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Articles by Archana Khurana in JoVE
JoVE General
重组昆虫细胞中的mCD1d的蛋白质的生产方法。
Department of Developmental Immunology, La Jolla Institute for Allergy and Immunology
一个方法，准备昆虫细胞和感染杆状病毒重组mCD1d mCD1d四聚体的proteinand生产的目的。
Other articles by Archana Khurana on PubMed
适配器蛋白 AP-3 是介导 CD1d 抗原提呈的鞘糖脂和 Valpha14i NKT 细胞发育所必需的。
相对较少是 CD1 分子已知约导致糖脂的演示文稿的途径。在这里我们显示适配器蛋白质复杂 3 (AP-3） 是必需的要求内化和处理的糖脂抗原有效演示文稿。AP 3 与 CD1d，鼠标交互和细胞的小鼠缺的 AP-3 有 CD1d 细胞表面现象的增加和减少在晚 endosomes 中的表达。从 AP 3 缺陷小鼠的脾细胞已提交到自然杀手 T (NKT) 细胞糖脂的能力降低。此外，AP 3 缺陷小鼠有显著降低的 NKT 细胞人口，虽然这不由 self-tolerance 可能会导致从 CD1d 表面增加引起。这些数据表明，也可能会选择 NKT 细胞的内源性配体代 AP 3 依赖。然而，MHC 类二无功 CD4 + T 淋巴细胞功能的不会改变的 AP 3 缺。符合这种分歧从类二通路，NKT 细胞发育和 CD1d 抗原提呈不通过减少不变链虚了。这些数据表明 AP 3 要求是 CD1d 路径在小鼠中的特定属性和，虽然 MHC II 类分子和 CD1d 晚 endosomes 或溶酶体中发现，不同的途径调解其胞内贩卖。
CD1d 细胞质尾巴鼠标适配器蛋白 3 依赖和独立机制介导 CD1d 贩运和抗原的演示文稿。
短细胞质的尾巴鼠标 CD1d (mCD1d) 是其 endosomal 本地化、 一些糖脂 Ags、 演示文稿和 Valpha14i NKT 细胞发育的需要。这条尾巴有四氨基酸 Tyr 包含主题，Tyr-谷氨酰胺-Asp-异亮氨酸 (YQDI)，类似于那些已知为重要的与调解的许多不同的蛋白质 endosomal 本地化的适配器蛋白复合物 (AP) 之间相互作用的序列。事实上，mCD1d 表明先前与复杂的 AP 3 适配器进行交互。在本研究中，我们的突变每个氨基酸中的 YQDI 母题，以确定影响 mCD1d 贩卖人口、 与适配器，其相互作用和其胞内的本地化的整个母题顺序的重要性。结果表明，各 Y、 D、 氨基酸是重大功能，因为在每个职位的突变改变细胞内分布的 mCD1d，并减少其目前鞘糖脂的 NKT 细胞的能力。然而，三种氨基酸并非所有行事方式相同因为他们有别于它们是如何影响细胞内分布的 CD1d、 内化，其速率和其与 AP 3 亩亚进行交互的能力。我们的研究结果强调多个步骤，包括与 AP 2 适配器和 AP-3 的交互所需的正常贩卖的 mCD1d 和只有少量细胞质氨基酸介导这些不同的步骤。
微粒体甘油三酯转移蛋白 Lipidation 和控制 CD1d 的抗原递呈细胞。
微粒体甘油三酯转运蛋白 (MTP) 加载到载脂蛋白 B、 血脂的内质网 （ER） 伴侣还规定了 CD1d 的糖脂抗原在肝脏和小肠中的演示文稿。我们显示 MTP RNA 和蛋白的抗原递呈细胞 (Apc) 逆转录-聚合酶链反应和免疫印迹法的小鼠肝外周血单个核细胞和鼠标和人类 B 细胞株。功能的中期计划，表现出特定的甘油三酯转移活动，是存在于小鼠脾细胞和 CD1d 阳性鼠标 NKT 杂交瘤细胞中。中一种新型体外转移检测方法，纯净的中期计划直接转让磷脂，但不是甘油三酯、 重组 CD1d。 化学抑制剂的 MTP 脂质转移并不影响主要组织相容性复合类二、 演示文稿的卵清蛋白，但大大减少 CD1d 介导的演示文稿，α-半 （alpha galcer) 和内源性抗原小鼠脾脏和骨髓树突状细胞 (Dc)，以及人类 APC 线和单核细胞源性人单核细胞线 U937 DCs。 沉默 MTP 表达影响 CD1d 函数如图所示的减少演示文稿的 alpha galcer。我们建议中期计划行为上游的 saposins 和职能作为 ER 受命通过加载到新生 CD1d 内源性脂类。此外，我们的研究表明小分子抑制剂可用于调节 NKT 细胞的活性。
合成与 Sphinganine 类似物 KRN7000 和浩大的评价。
[结构： 请参阅文本]Phytosphingosine 含 α-galactosylceramides （α-GalCers），KRN7000 和浩大，表明要激活 NKT 细胞通过与 CD1d、 抗原提呈蛋白 CD1 家庭成员的互动。来自 KRN7000 刺激的 NKT 细胞的证据表明 alpha GalCers 可能包含在治疗或预防各种病毒、 细菌，和自身免疫性的条件中的应用。此外，浩大，KRN7000，截断模拟出现诱使 T (H) 2 的偏见，这可能会对治疗自身免疫和炎症条件的影响。我们编写，直接 sphinganine 包含类似于 KRN7000 和浩大，1 和 2，并发现它们具有可比性，在活动中向父化合物诱导释放的白细胞介素-2、 IL-4 和 IFNgamma。此外，复合 2 导致类似浩大与观察到的细胞因子偏见。这是重要的因为 sphinganines 是比 phytosphingosines，它应有利于特区研究更轻松地访问。
修改后的 α-半乳糖神经酰胺染色和刺激自然杀伤 T 细胞。
CD1d 演示文稿的 α-半乳糖神经酰胺对自然杀伤 T 细胞一直是研究的联络点的规管 T 细胞。KRN7000，最初从结构活性研究抗肿瘤特性的海绵糖脂，生成 α-半乳糖神经酰胺目前最常使用配体激动剂，用于 NKT 细胞染色。但是，此糖脂宁患有溶解性极差和可用性。我们总结了 α-半乳糖神经酰胺与改进溶解度有效渍 NKT 细胞，鼠标和人权，并刺激细胞因子释放在低浓度的 KRN7000。
自然杀手 T 细胞识别甘油二酯抗原的致病细菌。
自然杀手 T (NKT) 细胞识别鞘糖脂提出 CD1d 分子和已链接到微生物感染的防御。以前承认的 NKT 细胞定义外国鞘糖脂是唯一发现病源 sphingomonas 细菌。在这里我们显示鼠标 NKT 细胞也承认和糖脂、 甘油二专门酯，从伯氏疏螺旋体，导致莱姆病。B.螺旋体派生、 糖脂诱导 NKT 细胞增殖和细胞因子生产和此糖脂抗原效价是依赖酰基链的长度和饱和度。这些数据表明 NKT 细胞识别糖脂以外在 sphingomonas 中的类别，并建议 NKT 细胞反应的 T 细胞受体介导的糖脂识别驱动可能提供保护，防止各种病原体。
参与的分泌及 Endosomal 车厢内键入二 NKT 细胞外源自我-脂的演示文稿中。
自然杀手 T (NKT) 细胞认识自我和外国脂质 Ags 提出 CD1 分子。虽然演示文稿的海洋海绵派生脂质 alphaGalCer 一类 NKT 细胞已经好研究、 关于自我糖脂演示文稿第一类，或者键入二 NKT 细胞所知甚少。在这里我们调查了演示文稿的自我糖脂到具体确认的硫苷脂，单一物种的类型二 NKT 细胞的硫苷脂即 lyso-硫苷脂但不是含附加酰基链其他 sulfatides。相比其他的 sulfatides 或 alphaGalCer，lyso-硫苷脂将绑定到 CD1d 低亲和力。虽然板绑定 CD1d 是在中性 ph 值在介绍 lyso-硫苷脂效率低下，是有效地提出在酸性 ph 值和 saposin C.下MCD1d 溶酶体贩卖是必需一类 NKT 细胞的 alphaGalCer 演示文稿，它并不重要 lyso 硫苷脂键入二 NKT 细胞的演示文稿。始终如一，装甲运兵车在溶酶体脂质转运蛋白缺陷有效地陈述 lyso-硫苷脂。演示文稿的 lyso-硫苷脂抑制伯氨喹、 concanamycin A、 莫能菌素、 放线菌酮，和微粒体甘油三酯转运蛋白抑制剂，但保持不变之后 brefeldin A.渥漫青霉素介导抑制脂质演示文稿的治疗，但对于 PI-3kinase mCD1d 贩运指示着重要的作用。集体，我们的数据表明可以通过分泌和 endosomal 车厢提出弱 CD1d 绑定自我糖脂配体 lyso-硫苷脂等。因此这项研究提供了重要的见解 CD1d 限制 T 细胞外源自我糖脂演示文稿。
糖脂 Sphingomonas 自然激活自然杀伤 T 细胞的能力差别很大。
鼠标自然杀手 T (NKT) 细胞表达不变 T 细胞抗原受体 (TCR) 承认鞘糖脂 (GSLs) 从 Sphingomonas 细菌。不过，先前测试，合成抗原被为了合成的强效激动剂 α-半乳糖神经酰胺 (alphaGalCer)，其中包含单糖和 C18:0 鞘氨醇脂极为相似。但是，某些 Sphingomonas 细菌，也有低聚糖含 GSLs，和他们通常带有不同鞘氨醇链包括一个与环丙基环含 C21:0 综合几个 GSLs鞘氨醇 (C21cycl)。在这里我们用含天然四糖或 C21cycl 鞘氨醇合成 GSL 抗原研究 NKT 细胞的刺激。我们的研究结果表明是有很大的可变性的抗原性不同的自然 Sphingomonas 糖脂，与 C21cycl 鞘氨醇具有中间效能和参展有限的低聚糖含抗原或没有刺激性的能力。
不变的 NKT 细胞都需要环境抗原诱导的气道炎症。
固定 NKT 细胞 (iNKT) 是迅速开展效应功能的 T 淋巴细胞的唯一子集。在这项研究，我们报告多数不育房子尘提取 (HDEs) 的测试包含的抗原激活鼠标和人类 iNKT 细胞的能力。HDEs 在卵清蛋白 （卵） 佐剂样属性-诱发的哮喘模型，这是依赖于 Vα14i NKT 细胞疫苗接种的动物不足 iNKT 单元格显示大大减毒的免疫反应和气道炎症。此外，行政与卵 HDEs 相互补充 Vα14i NKT 细胞和常规 CD4(+) T 细胞在肺里，表现出深刻的免疫反应 Th2 细胞因子和白细胞介素 17A 协同作用的细胞因子的合成。这些数据表明 iNKT 细胞抗原更为广泛分布在环境中比先前预期。此外，作为抗原性活动中不同的房子，差别很大，他们进一步建议 iNKT 细胞对环境的抗原，特定于某些环境的反应可能会促进对常规呼吸过敏原的宣传。
不变的自然杀伤 T 细胞识别致病性革兰氏阳性细菌糖脂。
自然杀手 T 细胞 (NKT 细胞) 承认提出 CD1d 糖脂抗原。这些细胞表达进化保守、 不变的 T 细胞抗原受体 (TCR)，但驱动器 TCR 养护的部队仍然不确定。在这里我们展示 NKT 细胞识别含有甘油二酯的糖脂从肺炎链球菌、 社区获得性肺炎和组 B 链球菌，这将导致新生儿脓毒症和脑膜炎的主要原因。此外，CD1d-依赖性反应的 NKT 细胞被激活和主机保护所必需的。糖脂的答复是依赖于 vaccenic 酸，这是目前在哺乳动物细胞中的浓度低。我们的研究结果显示如何微生物血脂立场不变 TCR 及大多数都承认为糖值得注意的是，扩展的微生物范围承认的此守恒 TCR 到几个重要临床意义的细菌。
回馈干扰素 γ 偏向自然杀伤 T 细胞的糖脂。
自然杀手 T (NKT) 细胞识别提出 CD1d 糖脂。第一次抗原所描述的 α-半乳糖神经酰胺 (αGalCer)，是潜在的抗癌药，其活动取决于干扰素 γ 分泌。我们报告基于自然发生的 glycosphingolipid，plakoside A.αGalCer 的两个类似的物这些化合物诱导耐洗涤剂绑定到 CD1d 和增加的稳定性的抗原递呈脂质 CD1d 配合有关联的增强型的干扰素 γ 的单元格。结构分析类似物之一指示它更深地绑定内 CD1d 槽，提出更严格的脂质 CD1d 相互作用。就我们所知，这是第一个示例中的结构信息提供了解释为增加的脂质 CD1d 稳定性，可能负责的 Th1 偏见。我们提供的机制诱导干扰素 γ 的化合物，洞察和我们化合物激活 NKT 细胞，因为他们可以有治疗效用。
