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Articles by Asa Hagner-McWhirter in JoVE
JoVE General
CyDye DIGE 플루어 최소 염료를 사용하여 셀 표면 단백질의 선택적 Labelling
Research and Development, GE Healthcare Bio-Sciences AB
단순하고 구체적인 방법은 분획화 단계없이 형광 라벨 부착 및 세포 표면 단백질의 향상된 감지를위한 시연했다. 세포 표면 단백질의 차동 풍부한는 (2 - D) 2 차원 전기 영동과 Ettan ™ DIGE 기술을 사용하여 분석했다.
Other articles by Asa Hagner-McWhirter on PubMed
Murine Glucuronyl C5 Epimerase 유전자의 타겟된 중단 결과 Heparan 황산 L-iduronic 산 부족 및 신생아 치 사 율
Glycosaminoglycan, heparan 황산 (HS), embryogenesis 신호 이벤트를 조절 하는 단백질에 바인딩합니다. 모든 확인 된 단백질 바인딩 HS epitopes l iduronic 산 (IdoA) 포함. 우리 대상된 중단 murine d-glucuronyl C5 epimerase 유전자의 구조적으로 변경 된 HS IdoA 부족에 결과 보고. 해당 형 신장 agenesis 폐 결함과 골격 기형으로 치명적인입니다. 예기치 않게, 뇌, 간, 위 장관, 피부, 그리고 심장를 포함 하 여 주요 기관 시스템 정상 등장. 우리는 IdoA 단위는 2 O sulfation에 대 한 서로 다른 요구와 이기는 하지만 정상 신장, 폐, 그리고 골격 개발에 필수적인 찾으십시오. 대조적으로, 분명히 heparan 황산 염에 따라 비판적으로 알려진 주요 초기 발달 이벤트 Idoa의 부재에도 정상적으로 진행 합니다.
돌이킬 수 없는 Glucuronyl C5 Epimerization Heparan 황산 염의 생 합성에
Glucuronyl C5 epimerase d glucuronic 산 heparan 황산 염 생 합성에 l-iduronic acid 단위 변환 catalyzes. 기판 인식과 heparan 황산 전조 다 당 류의 N-substituent 패턴에 따라 N sulfated 수 비를 줄이는 끝 방향으로 인접 한 글루코사민 잔류물을 요구 한다. 적절 하 게 N sulfated 기판의 Epimerization d gluco 구성의 보존을 선호 하는 평형으로 수용 성 시스템에 자유롭게 뒤집을 수 있다 (Hagner McWhirter 대답, Lindahl, 미국와 리, 제이. Biochem (2000)입니다. J. 347, 69-75)입니다. 우리는 인간 배아 신장 293 셀 d-[5-(3) H] galactose 잠복기에 의해 셀룰러 시스템에서 epimerase 반응의 반전 기능을 공부 했다. 레이블과 glucuronic acid 단위와 heparan 황산 전조 다 당 류로 통합 되었다 iduronic 산 후속 C5-epimerization에 따라 손실 되었습니다. 그러나, oligosaccharides 성숙한 heparan 황산 체인 deaminative 분열 하 여 얻은 분석 표시 모든 glucuronic acid 단위 취약 하거나 저항 하는 epimerase 시퀀스에서 발생 했다 여부에 관계 없이 그들의 C5-(3) H 레이블을 유지 합니다. 최종 제품의 모든 (3) H 레이블을 O 황산 그룹 차단 때문에 분명히 수용 성 시스템에 epimerase와 함께 부 화를 저항 했다. 이 결과 나타내고 glucuronic 산 C5 epimerization vivo에서 효과적으로 되돌릴 수는 생 합성 기계 엄격한 조직에 대 한 논쟁.
Western Blotting 고성능 단백질 분석을 위한 근접 결 찰을 통해
서양 blotting는 강력 하 고 널리 사용 되는 방법, 하지만 검출 감도 및 특이성, 고품질 항 체 타겟된 단백질 검출에 따라 의존에 한계는 장애물을 극복 하기 위해. 원래의 장소에 근접 결 찰 분석 결과, 이중 항 체 인식 및 강력한 지역화 된 신호 증폭 기반 증가 검출 감도 및 특이성, phosphorylated 또는 상호 작용 단백질 등 복잡 한 목표를 식별 하는 능력과 함께 제공 합니다. 여기 우리는 서양 blotting에 원래의 장소에 근접 결 찰 분석 결과 메커니즘을 적용 했습니다. 이 조합은 허용 16-fold에 대 한 특정 대상 결 찰 반응에서 형성 하는 DNA 분자의 원 확대를 압 연 하는 등온 사용 또는 감지 감도에 큰 증가. 이중 항 체 인식 때문에 증가 한 특이성 보장 분석 매우 선택적 실험, 두 cross-reactive antitubulin 항 체의 조합을 사용 하는 경우 특정 밴드를 감지 (즉 생산 고유 일반 대역 모두 전통적인 서양 blotting에). 우리는 또한 하나의 항 체 수용 체에 대 한 감독과 근접 결 찰에 의해 phosphorylated 혈소판 유래 성장 인자 수용 체 β의 검출 시연 및 다른 phosphorylated 티로신 잔류물에 대 한 감독. 이것은 스트립 하 고 막 re-probing 또는 두 개의 별도 전통적인도 말 정렬을 위한 필요 피할. 우리 보여 고성능 현장에서 근접 결 찰에 기초를 둔 서양 여기 설명 blotting 향상 된 화학 및 형광 검출 시스템을 통해 탐지와 호환을 어떤 실험실에 따라서 쉽게 채택 될 수 있다.
