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Die Entzifferung Axonal Pathways von genetisch definierte Gruppen von Neuronen in der Küken Neuralrohr Verwendung In ovo Elektroporation


JoVE 1792 5/02/2010

Department of Medical Neurobiology, Institute for Medical Research Israel Canada, Hebrew University-Hadassah Medical School

Dieses Video zeigt, wie axonale Wege der genetisch definierte Gruppen von Neuronen in der embryonalen chick Rückenmark Nutzung visualisieren

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Irx4 Regulation Der Expression Slit1 Trägt Zur Definition Des Frühen Axonalen Pfade Innerhalb Der Netzhaut

Granulozyten-Makrophagen-Kolonie Stimulierender Faktor (GM-CSF), Wird Von Einem GM-CSF Bindenden Moleküls in Waller-Degeneration Nach Verletzungen Peripherer Nerven Axone Geregelt

Die Neuronale Klasse 2 TSR Proteine ​​F-spondin Und Mindin: Eine Kleine Familie Mit Unterschiedlichen Biologischen Aktivitäten

F-Spondin Fördert Die Nerven Vorläufer Differenzierung

Zellen in das sich entwickelnde Nervensystem sezernieren zahlreiche Proteine, die die Migration und die Differenzierung ihrer Nachbarn zu regulieren. Hier wird gezeigt, dass eine klonale ZNS-Zelllinie ein Protein, die Ursachen einer Ratte hippocampal Stammvater-Zelllinie und primäre kortikale neuronale Zellen sondert, in die Zellen mit den morphologischen und biochemischen Funktionen von Neuronen zu unterscheiden. Dieses Protein wurde als F-Spondin identifiziert. Analyse von F-Spondin-Isoformen abgesondert von transfected Zellen zeigt, die das Kern-Protein ohne die Thrombospondin Typ 1 ausreicht Wiederholungen, um neuronale Differenzierung, wenn an einer Oberfläche adsorbiert zu fördern. F-Spondin kann auch Neurit Auswuchs beim erlauben des Ausdrucks der Nerven-spezifische Proteine, wenn bei einer löslichen Form in hohen Konzentrationen hemmen. F-Spondin kann daher Zelldifferenzierung in vielfältiger Weise verändern, je nach ihrer Konzentration und Verteilung zwischen Substrat befestigt und lösliche Formen.

Proteolyse Und Membran Erfassung Der F-Spondin Generiert Kombinatorische Anleitung Hinweise Aus Einem Einzigen Molekül

Die Bildung neuronaler Netzwerke unterliegt einer begrenzten Anzahl von Anleitungen Moleküle, aber es ist äußerst komplex. Die Komplexität der Führung Cues wird durch posttranslationale Modifikation der Anleitung Moleküle und ihre Rezeptoren ergänzt. Wir berichten hier, dass die Spaltung des Boden Platte Anleitung Moleküls F-Spondin zwei funktionell gegnerischen Fragmente erzeugt: ein Kurzstrecken abweisend Protein in der Membran von Boden Platte Zellen und eine selbstklebende Protein, das an der Basalmembran sammelt hinterlegt. Ihre koordinierte Aktivität, bzw. als ein Kurzstrecken Repellent fungiert und eine permissive Kurzstrecken-Lockstoff, verengt kommissurale Axone an der Basalmembran unter dem Boden Platte Zellen. Weiter zeigen wir, dass die abstoßende Aktivität des hemmenden Fragments des F-Spondin erfordert seine Präsentation durch die Lipoprotein Rezeptor-related Protein (LRP) Rezeptoren Apolipoprotein E-Rezeptor 2, LRP2/Megalin und LRP4, die in der Bodenplatte ausgedrückt werden. Somit Proteolyse und Membran Interaktion koordinieren kombinatorische Anleitung Signalisierung aus ein einzelnes Anleitung-Stichwort.

Eine Schlüssel-Rolle Für Zyklischem AMP-responsive Element Binding Protein Hypoxie-vermittelte Aktivierung Des Faktors Angiogenese CCN1 (CYR61) in Tumorzellen

Hypoxie ist ein Charakteristikum von soliden Tumoren beizutragen zur malignen Progression und therapeutischen Widerstand bekannt. Krebszellen, die an Hypoxie mit verschiedenen Wege, so dass Tumoren in einem niedrigen Sauerstoffgehalt gedeihen angepasst werden. Induktion von New Blutbildung Schiff über die Sekretion von Proangiogenic Faktoren ist eine der wichtigsten adaptiven Reaktionen von Tumorzellen unter Hypoxie Bedingungen engagiert. Hypoxie-durch Induktion Faktor 1 (HIF-1) ist ein Transkriptionsfaktor, der spielt eine entscheidende Rolle bei der Vermittlung von derartigen Reaktionen. Darüber hinaus haben mehrere andere Transkriptionsfaktoren auch in hypoxic Genregulation, einzeln oder in Zusammenarbeit mit der HIF-1 verwickelt. In dieser Arbeit wir zeigen, dass den Ausdruck die Angiogenese-bezogenen, IEG CCN1 (früher bekannt als CYR61), als Tumorwachstum und Invasivität, beteiligt wird verstärkt auf Hypoxie Stress in erster Linie in eine Proteinkinase A und zyklischem AMP-responsive Element Binding Protein (CREB) und CRE-abhängigen Weise in verschiedenen Zelllinien. Die Hypoxie-vermittelte Aktivierung des Projektträgers CCN1 ist unabhängig von HIF-1 und HIF-2, wie kleine interferierender RNA-Niederschlag gezeigt. Wir identifizieren Sie das Cis-Element in der Maus CCN1 Projektträger verantwortlich für CREB Bindung an eine der zwei partiellen CRE-Standorte in der Projektträger vorhanden sein. Darüber hinaus berichten wir für zum ersten Mal das CREB-vermittelte CCN1 Transkription in hypoxic Regionen von Tumoren in-vivo erhöht wird. Identifizierung und Charakterisierung der molekularen Mechanismen, die die Reaktion der Tumoren auf Hypoxie Regeln möglicherweise für die Tumoren zu identifizieren, die reagieren positiv auf die Hemmung der Angiogenese und somit dazu führen, dass die Entwicklung von Therapien, die Behandlungsmodalitäten Hypoxie-induzierende ergänzen könnte.

Transkriptionelle Kontrolle Der Axonalen Anleitung Und Sortieren in Dorsalen Interneuronen Durch Die Lim-HD-Proteine, Lhx9 Und Lhx1

Lim-HD Proteine Steuern entscheidende Aspekte der neuronale Differenzierung, einschließlich Subtyp Identität und axonale Anleitung. Die Lim-HD-Proteine, Lhx2/9 und Lhx1/5 werden jeweils in der dorsalen Wirbelsäule Interneuron Populationen dI1 und dI2, ausgedrückt. Obwohl sie nicht für Zelle Schicksal Erwerb erforderlich sind, bleibt ihre Rolle bei der Musterung des axonalen gemalten dI1 und dI2 Neuronen unvollständig verstanden.

Foxp1 Und Lhx1 Koordinieren Motoneuron Migration Mit Axon Flugbahn Wahl Von Anspritzung Reelin Signalisieren

Topographische Karten von neuronale entstehen als Folge der Axon Flugbahn Wahl korreliert mit der Lokalisierung der neuronalen Soma, aber die Identität der Bahnen dieser Prozesse zu koordinieren, ist unbekannt. Wir widmeten sich dieser Frage im Zusammenhang mit der Myotopic Karte von Muskulatur der Gliedmaßen von spinalen motorischen Seitenspalten (LMC) motorische Axone wo die Eph-Rezeptor-Signale Angabe Konus Wachstumskurs durch Foxp1 und Lhx1 Transkriptionsfaktoren eingeschränkt werden innerviert gebildet. Wir zeigen, dass die Lokalisation von LMC Neuron Zelle stellen von Axon Flugbahn Wahl durch den Verlust oder Gewinn der Funktion der Reelin-Signalweg getrennt werden kann. Die Reaktion der LMC-Motoneuronen auf Reelin ist durch Foxp1 - und Lhx1-vermittelter Verordnung des Ausdrucks von der kritischen Reelin signalisieren fortgeschrittene Dab1 Gating. Zusammen, diese Beobachtungen zeigen identische Transkriptionsfaktoren dieses Steuerelement motor Axon Anleitung und Soma-Migration und offenbaren die molekulare Hierarchie der Myotopic Organisation.

Motor Und Dorsal Root Ganglion Axone Dienen Als Wahl Für Die Ipsilaterale Drehen DI3 Axone

Die Axone der spinalen intersegmental Interneuronen werden Longitudinal entlang verschiedener Funiculi gekleidet entlang der Achse dorsal-Ventral des Rückenmarks projiziert. Die Dach-Platte und der Bodenplatte haben eine profunde Rolle bei der Musterung ihrer anfänglichen axonale Flugbahn. Jedoch können andere positionelle Hinweise die endgültige Architektur Interneuron Production im Rückenmark führen. Um mehr Einblick in die Organisation von spezifischen axonale Tracks im Rückenmark, konzentrierten wir uns auf die Flugbahn-Muster einer genetisch definierten neuronalen Population, dI3 Neuronen im Rückenmark Küken. Verwertung neu gekennzeichnete Enhancer-Elemente erlaubt bestimmte Kennzeichnung von dI3 Neuronen und Axone. dI3 Axone sind ipsilaterally entlang zwei längs Fascicules an der ventralen seitlichen Funiculus (VLF) und der dorsalen Funiculus (DF) projiziert. dI3 Axone ändern ihre Flugbahn-Flugzeug von der quer zur Längsachse an zwei neuartige Checkpoints. Die Axone, die zum Jahreswechsel DF in der Spinalganglien Eintrag Zone entlang der Axone der Ganglienzellen der Spinalganglien (DRG) Neuronen zu verlängern und die Axone, die zum Jahreswechsel VLF entlang der Axone von Motoneuronen verlängern. Verlust und Gewinn der Funktion des Proteins Lim-HD Isl1 zeigen, dass Isl1 für dI3 Zelle Schicksal nicht benötigt. Allerdings reicht Isl1 ipsilateral drehen entlang die motorischen Axone ectopically in den Neuronen kommissurale dI1 ausgedrückt zu verhängen. Die axonale Musterung dI3 Neuronen, offenbart in dieser Studie unterstreicht die Rolle von etablierten axonale Signale-die DRG und motorischen Axone-als fortgeschrittene Stilfragen Cues für dI3 Axone.

Foxa2 Regelt Den Ausdruck Der Nato3 in Der Bodenplatte Durch Eine Neuartige Evolutionär Konservierte Projektträger

Die Entwicklung von dem Neuralrohr in eine komplexe zentrale Nervensystem betrifft morphologische, zelluläre und molekulare Veränderungen, die streng geregelt sind. Die Bodenplatte (FP) ist eine kritische organisierende Mitte, gelegen an der Mittellinie Ventral am weitesten von dem Neuralrohr. FP Zellen regulieren dorsoventral Musterung, Differenzierung und Axon Anleitung durch sezernierende Morphogens. Hier zeigen wir, dass bHLH Transkriptionsfaktors Nato3 (Ferd3l) wird speziell in der Wirbelsäule FP Chick und Maus Embryonen ausgedrückt. Verwendung in Ovo Elektroporation, um die Regulierung der FP-spezifischen Ausdruck Nato3 zu verstehen, haben wir eine evolutionär konservierte 204 bp genomische Region, identifiziert, die mit dem Ausdruck der Chick FP notwendig und ausreichend ist. Dieser Promotor enthält zwei Foxa2-Bindungsstellen, die zwischen den fernen Stämme stark konserviert sind. Die beiden Standorte können binden Foxa2 in-vitro- und sind notwendig für den Ausdruck in der in-vivo FP. Gewinn und Verlust der Foxa2-Funktion in-vivo weiter betonen ihre Rolle in Nato3-Promotor-Aktivität. Damit zufolge unsere Daten Nato3 das unmittelbare Ziel Foxa2, Transkription Aktivator und Effektor von Sonic Hedgehog, das Markenzeichen-Regulator der FP-Induktion und Rückenmark Entwicklung ist. Die Identifizierung des FP-spezifischen Promotors ist ein wichtiger Schritt zu einem besseren Verständnis der molekularen Mechanismen durch die Nato3 Transkription geregelt wird und für seine Funktion bei der Entwicklung des Nervensystems aufdecken. Darüber hinaus bietet der Veranstalter uns ein leistungsfähiges Werkzeug für bedingte genetische Manipulationen in der FP.

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