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Articles by Arvydas Maminishkis in JoVE
JoVE Neuroscience
Modelli sperimentali per lo Studio di Fisiologia dell'epitelio pigmentato retinico e fisiopatologia
National Eye Institute, National Institutes of Health
Forniamo un metodo riproducibile per la coltura monostrati confluenti di cellule fetali dell'epitelio pigmentato retinico (hfRPE), le cellule che presentano morfologia, fisiologia, polarità e proteine e schemi di espressione genica dei tessuti adulti nativi. Questo lavoro è stato esteso ad un modello animale di malattie degli occhi diversi.
Other articles by Arvydas Maminishkis on PubMed
L'agonista Del Recettore P2Y(2) INS37217 Stimola Il Trasporto Fluido RPE in Vitro E Retinica Riattacco Nel Ratto
Per studiare gli effetti di INS37217, un sintetico agonista del recettore P2Y(2), su segnalazione di calcio intracellulare, elettrofisiologia e fluida trasporto in vitro e su distacco di retina sperimentalmente indotta negli occhi di topo in vivo.
Monostrati Confluenti Di Epitelio Pigmentato Retinico Embrionali Umane Coltivate Presentano Morfologia E Fisiologia Del Tessuto Nativo
Fornire un metodo riproducibile per la coltura confluente monostrati di cellule hfRPE che presentano la morfologia, la fisiologia, polarità e i modelli di espressione della proteina simili al tessuto nativo.
Analisi Di Ipopigmentazione Oculare Nei Topi Rab38cht/cht
A caratterizzare il fenotipo oculare derivante dalla mutazione di un gene candidato per la sindrome di Hermansky-Pudlak, Rab38.
PDGF-C E -D Indotta Proliferazione E Migrazione Delle RPE Umana è Abolita Da Citochine Infiammatorie
Il ruolo dell'infiammazione nella regolazione della funzione (RPE) epitelio pigmentato retinico e fattori di crescita è complessa e ancora poco compreso. Il presente studio indagato umana proliferazione di cellule RPE e migrazione mediata dal fattore di crescita derivato dalle piastrine (PDGF) e citochine infiammatorie.
Controllo Dei Gradienti Chemokine Di Epitelio Pigmentato Retinico
Citochine proinfiammatorie in malattie degenerative può causare la perdita della normale fisiologia e la distruzione dei tessuti circostanti. Nel presente studio, le risposte fisiologiche dell'epitelio pigmentato della retina fetale umano (hfRPE) sono state esaminate in vitro dopo attivazione polarizzata dei recettori delle citochine proinfiammatorie.
Costanza Di ERp29 Espressione Colta Della Retina Pigmento Cellule Epiteliali Nel Modello Del Mouse Carenti Ccl2/Cx3cr1 Della Degenerazione Maculare Legata All'età
Dato il ruolo critico dell'epitelio pigmentato retinico (RPE) nella patogenesi della generazione maculare legata all'età (AMD) e i legami tracciati proteine chaperone e malattie neurodegenerative, abbiamo rivolto alla cultura RPE dal modello del mouse Ccl2(-/-)/Cx3cr1(-/-) di AMD e valutare l'espressione della proteina chaperone ERp29.
Gene Expression Profiling in Malattie Autoimmuni Noninfectious Uveite
Uveite noninfectious è un prevalentemente mediata da cellule T autoimmuni, intraoculare malattia infiammatoria. Per caratterizzare il profilo di espressione genica nei pazienti con uveite noninfectious, PBMCs sono stati isolati da 50 pazienti con sindrome clinicamente caratterizzata noninfectious uveite. Un percorso specifico cDNA microarray è stato utilizzato per l'analisi di espressione genica e matrice PCR in tempo reale per ulteriore conferma. Sessantasette infiammazione e autoimmuni-geni associati sono stati trovati differenzialmente espressi nei pazienti di uveite, con 28 di quei geni che deve essere convalidati mediante PCR in tempo reale. Diversi geni precedentemente sconosciuti per uveite autoimmune, tra cui IL 22, IL-19, IL 20 e IL-25/IL-17E, sono stati trovati per essere altamente espresso tra pazienti affetti da uveite rispetto ai soggetti normali con IL-22 espressione altamente variabile tra i pazienti. Inoltre, ci mostra che IL 22 può interessare le cellule epiteliali del pigmento retinico umano primario diminuendo la resistenza totale del tessuto e inducendo apoptosi eventualmente diminuendo il livello di fosfo-Bad. Inoltre, i dati di microarray identificato un modello di espressione del gene possibile uveite associata, ha mostrato profili di espressione genica distinta in pazienti durante i periodi di attività clinica e di quiescenza, e ha dimostrato i modelli di espressione simile in relativi pazienti con fenotipo clinico simile. I nostri dati forniscono la prima prova che un sottoinsieme di IL-10 famiglie geni sono implicati nella uveite noninfectious e che IL 22 può interessare le cellule epiteliali del pigmento della retina umana. I risultati possono facilitare ulteriormente comprensione dei meccanismi molecolari di uveite autoimmune e altre malattie autoimmuni di origine infiammatorie.
Espressione, Localizzazione E Funzione Della Molecola Di Adesione Giunzionale-C (JAM-C) Nell'epitelio Pigmentato Della Retina Umana
Per determinare la localizzazione di JAM-C in RPE umana e caratterizzare le sue funzioni.
Integrina Alpha5beta1 Da Intermediario Attaccamento, La Migrazione E La Proliferazione Nell'epitelio Pigmentato Della Retina Umana: Pertinenza Per Malattia Proliferativa Della Retina
Lo scopo di questo studio era di determinare l'espressione e localizzazione dell'integrina alpha5beta1 nell'epitelio pigmentato della retina umana (RPE) e la sua capacità di modulare l'attaccamento di cellule RPE, proliferazione, migrazione e distribuzione di F-actina del citoscheletro.
IFN {gamma} Regola Trasporto Fluido Epitelio Pigmentato Della Retina
Gli attuali esperimenti mostrano che i recettori IFN sono principalmente localizzati nella membrana basolaterale dell'epitelio pigmentato della retina umana (RPE). L'attivazione di questi recettori in colture primarie di RPE fetale umano ha inibito la proliferazione cellulare e la migrazione, diminuito RPE potenziale mitocondriale della membrana, potenziale Transepiteliale alterato e resistenza e significativamente aumentato assorbimento fluido Transepiteliale. Questi effetti sono mediati attraverso percorsi segnalazione JAK-STAT e p38 MAPK. Secondo messaggero segnalazione attraverso il pathway cAMP-PKA - e interferon regulatory factor-1-dipendente dalla produzione di ossido di azoto/cGMP ha stimolato la CFTR alla membrana basolaterale e aumentato assorbimento fluido Transepiteliale. Esperimenti in vivo, utilizzando un modello di ratto della retina ha mostrato che l'IFN applicato alla superficie anteriore dell'occhio possono rimuovere il liquido supplementare depositata nello spazio extracellulare o al tra i fotorecettori retinici e RPE. Rimozione di questo fluido extra è stato bloccato da una combinazione di PKA e JAK-STAT inibitori pathway iniettato nello spazio al. Questi risultati dimostrano un ruolo protettivo per IFN nella regolazione della idratazione della retina attraverso la barriera emato-retinica esterna nei processi di malattia infiammatoria e forniscono la base per possibili interventi terapeutici.
MicroRNA-204/211 Altera La Fisiologia Epiteliale
Espressione di MicroRNA (miRNA) nell'epitelio pigmentato della retina umana fetale (hfRPE), retina e coroide pairwise sono state confrontate per determinare questi miRNAs che sono arricchiti da 10 volte o più in ogni tessuto rispetto a entrambi i suoi vicini. Mir-184, 187, 200a/200b, 204/211 e 221/222 sono arricchiti in hfRPE da 10 - a 754 volte confrontato con neuroretina o coroide (P < 0,05). Cinque di questi miRNAs sono arricchiti in RPE confrontato con 20 tessuti in tutto il corpo e sono 10 - a 20,000 volte più altamente espresso (P < 0,005). miR-204 e 211 sono il più altamente espresso nell'EPR. Inoltre, espressione di miR-204/211 è significativamente più basso in NCI60 pannello di linea cellulare tumorale rispetto a quella in 13 tessuti normali, suggerendo la progressiva disgregazione delle barriere epiteliali e aumentata proliferazione. Abbiamo dimostrato che recettore TGF-beta 2 (TGF-betaR2) e SNAIL2 sono il bersaglio diretto del miR-204 e che una riduzione nell'espressione di miR-204 porta ad una ridotta espressione di claudins 10, 16 e 19 (messaggio/proteine) coerente con la nostra osservazione che anti-miR-204/211 diminuita resistenza Transepiteliale del 80% e riduce la tensione della membrana cellulare e la conduttanza. L'anti-miR-204-indotta diminuzione nei livelli di proteina Kir7.1 suggerisce una via di segnalazione che collega TGF-betaR2 e mantenimento dell'omeostasi del potassio. Nel complesso, questi dati indicano un ruolo critico per la miR-204/211 nel mantenimento della fisiologia delle cellule e la funzione di barriera epiteliale.
Fattore Di Crescita Derivato Dalle Piastrine-DD Targeting Arresti L'angiogenesi Patologica Modulando La Fosforilazione Di Glicogeno Sintasi Chinasi-3beta
Fattore di crescita derivato dalle piastrine-DD (PDGF-DD) è un membro della famiglia PDGF recentemente scoperto. Il ruolo di PDGF-DD nella angiogenesi patologica e i meccanismi cellulari e molecolari sottostanti rimangono in gran parte inesplorata. In questo studio, utilizzando diversi modelli animali, abbiamo mostrato che l'espressione PDGF-DD era up-regolato durante l'angiogenesi patologica, e inibizione del PDGF-DD soppressi neovascolarizzazione della coroide e della retina. Abbiamo anche dimostrato un meccanismo romanzo mediando la funzione di PDGF-DD. PDGF-DD indotta glicogeno sintasi chinasi-3beta (GSK3beta) Ser(9) fosforilazione e defosforilazione Tyr(216) in vitro e in vivo, che conduce alla cellula aumentata sopravvivenza. Coerentemente, GSK3beta attività era necessaria per l'effetto antiangiogenetico di targeting PDGF-DD. Inoltre, PDGF-DD regolata l'espressione di GSK3beta e molti altri geni importanti per l'angiogenesi e l'apoptosi. Così, abbiamo identificato PDGF-DD come un gene bersaglio importante per la terapia antiangiogenetica a causa dei suoi effetti pleiotropici sulle cellule vascolari e non vascolari. Inibizione di PDGF-DD può offrire nuove opzioni terapeutiche per il trattamento di malattie neovascolare.
Modulazione Dell'espressione MCT3 Durante La Guarigione Della Ferita Dell'epitelio Pigmentato Della Retina
MCT3 è un protone accoppiato monocarboxylate transporter preferenzialmente espressi nella membrana basolaterale dell'epitelio pigmentato retinico (RPE) e ha dimostrato di giocare un ruolo importante nella regolazione pH e lattato concentrazioni nella retina esterna. Diminuita espressione di MCT3 in risposta al trauma o malattia potrebbe contribuire a cambiamenti patologici nella retina. Il presente studio ha seguito l'espressione di MCT3 dopo il ferimento e re-epithelialization di espianto RPE pulcino e culture RPE fetale umano (hf).
PDGF-CC Blocco Inibisce L'angiogenesi Patologica Agendo Su Bersagli Cellulari E Molecolari Multipli
L'importanza di identificare percorsi indipendenti VEGF angiogenesi patologica è sempre più riconosciuto come risultato la farmacoresistenza emergenti alle terapie anti-VEGF. PDGF-CC è il terzo membro della famiglia PDGF scoperto dopo più di due decenni di studi su PDGF-AA e PDGF-BB. La funzione biologica del PDGF-CC e i meccanismi cellulari e molecolari sottostanti rimangono in gran parte inesplorata. Qui, utilizzando diversi modelli animali, relazione che PDGF-CC inibizione di anticorpo neutralizzante, shRNA o eliminazione genetica soppressa neovascolarizzazione della coroide e della retina. Soprattutto, abbiamo rivelato che PDGF-CC targeting ha agito non solo tipi delle cellule più importanti per l'angiogenesi patologica, come il murale vascolare e delle cellule endoteliali, macrofagi, fibroblasti della coroide e cellule epiteliali del pigmento retinico, ma anche l'espressione di altri geni angiogenic importanti, come il PDGF-BB e PDGF recettori. A livello molecolare, abbiamo trovato che PDGF-CC regolati chinasi di glicogeno sintasi (GSK)-3beta fosforilazione ed espressione in vitro e in vivo. Attivazione di GSK3beta alterata angiogenesi indotta da PDGF-CC, e l'inibizione della GSK3beta abolito l'effetto antiangiogenetico del PDGF-CC blocco. Così, abbiamo identificato PDGF-CC come un gene bersaglio importante candidato per la terapia antiangiogenetica e PDGF-CC inibizione può essere di valore terapeutico nel trattamento delle malattie neovascolare.
I Linfociti CD4 + T Memoria Autoreattivi Che Mediano Uveite Cronica Risiedono Nel Midollo Osseo Attraverso Meccanismi Di STAT3-dipendente
Malattie autoimmuni organo-specifiche sono solitamente caratterizzate da ripetuti cicli di remissione e infiammazioni ricorrenti. Tuttavia, dove le cellule di T autoreattivi memoria risiedono tra episodi di infiammazione ricorrente è in gran parte sconosciuto. In questo studio, abbiamo stabilito un modello murino di Uveite cronica caratterizzata da perdita di cellule fotorecettrici progressiva, degenerazione della retina, retinite focale, vasculite retinica, Coroidite multifocale e neovascolarizzazione coroidale, fornendo per la prima volta, a nostra conoscenza, un utile modello per lo studio a lungo termine conseguenze patologiche di infiammazione cronica della neuroretina. Mostriamo che diversi mesi dopo l'inizio dell'uveite acuta, memoria autoreattivi T cellule specifiche per autoantigen della retina, interphotoreceptor retinoid-binding protein (IRBP), si trasferì al midollo osseo (BM). Le cellule memoria T IRBP specifici (IL-7Rα(High)Ly6C(High)CD4(+)) risiedeva in BM in stato di riposo, ma su restimulation convertito in IL-17/IFN-γ-esprimendo effettori (IL-7Rα(Low)Ly6C(Low)CD4(+)) che mediata uveite. Mostriamo ulteriormente che le cellule T dal mouse STAT3-carenti (CD4-STAT3KO) sono difettose in espressione α4β1 e osteopontina, difetti che correlato con incapacità di memoria IRBP specifica delle cellule T CD4-STAT3KO per il traffico in BM. Abbiamo trasferito adoptively uveite a topi ingenui utilizzando cellule BM da topi wild-type con Uveite cronica ma non BM cellule da CD4-STAT3KO, fornendo una prova diretta che le cellule T memoria che mediano uveite risiedono in BM e quel meccanismo di STAT3-dipendente può essere richiesto per la migrazione in e conservazione delle cellule memoria T BM BM identificare come una nicchia di sopravvivenza per le cellule T che provocare uveite suggerisce che le cellule stromali di BM che forniscono segnali di sopravvivenza di cellule memoria T autoreattivi e STAT3-dipendente meccanismi che mediano la loro delocalizzazione in BM sono attraenti bersagli terapeutici che possono essere sfruttate per esaurire selettivamente cellule T memoria che l'infiammazione cronica in auto.
CNTF Media Neurotrophic Factor Secrezione E Fluido Assorbimento Nell'epitelio Pigmentato Della Retina Umana
Ciliary neurotrophic factor (CNTF) protegge i fotorecettori e regola la loro macchine phototransduction, ma poco si sa circa gli effetti di CNTF sulla fisiologia (RPE) epitelio pigmentato della retina. Pertanto, abbiamo determinato l'espressione e la localizzazione dei recettori CNTF e la conseguenza fisiologica della loro attivazione in colture primarie di RPE fetale umano (hfRPE). Colta hfRPE express CNTF, CT1 e OsM e loro recettori, tra cui CNTFRα, LIFRβ, gp130 e OsMRβ, tutti localizzati principalmente presso la membrana apicale. CNTF esogeno, CT1 o OsM induce la fosforilazione di STAT3, e OsM inoltre induce la fosforilazione di ERK1/2 (chinasi di mappa p44/42). CNTF aumenta survivability RPE, ma non i tassi di fagocitosi. CNTF aumenta la secrezione di NT3 al bagno apicale e diminuisce quella di VEGF, IL8 e TGFβ2. Anche significativamente aumenta assorbimento fluido (J(V)) attraverso strati monomolecolari intatte di hfRPE attivando canali cloruro CFTR alla membrana basolaterale. CNTF induce profondi cambiamenti nella biologia cellulare, biochimica e fisiologia, compreso l'aumento nella sopravvivenza delle cellule, polarizzata secrezione di citochine/neurotrophic fattori e l'aumento di assorbimento fluido stazionario mediata dalla segnalazione JAK/STAT3 RPE. In vivo, questi cambiamenti, presi insieme, potrebbero servire a regolare il microambiente intorno a membrana della distale della retina/RPE/Bruch complesso e fornire una protezione contro le malattie neurodegenerative.
