciación de la fibra muscular en ausencia de un componente del nervio. Células de músculo esquelético de SMA cultivadas son incapaces de fusible correctamente para formar miotubos multinuclear, los precursores de la myofibers. También mostramos que agregados agrin-inducida de los receptores nicotínicos de la acetilcolina, uno de los primeros pasos de formación de la placa neuromuscular, no se pueden visualizar mediante microscopía confocal en células de pacientes de la SMA. En experimentos de atascamiento, demostramos que esta falta de agrupamiento es debido a la expresión defectuosa de los receptores nicotínicos de la acetilcolina en los miotubos de SMA pacientes mientras que la afinidad de la alfa-Bungarotoxina para su receptor permanece inalterada independientemente del tipo de la célula muscular (SMA o control). Estas observaciones sugieren que las células musculares de SMA pacientes tienen anormalidades intrínsecas que pueden afectar la correcta formación de la placa neuromuscular.
Entrega Eficiente De SiRNA En Insulinoma Cytokine-estimulado Las Células Expresión De Fas De Silencios E Inhibe La Apoptosis Mediada Por Fas
FAS/FasL interacciones se han propuesto como una muerte de células beta mediar mecanismo potencialmente importante en la diabetes tipo 1. Investigaciones recientes indican ARN de interferencia por ARN interferente pequeño (siRNA), puede proporcionar el silenciamiento de genes específicos y robusto en células de mamíferos. El presente estudio ha intentado investigar los efectos de silenciamiento de la expresión de Fas con siRNA en apoptosis mediada por Fas en células de insulinoma ratón después de la incubación de citoquinas. Nuestros resultados indican que siRNA es capaz de inhibición rápida de cytokine-inducida Fas mRNA producción y célula Fas proteína superficial. Una supresión completa de la proteína total de Fas se observó sólo después de la incubación prolongada con siRNA, sugiriendo un lento turn-over de la proteína Fas. Por otra parte, siRNA inhibieron significativamente la apoptosis de células beta mediada por Fas evaluados por la caspasa-3 y terminal deoxynucleotidyl transferasa dUTP-biotin nick end etiquetado ensayos, la medida de que se correlacionó positivamente con el nivel de la superficie de la célula Fas. Estas observaciones proporcionan la evidencia adicional de un papel de apoyo para la vía mediada por Fas en la destrucción de células beta y sugieren siRNA contra Fas puede ser de valor terapéutico en prevención de diabetes tipo 1 y mejora viabilidad de las células del islote en el trasplante.
Comparación De Reactivos Para Transfección Eficiente De Mioblastos Primario Humano: FuGENE 6, Effectene Y ExGen 500
Este estudio comparó tres diferentes reactivos sintéticos (FuGENE 6, Effectene y ExGen 500) para la transfección de mioblastos primaria humana. Examinamos la eficiencia, la citotoxicidad y el tamaño de los complejos formados en presencia de diferentes cantidades de vector y el ADN y con cantidades variables de suero. Transfección tasas fueron relativamente altas para células primarias, especialmente con 6 FuGENE (20%), que parecía ser el mejor reactivo de transfección para estas células, incluso en presencia de 10% de suero. Mioblastos humanos cultivados son una herramienta interesante para el estudio de enfermedades neuromusculares y son potencialmente útiles para estudios de terapia de transferencia de mioblastos. Por otra parte, la eficacia de estos reactivos de transfección en un medio que contiene 10% de suero es prometedor para protocolos de terapia génica posible para enfermedades musculares.
Receptores Beta1-adrenérgicos Específicos Silenciamiento Con ARN Interferente Pequeño Reduce La Presión Arterial Alta Y Mejora La Función Cardíaca En Isquemia Miocárdica
Los betabloqueantes son ampliamente utilizados y efectivos para el tratamiento de la hipertensión, infarto agudo de miocardio (MI) e insuficiencia cardiaca, pero presentan efectos secundarios principalmente debido al antagonismo de los receptores adrenérgicos beta2 (AR). Actualmente los betabloqueantes disponibles son en el mejor selectivo pero no específico para beta1 o beta2-AR.
[PGC-1 Alfa Controla La Placa Neuromuscular Y Ofrece Una Nueva Diana Terapéutica En La Distrofia De Duchenne?]
Miosinas Urological Celular NMHC-IIA Y NMHC-IIB Y Vertebrado Corazón Bucle
Flectin, una proteína descrita previamente para expresarse de forma izquierda dominante en el corazón de pollo embrionario durante la colocación, es miembro de la clase de proteína Urological miosina II (NMHC-II). Durante la colocación, tanto NMHC-IIA y IIB-NMHC se expresan en el corazón de ratón en día embrionario 9.5. Los patrones de localización de NMHC-IIB, en lugar de NMHC-IIA en el corazón de bucle de ratón y en las células de la cresta neural, son equivalentes a lo que hemos divulgado previamente para flectin. La expresión de larga duración NMHC humano-IIA y IIB - en 10 células de T1/2 demostró que flectin el anticuerpo reconoce ambas isoformas. La microscopia electrónica reveló que el anticuerpo flectin localiza en definitiva cardiomiocitos procesos de la célula que se extiende desde la capa basal de los cardiomiocitos en la jalea cardiaca. Flectin anticuerpo reconoce también las fibrillas de tensión en la jalea cardiaca en el corazón de ratón y pollo; mientras que los anticuerpos NMHC-IIB no. Bucle anormalmente corazones de la Nodal (Delta 600) embriones de ratón homocigótica muestran expresión disminuida de NMHC-IIB el mRNA y proteína. Estos resultados documentan la caracterización de flectin y extienden la importancia de NMHC-II y el citoesqueleto actomyosin complejo bucle cardiaca y el corazón mamífero.
La Estimulación De Impulsos Eléctricos De Las Células De Músculo Murino Reproduce Cambios De Expresión Génica De Músculo De Ratón Capacitado
Los niveles adecuados de actividad física están en el centro de un estilo de vida saludable. Sin embargo, los mecanismos moleculares que median los efectos beneficiosos del ejercicio siguen siendo enigmáticos. Esta brecha en el conocimiento se debe a la falta de un sistema modelo experimental susceptible. Por lo tanto, hemos optimizado la estimulación de impulsos eléctricos de las células musculares para recapitular de cerca los cambios plásticos en la expresión de genes observados en un músculo esquelético entrenado. Las condiciones experimentales exactas se establecieron mediante el peroxisoma proliferador activado del receptor gamma coactivador 1 alfa (PGC-1 alfa) como marcador de una fibra muscular entrenado en resistencia. Estamos posteriormente se compararon los cambios en la expresión relativa de los genes metabólicos y miofibrilar en el sistema de células de músculo con los observados en el músculo de ratón in vivo después de episodios agudos, ya sea una o repetidas de ejercicios de rutina. Es importante destacar que, en el estimulados eléctricamente las células de ratón C2C12 musculares, las adaptaciones de la transcripción cualitativos fueron casi idénticos a los que en el músculo entrenado, pero difieren de los efectos agudos del ejercicio sobre la expresión génica del músculo. Además, las alteraciones significativas en la expresión de proteínas miofibrilares indican que esta estimulación se podría utilizar para modular el tipo de fibra de las células musculares en cultivo. Nuestros datos así describir un modelo de cultivo celular experimental para el estudio de al menos algunos de los aspectos de la transcripción de la adaptación del músculo esquelético con la actividad física. Este sistema será útil para el estudio de los mecanismos moleculares que regulan la adaptación ejercicio en el músculo.
PGC-1α Y Myokines En El Músculo Del Proceso De Envejecimiento - Mini-revisión
El envejecimiento se asocia con cambios de largo alcance de las funciones fisiológicas que resultan de la morbilidad y finalmente la muerte. Relacionada con la edad la fragilidad, la inseguridad y la escasa actividad física contribuyen a una pérdida progresiva de masa muscular y la función, comúnmente conocido como sarcopenia. Debido al aumento de la esperanza de vida en muchos países, la pérdida de masa muscular y la ganancia de las consecuencias de relevancia para la salud pública. Al mismo tiempo, los mecanismos moleculares que subyacen a la sarcopenia no se comprenden bien y, por tanto, enfoques terapéuticos son limitados. Curiosamente, sin embargo, la resistencia, la fuerza y ejercicios de estiramiento es significativamente superior a todas las intervenciones farmacológicas ya conocidas, nutricionales y hormonales para la estabilización, aliviar y revertir la sarcopenia. Por lo tanto, un mayor conocimiento acerca de los cambios plásticos del músculo esquelético después de la actividad física y los factores de señalización que median los efectos beneficiosos del ejercicio sobre otros órganos podría producir una mejor comprensión de la enfermedad y abren nuevas vías para el tratamiento. En este caso, hablamos de cómo los descubrimientos actuales sobre el peroxisoma proliferador activado del receptor γ coactivador-1α (PGC-1α), un factor clave en el ejercicio muscular y myokines, factores producidas y secretadas por las fibras musculares activas, ampliar nuestra visión de los cambios patológicos y las opciones terapéuticas para la sarcopenia.
