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Articles by Ashly Brown in JoVE
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유전자 Inducible의 운명 매핑에 대한 실용적인 접근법 : 셀을 선택하고 추적하는 비주얼 가이드 VIVO에서
1Department of Neuroscience, Division of Biology and Medicine, Brown University, 2Department of Molecular Biology, Cell Biology and Biochemistry, Division of Biology and Medicine, Brown University
유전자 Inducible의 운명 매핑 (GIFM) 마크와 훌륭한 공간과 시간적 제어 트랙 세포
Other articles by Ashly Brown on PubMed
조건부 기자 대립 개발 배아 및 배아 신경 시스템의 비교 분석
개발에 오랜 문제 transiently 유전자를 표현 하는 시 조 셀 복잡 한 해부학 적 및 기능적 구조에 기여 하는 방법을 이해 하는 것. 개발 신 경계에서 신경 회로 설립 셀 고유 혈통의 관계를 새로 고려 복잡성 추가 수준을 발생 합니다. 이러한 문제를 해결 하려면 누적 Cre/Loxp와 유전 유도할 수 있는 운명 매핑 (GIFM), 영구적으로 및 heritably 표시 함 CreER/loxP 사용 괜 찮 아 요 시간적 컨트롤과 progenitors 그리고 그들의 자손의 작은 인구 표시 모두 사용 했습니다. 두 방법에 사용 되는 핵심 구성 요소 모든 셀 형식에 표현 될 가능성이 있는 조건부 형질 allele 하지만 앞에 기자 대립 유전자 loxP 측면 중지 시퀀스 때문에 무부하입니다. 재조합, 따라 결과 대립 형질 유전자 '켜' 이며 constitutively 표현. 따라서, 기자 고화질 유전자 계보 추적 생체 조건으로 작동합니다. 현재 다양 한 전략, 하지만 그들의 재결합 효율 표시에 사용할 수 있는 기자 대립 이며 광범위 한 조직에 적용 철저 하 게 설명 하지. 기자 재조합/마킹 잠재력을 평가 하기 위해 우리는 Wnt1 transgene의 통제 Creer(t)을 활용 (누적, 유도할 수 있는 비 En1(Cre) 노크에 줄 3 명의 다른 기자와 함께에서 Wnt1-CreER(T)): R26R (LacZ 기자) Z/EG (EGFP 기자) 및 Tau-Lox-STOP-Lox-mGFP-IRES-NLS-LacZ (GFP/핵 LacZ 기자 막 대상). 우리는 배아의 날 (E) 뒤에 분석 하 고 성인에서 E10.0, E12.5, 8.5 세 기자 들의 각을 사용 하 여 Wnt1 혈통 표시. 우리는 또한 동일한 단계에서 En1 식의 역사를 가진 셀의 누적 마킹 비교. 우리 전체 산과 섹션 분석 하 여 기자 들을 평가 하 고 기자 들의 각각의 장단점을 확인. 기자 해명 복잡성 배아를 개발 하 고 이러한 계보에서 파생 된 뉴런의 axonal 프로젝션 패턴 Wnt1 및 En1 계보 기여 하는 방법의 비교 분석.
성인 태어난 Hippocampal 신경 세포는 더 많은, 더 빨리 성숙, 그리고 더 많은 쥐에서 보다 쥐의 행동에 참여
뉴런 해 마에서 성인 기에 걸쳐 태어난 고 성숙한 신경 세포에 비해 향상 된가 소성을 보여줍니다. 그러나, 거기에 젊은 신경 행동 작업의 성능에 기여 하는 여부에 충돌 보고서와 젊은 신경 세포의 성숙 시기와 행동 적자를 보여주는 연구에서 신생 감소의 기간 사이 명확한 관계가 없습니다. 우리는 이러한 불일치 쥐 및 쥐에 젊은 신경의 속성의 차이 반영 수 여부를 물었다. 우리 보고 젊은 신경 성인 쥐의 성숙한 신경 마커 프로필과 활동 유발 즉시 초기 유전자 발현 1-2 주 이전 마우스에 비해 표시. 그들은 또한 세포 죽음을 피할 가능성이 두 번 하 고 회로 학습으로 모집 10 배 더 높습니다. 이 비교는 다른 배경 긴장을 기준으로 성체의 높은 속도 표시 하는 쥐의 두 가지 변종이에 사실인 다. 새로운 neocortical 신경 세포의 밀도 쥐에 쥐 보다 5 배 큰 성체의 차이 해 마에 국한 되지 않습니다. 마지막으로, 기능 테스트, 우리가 찾아 그 메모리는 쥐에 쥐 보다 훨씬 더 큰 두려움을 젊은 신경의 기여. 이 결과 공개이 두 일반적으로 공부 설치류 종 사이의 새로운 신경이 소성 및 기능에 상당한 차이가.
분자 조직 및 Wnt1 식의 타이밍 정의 Midbrain 도파민 신경 Progenitors in Vivo의 동료
Midbrain (미사일) 도파민 신경 세포는 기능적으로 서로 다른 유형의 그리고 정확 하 게 조직된 해 부 그룹을 통해 복잡 한 기능을 조절. 미사일 뉴런 Wnt1 표현 progenitors embryogenesis 중 복 부 mesencephalon (vMes)에 위치에서 생성 됩니다. 그러나, 그것은 하지 명확 여부 조상 풀이 별개 동료 분자 id를 기반으로 분할 되 고 여부 유전자 발현의 타이밍 미사일 뉴런의 하위를 고유 하 게 식별 합니다. 이 연구에서 우리는 배아 일 (전자) 8.5-12.5에서에서 wnt1을 표현 미사일 progenitors 특정 공간 위치는 Vmes와 연결 하는 동적 분자 id가 보여줍니다. 우리는 또한 progenitors에 Wnt1 식의 타이밍 유전 유도할 수 있는 운명 매핑 (GIFM)를 사용 하 여 성인 미사일 신경의 해부학 적인 몸의 고유 동료의 배포 관련 가설을 테스트 했습니다. Wnt1 리니지 7 일 신 기원 동안 미사일 뉴런의 특정 동료에 기여 하 고 미사일 뉴런에 기여 다른 복 부의 도메인을 통해 predominates 보여 줍니다. 또한, 우리는 calbindin, GIRK2 및 calretinin을 표현 미사일 신경 하위 광범위 한 시간적 창 위에 표시 Wnt1 표현 progenitors에서 파생 됩니다 보여줍니다. GIFM 정량 분석을 통해 Wnt1 리니지 미사일 다양성 생성의 제한 된 역량 모델을 제거 하는 진보적인 혈통 제한 받아야 하지 않습니다 보여 줍니다. 흥미롭게도, 우리는 Wnt1 리니지 공헌 미사일 뉴런의 두 가지 중요 한 봉우리 E11.5 E9.5에서 발생 하는 폭로. 집단적으로, 우리의 연구 결과 미사일 신경 발생의 시간적 창 윤곽을 그리 다 고 그 혈통을 표시 하 고 미사일 뉴런의 터미널 분포 패턴을 예측 하는 타이밍.
