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 JoVE General

Un compartimiento de Multi-CNS neuronas-glia Co-cultivo de microfluidos Plataforma


JoVE 1399 9/10/2009

1Department of Electrical and Computer Engineering, Texas A&M University (TAMU), 2Department of Veterinary Integrative Biosciences, Texas A&M University (TAMU)

Hemos desarrollado una novela de varios compartimientos de neuronas co-cultivo plataforma de microsistemas para la investigación in vitro de interacción axón-glia del SNC. La plataforma es capaz de conducir hasta seis experimentos independientes en paralelo y se fabrica utilizando un nuevo desarrollo de macro / micro método de fabricación de híbridos.

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Multi-capa De Plástico / Vidrio De Microfluidos Que Contiene Una Funcionalidad De Sistemas Eléctricos Y Mecánicos

Este documento describe un método para la fabricación de sistemas multicapa microfluídicos de una combinación de vidrio y materiales plásticos. Métodos y resultados de caracterización de las tecnologías de microfabricación que subyacen el flujo del proceso se presentan. El enfoque se utiliza para fabricar y caracterizar multi-capa de plástico / vidrio sistemas de microfluidos que contienen funcionalidad eléctrica y mecánica. Estampado en caliente, calor apilamiento de materiales plásticos, moldeo por inyección, microstenciling de electrodos, y la estereolitografía se combinaron con las técnicas convencionales de fabricación de MEMS para realizar los sistemas multi-capa. El enfoque permitió la integración de múltiples de plástico / vidrio materiales en un sistema monolítico único, proporcionado una solución para la integración de la funcionalidad eléctrica en todo el sistema, proporcionan un mecanismo para la inclusión de microactuadores como microbombas o válvulas, y proporciona una tecnología de interconexión para interfaz fluidos y componentes eléctricos entre el sistema de micro y el macro mundo.

Microsystems Para El Aislamiento Y Análisis Electrofisiológico De Las Células Cancerosas De La Sangre

Este artículo presenta el desarrollo de un microsistema para separar las células en suspensión de cáncer de mama en la sangre periférica y para repartirlas en función de sus características electrofisiológicas. Un modo de captura continua paramagnético (PMC) se utilizó microseparator magnetophoretic para el aislamiento de suspensión células de cáncer de mama en la sangre periférica basada en las propiedades magnéticas nativas de células sanguíneas sin ningún etiquetado como con sondas magnéticas. Un micro-espectroscopia de impedancia eléctrica (mu-EIA) sistema fue utilizado como una herramienta de análisis de células aguas abajo para extraer las características patológicas de las células de cáncer de mama. El sistema fue fabricado sobre sustratos de silicio y el vidrio que utilizan tecnologías de microfabricación y la estereolitografía. Los resultados experimentales de la serie PMC microseparator que el 94,8% de las células de cáncer de mama podría ser continuamente separados a partir de una muestra de sangre enriquecida con un flujo de 0,2 T magnético externo. Las impedancias eléctricas de líneas celulares de cáncer de mama humano de diferentes etapas patológicas (MCF-7, MDA-MB-231, y MDA-MB-435) se midieron utilizando mu-EIA y comparados con los de la línea normal de las células del tejido de mama humano MCF- 10A.

Caracterización Del Canal De Iones De Uso De La Espectroscopia De Impedancia Individual De La Célula

Un sistema de micro espectroscopía de impedancia eléctrica (microEIS) para el análisis de célula individual se ha desarrollado y se utiliza para diferenciar las actividades de los canales iónicos de las células cromafines de la especie bovina. K + y Ca2 + canales fueron bloqueados y sus impedancias eléctricas se midieron sobre una gama de frecuencias de 100 Hz a 5,0 MHz y comparada con la de no bloqueados células cromafines. Cuando los canales iónicos se bloquearon, un aumento de la magnitud y la disminución de la fase de las impedancias medidos se observaron. Este resultado demuestra que las actividades de los canales iónicos se pueden distinguir mediante el microsistema desarrollado y se espera que este sistema puede ser utilizado para proporcionar información positiva / negativa de obstrucción del canal de iones en una configuración de cribado de alto.

La Cuantificación De La Heterogeneidad De Mama Líneas Celulares Del Cáncer a Través Plenario De Células Espectroscopia De Impedancia

La cuantificación de la heterogeneidad de las poblaciones de células tumorales es de interés para muchas aplicaciones de diagnóstico y terapéuticos, incluyendo la determinación de la etapa de tumores cancerosos. Hemos tratado de diferenciar humanos de mama líneas celulares de cáncer de diferentes etapas patológicas y compararlo con una línea normal de las células del tejido mamario humano mediante la caracterización de las propiedades de impedancia de cada línea celular.

El Impacto Del Estado Del Virus De Epstein-Barr En Los Resultados Clínicos En El Difuso De Células B Grandes Linfoma

Para definir el impacto pronóstico de Epstein-Barr (VEB) en el difuso de células B grandes (DLBCL), que investigó el estado de EBV en los pacientes con DLBCL. En total, 380 diapositivas de tejido incluido en parafina estaban disponibles para el análisis por el VEB codificada en el ARN-1 (Eber) de hibridación in situ, y 34 casos (9,0%) fueron identificados como Eber-positivo. Eber positividad se asoció significativamente con la edad mayor de 60 años (P = .005), la etapa más avanzada (p <0,001), más de una afectación extraganglionar (p = 0,009), mayor índice de Pronóstico Internacional (IPI) grupo de riesgo ( p = 0,015), presencia de síntomas B (p = 0,004), y peores resultados que el tratamiento inicial (p = 0,006). Los Heber (+) los pacientes con DLBCL demostraron una supervivencia considerablemente más pobre en general (EBER (+) vs EBER (-) 35,8 meses [95% intervalo de confianza (IC), los meses 0-114.1] frente a no alcanzado, p = 0,026) y la progresión la supervivencia libre (EBER (+) vs EBER (-) 12,8 meses [IC 95%, 0-31.8 meses] frente a 35,8 meses [IC 95%, 0-114.1 meses], respectivamente (P = 0,018) en el centro nongerminal. las células B como subtipo, Eber en la positividad de hibridación in situ conserva su significación estadística a nivel multivariante (p = 0,045). Nongerminal centro-B como de células los pacientes con DLBCL con positividad EBER mostraron una supervivencia considerablemente más pobre en general con 2,9 veces ( 95% IC, 1.1 a 8.1) de riesgo de muerte. En conjunto, los pacientes con DLBCL Eber hibridación in situ + a cabo más rápido deterioro de la evolución clínica de la respuesta al tratamiento más pobres, la supervivencia y la supervivencia libre de progresión.

Los Hidrogeles Thermoresponsive Nanocompuestos Con El Comportamiento De La Célula Que Libera

Poli (N-isopropilacrilamida) (PNIPAAm) hidrogeles se vuelven más hidrófobo cuando cambiar de una forma reversible de hinchamiento con agua a un estado deswollen encima de la temperatura de transición de fase de volumen (VPTT, aproximadamente 33 grados C) que se ha utilizado para modular la adhesión celular. En el presente trabajo, hemos preparado nuevos hidrogeles nanocompuestos thermoresponsive compuestas de un hidrogel PNIPAAm matriz y nanopartículas polisiloxano coloidales (aproximadamente 220 nm de diámetro medio) a través de fotopolimerización in situ de soluciones acuosas de monómero NIPAAm, N, N'-metilenbisacrilamida (BIS, reticulante) , fotoiniciador y nanopartículas polisiloxano (0.5-2.0% en peso basado en el peso de solución) en aproximadamente 7 grados C. El VPTT de los hidrogeles nanocompuestos no se altera con respecto al hidrogel PNIPAAm puro. El análisis mecánico dinámico y ensayos de tracción reveló que un mayor contenido de nanopartículas producen generalmente propiedades mejoradas de hidrogel mecánicas. Las superficies de los hidrogeles nanocompuestos se convirtió cada vez más hidrófobo a todas las temperaturas entre 10 y 40 grados C como la cantidad de nanopartículas hidrofóbicas polisiloxano se incrementó. Cuando se enfría de 37 a 25 grados C, ratón células precursoras de músculo liso (10T1 / 2) fueron separados efectivamente a partir de las superficies de hidrogel de nanocompuestos. La utilidad de photopatterning para crear micropilares de superficie que comprenden hidrogeles nanocompuestos se demostró.

No Compensación De Las Funciones Entre El Nckalpha Y Nckbeta De PDGF-BB De Señalización Para Promover La Migración De Fibroblastos De Piel Humana

Derivado de las plaquetas del factor de crecimiento BB (PDGF-BB) es una Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) ha aprobado el factor de crecimiento, que actúa como un mitógeno y motogen de fibroblastos dérmicos (FD), para la curación de la piel herida. Los dos estrechamente relacionados SH2/SH3 proteínas adaptadoras, Nckalpha y Nckbeta, la conexión de señalización de PDGF-BB en el citoesqueleto de actina y la motilidad celular. El mecanismo no ha sido completamente comprendido. En este estudio, se investigó, al lado del otro, los papeles de Nckalpha y Nckbeta de PDGF-BB-estimuló la migración DF. Hemos encontrado que las células que expresan el mutante PDGFRbeta-Y751F (prevención Nckalpha vinculante) o mutante PDGFRbeta-Y1009F (prevención Nckbeta vinculante), las células aisladas de Nckalpha DF-o Nckbeta knockout de ratones y células primarias de DF humanos con ARN de interferencia (RNAi), caída de la endógena o Nckalpha Nckbeta todos los no migran en respuesta a PDGF-BB. La sobreexpresión de la mitad del dominio SH3 Nckalpha o Nckbeta solo en DF humanos también bloqueó el PDGF-BB-inducida por la migración celular. Sin embargo, ni Nckalpha ni Nckbeta se requiere para la activación del receptor del PDGF, p21 activa la proteína quinasa (Pak1), AKT, regulada por señal extracelular quinasa (ERK) 1/2, o p38MAP por PDGF-BB. A pesar de PDGF-BB estimula la translocación de la membrana de tanto Nckalpha y Nckbeta, Nckalpha apareció para mediar en la señalización Cdc42 para la formación de filopodium, mientras que Nckbeta mediada Rho de señalización para inducir a las fibras de estrés. Así, este estudio ha aclarado los papeles independientes y mecanismos de acción de Nckalpha y Nckbeta en el DF la migración, que es fundamental para la cicatrización de heridas.

Microfluidos Compartimentado Co-cultura Plataforma Para La Investigación Del SNC Mielina Axón

Este artículo presenta una circular de microfluidos compartimentado co-cultivo de la plataforma que se puede utilizar para el sistema nervioso central (SNC) la investigación axón mielinización. La plataforma de microfluidos se compone de un compartimento soma y un compartimiento de axón / glía conectado a través de matrices de axón de guía de microcanales. Gliales productoras de mielina, oligodendrocitos (OLS), colocados en el compartimiento de axón / glía, interactuar con los axones, pero no sólo con somata neuronal confinados en el compartimiento de soma, que recuerda a la situación in vivo, donde muchas fibras de axones están mielinizados por MCO a distancia de cuerpos de células neuronales. Las neuronas del prosencéfalo primarios de ratas embrionarias día 16-18 fueron cultivadas en el interior del compartimiento de soma por dos semanas para que puedan madurar y formar amplias redes de axones. Progenitores OL, aislados a partir de cerebros de rata postnatal día 1-2, se añadieron luego al compartimiento axón / glía y co-cultivadas con neuronas para un período adicional de dos semanas. El microdispositivo mostró aislamiento fluídica entre los dos compartimientos y con éxito aislados órganos de células neuronales y dendritas de axones en crecimiento a través de las matrices de axón de guía de microcanales en el compartimiento de axón / glía. La circular de la cultura co-dispositivo desarrollado aquí mostraron excelentes características de carga de células, donde un número significativo de células fueron colocadas cerca de los microcanales de guía axonal. Esto aumenta significativamente la probabilidad de los axones que cruzan estos microcanales como se demuestra por el más del 51% del área del compartimiento de axón / glía cubierto con axones dos semanas después de la siembra de células. Progenitores OL co-cultivadas con los axones en el interior del compartimiento de axón / glía éxito diferenciado en OLs maduros. Estos resultados indican que este dispositivo puede ser utilizado como un excelente en co-cultivo in vitro para estudiar plataforma localizada axón-glía interacción y de señalización.

Microfabricated Matrices De Células De Combustible Microbianas Reveal Microbios Electroquímicamente Activo

Células de combustible microbianas (MFC) son notables "energía verde", los dispositivos que se aprovechan de los microbios para generar electricidad a partir de compuestos orgánicos. Dispositivos de MFC en la actualidad están utilizando y estudiando no generan suficiente energía para soportar aplicaciones generalizadas y rentable. Por lo tanto, la investigación se ha centrado en estrategias para aumentar la potencia de los dispositivos de MFC, como explorar más electroquímicamente los microbios activos para ampliar las ya conocidas familias de pocos electricigen. Sin embargo, la mayoría de los dispositivos de MFC no son compatibles con el cribado de alto rendimiento para la búsqueda de microbios con mayores capacidades de generación de electricidad. A continuación, describimos el desarrollo de una amplia microfabricated MFC, una plataforma compacta y fácil de usar para la identificación y caracterización de los microbios activos electroquímicamente. La matriz de MFC consta de 24 cámaras integradas ánodo y el cátodo, que funcionan como 24 MFC miniatura independientes y apoyar las comparaciones directas y paralelo de actividades microbianas electroquímicas. Los perfiles de generación de electricidad de las cámaras de MFC lugares distintos de la matriz de carga con Shewanella oneidensis MR-1 difieren en menos del 8%. Una pantalla de los microbios ambientales utilizando la matriz identificó un aislado que estaba relacionado con la Shewanella putrefaciens IR-1 y SP Shewanella. MR-7, y se muestra de 2,3 veces mayor producción de potencia que el oneidensis S. MR-1 cepa de referencia. Por lo tanto, la utilidad de la matriz de MFC se demostró.

Micropatterning De Poli (dimetilsiloxano) Uso De Un Fotoprotector Despegue Técnica Para El Aislamiento Selectivo Eléctrica De Microelectrodos

Un poli (dimetilsiloxano) (PDMS) método basado en un patrón fotorresistente despegue técnica para hacer una capa de aislamiento eléctrico con aberturas selectivas se presenta. El método permite la creación de patrones PDMS con pequeñas características y diversos espesores sin ninguna limitación en los diseños y sin la necesidad de procesos complicados o equipos costosos. Modeladas capas PDMS se crearon por el líquido de revestimiento por centrifugado PDMS fase en la parte superior de un sustrato que tiene patrones de sacrificio fotorresistente, seguido por un fotoresist despegue proceso. El espesor de las capas modeladas PDMS podría ser controlada con precisión (6.5-24 m) mediante el ajuste de los parámetros de procesamiento tales como revestimiento por centrifugación PDMS-velocidades, proporciones PDMS dilución, y espesores fotorresistente sacrificio. PDMS características tan pequeñas como 15 micras, fueron modelados con éxito y los efectos de cada parámetro de procesamiento en los patrones finales fueron investigados. Pruebas de resistencia eléctrica entre los electrodos adyacentes con y sin la capa de aislamiento mostraron que la capa estampada PDMS funciona adecuadamente como una capa de aislamiento eléctrico. Biocompatibilidad de la capa estampada PDMS se confirmó mediante el cultivo de células neuronales primarias en la parte superior de la capa de hasta dos semanas. Una red neuronal extensa se formó con éxito, demostrando que este método patrón PDMS se puede aplicar a diversos microdispositivos biosensores. La utilidad de este método de fabricación se demostró además por éxito creando una capa modelada de aislamiento eléctrico en sustratos flexibles que contienen electrodos múltiples matrices.

Micro-macro Híbrido Suave De Litografía Maestro (MMHSM) Fabricación De Lab-on-a-chip Aplicaciones

Se presenta un nuevo micro-macro híbrido suave de litografía maestro (MMHSM) técnica de fabricación en microdispositivos que tienen características tanto de la microescala y la macroescala puede ser replicado con un sencillo suave paso la litografía. Un poli (metacrilato de metilo) (PMMA) maestro que tiene estructuras macroescala se creó por primera vez por una máquina fresadora de sobremesa. Un molde maestro impresión que tiene estructuras microescala se imprimió a continuación sobre la superficie de PMMA a través de un proceso en caliente gofrado para obtener un molde de PMMA maestro. Un poli (dimetilsiloxano) (PDMS) maestro se repitió a continuación, a partir de este maestro de PMMA a través de un estándar suave-litografía proceso. Este proceso permite tanto a microescala (altura: 3.20 micras, ancho: 20 a 500 micras) y macroescala (altura: 3,5 mm, anchura: 1,2-7 mm) las estructuras de co-existir en el molde maestro PDMS, de la que final de PDMS dispositivos podrían ser fácilmente sellada a cabo en grandes cantidades. Estructuras de microfluidos que requieren dimensiones de macroescala de altura, tales como depósitos o tuberías de fluidos, las interconexiones pueden ser directamente integrado en dispositivos de microfluidos PDMS sin suele utilizar procesos manuales de perforación. Estos errores de alineación significativamente reducido y el tiempo requerido para estas etapas de fabricación manual. En este trabajo se demostró con éxito la utilidad de este método de fabricación híbrida novela de fabricación de un dispositivo de microfluidos PDMS con 40 interfaces integradas de fluidos y una PDMS de varios compartimentos de la plataforma de co-cultivo de neuronas, donde milímetros escala compartimentos están conectados a través de matrices de 20 micras de ancho y 200 canales de microfluidos Microm largos. Las estructuras resultantes se caracterizan por la integridad de las dimensiones del patrón transferidos y la rugosidad de la superficie mediante microscopía electrónica de barrido y perfilometría óptica.

La Caracterización De Los Defectos óseos Controlados Mediante Técnicas De Ultrasonido En 2D Y 3D De Imágenes

El ultrasonido se está convirtiendo en una modalidad alternativa atractiva para los estándar de rayos X y TAC métodos de evaluación para las aplicaciones de los huesos. A partir de hoy, sin embargo, hay una falta de estudios sistemáticos que analizan el rendimiento de las técnicas de diagnóstico por ultrasonido en aplicaciones de imágenes de los huesos. Este estudio tiene como objetivo la comprensión de las limitaciones de rendimiento de nuevas técnicas de ultrasonido para los huesos de imágenes en experimentos controlados in vitro. Los experimentos se realizaron en muestras de huesos de mamíferos y no mamíferos con defectos controlados con un tamaño que van desde 400 micras a 5 mm. Los hallazgos ecográficos son estadísticamente comparados con los obtenidos de las mismas muestras usando estándar de rayos X y las modalidades de imágenes de microscopía óptica. Los resultados de este estudio demuestran que es factible el uso de técnicas de diagnóstico por imágenes de ultrasonido para evaluar submilimétricas defectos óseos en tiempo real y con alta precisión y exactitud. Estos resultados también demuestran que las técnicas de imágenes por ultrasonido realizar comparativamente mejor que imágenes de rayos X y los métodos de imagen óptica, en la evaluación de una amplia gama de defectos controlados, tanto en los huesos de mamíferos y no mamíferos. En el futuro, las técnicas de imágenes por ultrasonido podría proporcionar un coste eficaz, en tiempo real, herramienta de diagnóstico segura y portátil para aplicaciones de imágenes óseas.

TbetaRII TbetaRI/Alk5-independent De Señalización De ERK1 / 2 En Células De Piel Humana De Acuerdo Con Distintos Niveles De Expresión TbetaRII

TGF unión al receptor de TGFß (TβR) activa R-Smad-dependiente de las vías, tales como Smad2 / 3, y las vías R-Smad-independientes, como ERK1 / 2. El mecanismo de la vía de TGF-TβRII-TβRI-Smad2 / 3 se establece, sin embargo, no se sabe cómo TGFß activa ERK1 / 2. Mostramos aquí que, aunque igualmente activa TGF Smad2 / 3 en todas las células, que activan selectivamente ERK1 / 2 en células de la dermis e inhibe la ERK1 / 2 en las células epidérmicas. Estos efectos opuestos correlacionada con los niveles de expresión distintos de TβRII, que son 7 - a 18-veces mayor en las células dérmicas que en las células epidérmicas. Reducción de la expresión en células dérmicas TβRII abolido TGFß estimulada ERK1 / 2 de la activación. Regulación al alza de expresión TβRII en las células epidérmicas de un nivel similar al que en las células dérmicas cambia TGF-inducida por ERK1 / 2, la inhibición de ERK1 / 2 activación. Más intrigante, en contraste con la importancia de la igualdad de TβRII en la mediación de señalización TGF tanto Smad2 / 3 y ERK1 / 2, el derribo de TβRI/Alk5 la activación de sólo bloqueado Smad2 / 3 no, ERK1 / 2, en células de la dermis. Del mismo modo, la expresión de la constitutivamente activa TβRI TD-quinasa activada sólo Smad2 / 3 y no ERK1 / 2 en las células epidérmicas. Este estudio proporciona una explicación de por qué TGF activa selectivamente ERK1 / 2 en ciertos tipos de células y las evidencias directas de TβRI independiente TβRII de señalización de una vía R-Smad independiente.

Estructura Cristalina De La Bifuncional 5,10-metilentetrahidrofolato Deshidrogenasa / Ciclohidrolasa De Thermoplasma Acidophilum

Folato co-enzimas juegan un papel fundamental en los procesos de transferencia de un carbono celulares. Muchos eucariotas codificar la deshidrogenasa tetrahidrofolato tri-funcional / ciclohidrolasa / sintetasa (DEH / cyc / SYN) enzima, que consta de un dominio N-terminal bifuncional (DEH / cyc) y un dominio C-terminal monofuncional (SYN). Aquí reportamos los primeros estructuras análogas enzimas archeal, para la metilentetrahidrofolato bifuncional deshidrogenasa / ciclohidrolasa de Thermoplasma acidophilum (TaMTHFDC) como la proteína nativa y también como su complejo de NADP. La estructura TaMTHFDC es un dímero con una interfaz polar, así como un sitio de unión NADP que muestra el cambio conformacional menor. Las orientaciones de los residuos en el sitio de unión NADP no cambian en la unión del ligando, la incorporación de tres moléculas de agua que son hidrógeno enlazado con los grupos fosfato de NADP en la estructura del complejo. Nuestra información estructural contribuirá a una mejor comprensión de la base de THF y el metabolismo de un carbono.

Una Resonancia Magnética (RM) De Microscopía Del Sistema Mediante Una Bobina Microfluidically Cryo-refrigerado Planar

Se presenta el desarrollo de una bobina microfluidically crio-refrigerado plana para resonancia magnética (RM) microscopía. Criogénico de refrigeración de radiofrecuencia (RF) bobinas de resonancia magnética (IRM) puede mejorar la relación señal a ruido (SNR) del experimento. Criostatos convencionales suelen utilizar un espacio vacío para mantener las muestras a ser fotografiado, en especial las muestras biológicas, en o cerca de la temperatura ambiente durante la crio-enfriamiento. Esto limita la proximidad de una bobina de la crio-enfriado se puede colocar a la muestra. Al mismo tiempo, una pequeña bobina de la muestra de distancia mejora significativamente la capacidad de la RM debido a la profundidad de imagen limitado de micro-planares MR. Estas dos exigencias contradictorias plantean desafíos para el uso de la crio-enfriamiento en micro-MR. El uso de un criostato de microfluidos basada en la localizada crio-enfriamiento de micro-MR es un paso hacia la eliminación de estas restricciones. El sistema que aquí se presenta consiste en bobinas planas de sólo recepción con la crio-integradas de refrigeración por debajo de los canales de microfluidos, y una superficie de imagen en la parte superior de las bobinas planas separadas por un espacio de gas nitrógeno delgada. Polímeros estructuras de canal de microfluidos fabricados mediante procesos de litografía blanda se utiliza para fluir nitrógeno líquido bajo las bobinas con el fin de crio-frías las bobinas planas a la temperatura del nitrógeno líquido (-196 ° C). Dos características únicas del sistema de refrigeración crio-minimizar la distancia entre la bobina y la muestra: (1) la dimensión pequeña del canal de microfluidos polímero permite un enfriamiento localizado de las bobinas planas, mientras que se minimizan los efectos térmicos en la superficie de imagen cercana. (2) La superficie de formación de imágenes se separa de la bobina planar crio-refrigerado por un hueco fino a través del cual fluye gas nitrógeno para aislar térmicamente la superficie de imagen, manteniendo por encima de 0 ° C y la prevención del daño potencial para muestras biológicas. El efecto de enfriamiento localizado fue validado por simulaciones, pruebas de banco, y experimentos de RM. El uso de este sistema de crio-enfriada bobina planar dentro de un sistema de 4,7 Tesla MR resultó en un promedio de imagen mejora SNR de 1,47 ± 0,11 veces con respecto a la temperatura ambiente similares-bobinas.

Aire De Cátodo De La Célula De Combustible Microbiana De Arreglo: Un Dispositivo Para Identificar Y Caracterizar Los Microbios Electroquímicamente Activo

Células de combustible microbianas (MFC) han generado entusiasmo en las comunidades del medio ambiente y la bioenergía debido a su potencial para el acoplamiento de tratamiento de aguas residuales con la generación de energía y alimentar dispositivos diversos. La aplicación de estrategias como la mejora de las prácticas de cultivo microbianos y la optimización de los dispositivos de MFC se ha incrementado la capacidad de generación de energía de MFC. Sin embargo, las especies microbianas son sorprendentemente pocos con actividad electroquímica en el MFC se han identificado ya que los dispositivos actuales no son compatibles con los análisis paralelos o de cribado de alto rendimiento. Recientemente hemos demostrado la viabilidad de la utilización de métodos avanzados de microfabricación para la fabricación de un microarray de MFC. En este sentido, extender estos estudios al demostrar una microfabricated aire cátodo sistema de matriz de MFC. El sistema contiene 24 cátodos individuales de aire MFC integrados en un único chip. El dispositivo permite la comparación directa y simultánea de los diferentes microbios cargados en la matriz. Las muestras ambientales se utilizaron para validar la utilidad del sistema de matriz de aire de cátodo MFC y dos aislamientos previamente identificados, 7Ca (Shewanella sp.) Y 3C (Arthrobacter sp.), Se mostró a ver mejoradas las actividades electroquímicas de 2,69 mW / m (2 ) y 1,86 mW / m (2), respectivamente. Los experimentos con un gran escala convencional de aire de cátodo MFC validado estos resultados. El paralelo de aire de cátodo sistema de matriz de MFC se ha demostrado aquí que se espera promover y acelerar el descubrimiento y caracterización de los microbios activos electroquímicamente.

REGLAMENTO β-CATENIN/CBP-DEPENDENT De TGF-β-MEDIADA Transición Epitelio-mesenquimal (EMT) POR SMAD3

Las interacciones entre factor de crecimiento transformante β-(TGF-β]) y Wnt son fundamentales para muchos procesos biológicos, aunque los objetivos específicos, justificación de los resultados divergentes (bloque de diferenciación frente a la proliferación epitelial vs transición epitelio-mesenquimal (TEM)) y los mecanismos precisos muchos casos siguen siendo desconocidos. Hemos investigado β-catenina-dependiente y la transformación de las interacciones del factor de crecimiento β1 (TGF-β1) en las células epiteliales alveolares pulmonares (AEC) en el contexto de la EMT y la fibrosis pulmonar. Hemos demostrado anteriormente que el ICG-001, un inhibidor de molécula pequeña específico de la β-catenin/CBP (pero no β-catenin/p300) la interacción, mejora y revierte la fibrosis pulmonar e inhibe la TGF-β1 mediada por α-actina de músculo liso (α -SMA) y la inducción de colágeno en la CEA. Ahora demuestran que el TGF-β1 induce la LEF / TCF reportero de activación TOPFLASH y la acumulación nuclear β-catenina, mientras que aumenta el TGF-β LiCl inducida por α-SMA expresión, confirmando aún más la cooperación entre β-catenina y TGF-β-dependiente las vías de señalización. La inhibición y la caída de Smad3, caída de la β-catenina y la sobreexpresión de los efectos de ICAT derogados de TGF-β1 en la transcripción de α-SMA / expresión, lo que indica un requisito para la β-catenina en estos efectos dependen de Smad3. Después de TGF-β tratamiento, co-inmunoprecipitación demostraron la interacción directa entre Smad3 endógeno y β-catenina, mientras que la cromatina immunoprecipitation (CHIP)-re-chip identificó la regulación espacial y temporal de α-SMA a través de la formación de complejos entre los Smad3, β-catenina y la CBP . ICG-001 inhibe la expresión de α-SMA / transcripción en respuesta a TGF-β, así como α-SMA de ocupación promotor de β-catenina y la CBP, demostrando un hasta ahora desconocido necesaria TGF-β1/β-catenin/CBP-mediated favor de la EMT vía de señalización. Relevancia clínica fue demostrado por β-catenin/Smad3 co-localización y expresión de CBP en la CEA de los pacientes con FPI. Estos hallazgos sugieren un nuevo enfoque terapéutico para la fibrosis pulmonar, específicamente, desacoplamiento CBP / catenina dependientes de señalización corriente abajo de TGF-β.

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