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Articles by Antonio Marchini in JoVE
JoVE Immunology and Infection
重组细小病毒与腺病毒派生系统的帮助下高效生产
1Tumour Virology Division F010, German Cancer Research Center (DKFZ), 2Inserm Unit 701, German Cancer Research Center (DKFZ)
在这里，我们描述只对细胞的感染，从而提高重组细小的生产效率超过100倍相比，在使用中的其他协议为基础的协议。此协议依赖于使用一种新型腺病毒含有的细小副总裁转录单位（AD-VP）5，基于辅助。
Other articles by Antonio Marchini on PubMed
粟 Pmf1p 结构上和功能上与有关 Mmf1p 的酿酒酵母。
新型家庭的小蛋白，称为 p14.5 或 YERO57c/YJGFc，已被确定。独立研究表明 p14.5 的家庭成员所涉及的几个途径，例如翻译的调控或蛋白酶亩钙蛋白酶激活多功能蛋白质。此外，我们以前所示 Mmf1p，p14.5 的萌芽酵母酿酒酵母的本地化，线粒体和线粒体 DNA 稳定性的影响。此外，我们已表明 Mmf1p 与 p14.5 的哺乳动物细胞功能有关。探索进一步进化保护线粒体的 p14.5s 函数我们扩展我们的裂殖酵母，粟酒裂殖酵母的研究。在这两个生物 p14.5 同源蛋白质都存在： Pmf1p (殖酵母线粒体因子 1) 和 Hpm1p (同源 Pmf1p 因子 1)。我们已经产生了具体的 Pmf1p 抗体，其中确认总细胞提取液中的大约 15 kDa 单波段。蜂窝分馏实验表明 Pmf1p 本地化以及与细胞质的线粒体。我们还显示 Pmf1p 共享的酿酒酵母 Mmf1p 的几个属性。事实上，Pmf1p 将恢复野生型表型时三角洲 mmf1 S.酵母细胞中表达。Pmf1p 的领导人序列删除废除其能力，以在线粒体中进行本地化功能取代 Mmf1p。因此，这些数据与我们先前的研究显示线粒体 p14.5 家庭成员函数高保守在真核细胞中。
Leri 威尔和特纳综合征同源盒基因 SHOX 调节转录和翻译。
基因表达的调控是特别重要的基因剂量依赖性疾病以及临床异质性经常与这些表型相关联的现象。我们在这里报告合并转录和转译监管机制来控制 SHOX 的 Léri 威尔和特纳综合征基因的表达。我们定义替代启动子外显子 2 的 SHOX 基因内的瞬态高纯度的单并顺记者构造并证明翻译效率的分泌，从这些另类助剂的体外翻译测定及直接 mRNA 高纯度成不同的单元格行抄写一些重大分歧。虽然从基因内抑制的启动子 (P2) 生成的成绩单翻译与高效率、 mRNA 来自上游的启动子 (P1) 表现出重大翻译由于密码七八月子上游的主要开放阅读框 (uAUGs) 的抑制作用。这些 uAUGs 的定点突变赋予充分翻译向记者分泌不同的细胞株和非洲爪蟾胚胎注射后的工作效率。最后，我们的数据支持功能的 SHOX 蛋白水平受转录和翻译控制机制的组合模型。
矮小 Homeodomain 蛋白 SHOX 诱导细胞凋亡和细胞生长逮捕和在人类生长板软骨细胞中表示。
SHOX 同源盒基因突变导致生长迟缓和 Léri 威尔、 兰格和特纳综合征相关的骨骼异常。这些 SHOX 相关的遗传的疾病，骨形成的内在机理了解甚少。在这里我们展示 SHOX 表达稳定成骨细胞系、 口腔纤维原细胞，和初级软骨细胞导致细胞周期阻滞和细胞凋亡。这些事件是包括 pRB、 p53、 细胞周期蛋白激酶抑制剂 p21(Cip1) 和 p27(Kip1) 的几个细胞基因表达的变化与相关联。SHOX 的突变种，如看到 Léri Weill 综合征患者，不会显示这些活动的野生型蛋白。我们也已表明内源性 SHOX 主要表示在肥厚/凋亡软骨细胞的生长板，强烈暗示这种蛋白质在规管这些细胞分化的作用直接。这项研究作为监管者的细胞增殖和活力提供第一个洞察到了 SHOX 的生物学功能和这些细胞事件关乎 SHOX 虚表型的后果。
线粒体大型核糖体亚基蛋白 40 高水平防止空 Mmf1 酿酒酵母细胞中的线粒体 DNA 的损失。
YERO57c/YJGFc/UK114 蛋白家族的成员已在细菌和真核细胞中。萌芽酵母酿酒酵母包含两个不同的蛋白质的这个大家庭里，Hmf1p 和 Mmf1p。我们以前已经表明 Mmf1p 是线粒体蛋白功能相关的其人类同系物和能够影响线粒体 DNA 的维护。Mmf1 删除会导致丢失的线粒体基因组。使用高抑制方法，我们已确定大线粒体核糖体亚，MRPL40，是稳定在 Deltammf1 细胞中的线粒体基因的一种蛋白质。MRPL40 的表达并不妨碍 mtDNA 突变株缺乏线粒体蛋白 Abf2p 的损失。因此，MRPL40 并没有一般影响线粒体基因稳定，但它可能是具体 mmf1 null 应变。我们还显示 Deltamrpl40 细胞呈现类似的表型 mmf1 null 更紧张，减少了线粒体基因的稳定和增长速度。此外，我们观察到的 rho (+) Deltamrpl40 直接闪现这种四分体时，可获得单倍体的单元格包含非发酵碳源介质上。因此，复制和隔离的线粒体基因可以在没有 MRPL40 的情况下发生。我们还显示，另一个的线粒体核糖体蛋白，MRPL38，是能够克服的 Deltammf1 关联的缺陷。在一起，我们的研究结果表明 Mmf1p 和两种线粒体核糖体蛋白之间的链接。
损害的 SHOX 核定位 Léri Weill 综合征的原因。
我们报告矮小同源盒基因 SHOX 的核定位信号 (NLS) 的表征。内的 SHOX 基因突变导致 dyschondrosteosis Léri 威尔 (钻) 和兰格 mesomelic 发育不良 (LD) 以及特发性矮小 (ISS)。此外，haploinsufficiency 的 SHOX 特纳综合征也受到牵连。SHOX 表明要向核本地化的单元格类型特定转录激活因子。SHOX 蛋白包含中央的 homeodomain，其激活域与规管其目标序列在细胞核内的转录。为其核定位序列都不确定。删除映射的 SHOX NLS 实验表征确定非经典类型的基本信号，AKCRK，在 homeodomain 的识别螺旋。这五个氨基酸与细胞质记者蛋白一片融合导致其核易位。泛函分析的错义突变 R173C (C517T) 影响有限保修声明与劳工处的两个家庭中已确定的 SHOX NLS 表明突变的 SHOX 蛋白不能进入细胞核。相反，我们可以证明毗邻的突变的站点已确定信号的插入可以还原其核易位。这些结果证明损害的核定位作为 SHOX 相关疾病机理的基础。
改变的 DNA 绑定、 二聚反应和核易位的 SHOX Homeodomain 突变特发性矮小和 Leri 威尔 Dyschondrosteosis 中确定的。
身材矮小的同源盒基因 SHOX Haploinsufficiency 曾见于特发性矮小 (ISS) 和 dyschondrosteosis Leri 威尔 (钻) 的患者。除了完整基因缺失和突变，已在这两个病人的群体，导致 SHOX 蛋白质中氨基酸替换几个错义突变。错义突变的大多数被发现编码的配对类似类型的高保守的 homeodomain 地区积累。在此报告中，我们调查了在国际空间站和随钻测井的 SHOX 患者 homeodomain 的九个不同的氨基酸交流。我们都能显示这些突变导致 SHOX 由 DNA 绑定、 减少二聚反应的能力，和/或受损核易位损失的生物学功能的变化。此外，突变 p.R153L c.458G>T） 之一是转录激活中有缺陷即使它是仍然能够绑定到 DNA，dimerize，并转移到细胞核。因此，我们证明单错义突变的 homeodomain 从根本上损害 SHOX 关键职能，从而导致钻和国际空间站的患者中观察到的表型。
关于 Ser106 的磷酸化调节 SHOX Homeodomain 蛋白的细胞的功能。
内同源盒基因 SHOX 基因突变已矮身材和骨骼畸形发现 Léri-威尔 · 特纳和兰格暗示 SHOX 参与生长和骨形成的辨证分型与相关联。尽管临床意义的确切作用的 SHOX 和调节其职能的机制仍然未知。我们以前报告 SHOX 是核蛋白，特别是绑定 DNA 和充当转录激活因子。我们已经表明的 SHOX 异位表达导致细胞周期阻滞和凋亡在骨肉瘤原代细胞中。要进一步定性 SHOX，调查是否蛋白质可以磷酸化的目标。在这里，我们报告 SHOX 磷酸化丝氨酸残留体内研究以独占方式。二维磷酸肽映射显示 SHOX 磷酸到多个网站上不同程度的冲击。定点突变表明该丝氨酸 106 是主要的 SHOX 磷酸化站点。我们还表明，酪蛋白激酶 II phosphorylates 上丝氨酸 106 高效体外的 SHOX 和特定酪蛋白激酶 II 抑制剂减少强烈体内的 SHOX 磷酸化。最后，我们提供证据磷酸化可能发挥重要作用自磷酸化，在存在缺陷 S106A SHOX 突变体不能激活转录调节 SHOX 生物活动，和失败，促使细胞周期阻滞和凋亡。
法国巴黎银行是矮小同源盒基因 SHOX 转录目标。
矮小 SHOX 虚表示常见先天性形式的增长出现故障，并且是参与特发性矮小和增长赤字和骨骼异常 Leri 威尔、 兰格和 Turner 综合征患者的病因。虽然很多 SHOX haploinsufficiency 的临床和分子方面上的了解，目前未定义的 SHOX 调节骨生长的信号转导中的整合。在这里我们查明 NPPB 编码利钠肽、 法国巴黎银行、 知名心脏和利钠肽激素作为转录的 SHOX 目标。激活 NPPB 内源性启动子的 SHOX 能力使用串行删除 NPPB 基因启动子区域的荧光素酶记者检测中得到体现。绑定到 NPPB SHOX 的启动子是还表明体内由染色质固定和沉淀。我们还从 Leri Weill 综合征患者证明突变体 SHOX 两个启动子激活的缺乏。此外，人类生长板节免疫组织化学分析表明首次共表达的 BNP 并 SHOX 晚增生性肥厚软骨细胞。在一起这些数据强烈表明 BNP 表示的 SHOX 的直接目标。
SHOX 一目了然： 从基因到蛋白质。
短身材同源盒基因 SHOX 被确定为 Turner 综合征患者和某些患者特发性矮小身材矮小表型的遗传原因。不久后，SHOX 突变也与增长失败和骨骼畸形 Léri-威尔 dyschondrosteosis 和兰格 mesomelic 发育不良患者看到相关联。今天据估计 SHOX 突变发生发生率的大约 1:1,000 新生儿，使这种基因突变导致人类生长失败的最常见的遗传缺陷之一。这一审查概述 SHOX 参与几个矮小综合症，并介绍我们认识的 SHOX 功能及其调控的研究进展。我们还将讨论当前证据指向此蛋白在生长和骨骼发育中的作用的文献中。这些研究改善了 SHOX 基因和蛋白质功能的我们的知识，并已洞察矮小的病因。然而，SHOX 骨发育中的确切作用仍依然遥不可及，是下一个重大挑战，在这一领域的研究人员。
通过其非结构蛋白 NS1、 细小病毒 H 1 诱使积累的活性氧诱导细胞凋亡。
大鼠细小病毒 H-1 (H 1PV) 作为一种抗癌制剂，吸引了高度重视，因为它不是对人类致病，有 oncotropic 和 oncosuppressive 的属性。病毒的非结构性 NS1 蛋白认为调解 H 1PV 细胞毒性作用，但其确切的贡献这一进程仍然是未定义。在此研究中，我们分析了对人类细胞增殖和细胞活力 H 1PV NS1 蛋白的影响。我们展示 NS1 表达式是不足以促使在 G(2) 阶段，通过半胱氨酸蛋白酶 9 和 3 激活和细胞裂解细胞凋亡细胞的积累。同样，野生型 H 1PV 感染细胞在 G(2) 阶段逮捕，并接受细胞凋亡。此外，我们还显示，这两种与 DNA 双链断裂关联的表达式的更高水平的细胞内活性氧 (ROS) NS1 和 H 1PV 感染导致。抗氧化剂治疗可降低活性氧水平，并强烈降低 NS1 和病毒诱导的 DNA 损伤、 细胞周期阻滞和凋亡，指示 NS1 诱导 ROS H 1PV 细胞毒性的重要调解人。
丁酸钠与 UCN 01 已标记对宫颈癌细胞的抗肿瘤活性。
丁酸钠 (NaB)、 组蛋白去乙酰酶抑制剂与 7-羟基-staurosporine （UCN-01） 对人宫颈癌细胞的细胞毒性结合的效果进行评价。
大鼠细小病毒 H 1PV 对肿瘤细胞通过遗传工程病毒衣壳的重定目标。
大鼠细小病毒 H 1PV 是副作用的有前途的抗癌药在人类赋予其 oncosuppressive 属性和没有已知。H 1PV 优先复制在转化的细胞，但这种病毒可以输入正常和肿瘤细胞。正常细胞吸收固远离肿瘤目标病毒性剂量的很大一部分。因此，针对具体 H 1PV 进入肿瘤细胞是重要的是要增加基于细小病毒病的治疗方法的疗效。在此研究中，我们首次发现，唾液酸 H 1PV 条目中发挥着关键作用。然后，我们转基因 H 1PV 衣壳，改善其对人类肿瘤细胞的亲和力。通过解决的晶体结构密切相关的细小病毒分钟病毒小鼠的类比，我们开发的硅三维 (3D) 模型的 H 1PV 野生型衣壳。我们基于此模型，确定假定氨基酸参与细胞膜识别和病毒进入一级的对称的衣壳，所谓的酒窝区域内二折轴的。这些残留物的原位诱变大大减少的绑定和 H 1PV 进入许可的单元格。工程项缺陷病毒衣壳，然后插入循环 RGD-4 C 肽在其三折轴穗的水平。此肽绑定 α(v)β(3) 和 α(v)β(5) 整合素，抗原在癌细胞和越来越多的血管。插入的肽救出病毒性传染性走向超量表达 α(v)β(5) 整合素，由重新设计病毒造成高效被害，这些单元格的单元格。这项工作演示 H 1PV 可以重基因定向通过其衣壳修改显示在癌症治疗中更有效地利用这种病毒很有前途。
