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Articles by Brenda Carrillo-Conde in JoVE
JoVE Bioengineering
Analizzando internalizzazione cellulare di nanoparticelle e batteri da Multi-spettrale Citometria a Flusso Imaging
1Department of Veterinary Microbiology and Preventive Medicine, Iowa State University, 2Amnis Corporation, 3Department of Chemical and Biological Engineering, Iowa State University
In questo articolo descriviamo un metodo che utilizza multi-spettrale di citometria a flusso di imaging per quantificare l'interiorizzazione delle nanoparticelle polianidride o batteri da parte delle cellule RAW 264.7.
Other articles by Brenda Carrillo-Conde on PubMed
Incapsulamento in Microparticelle Polyanhydride Anfifili Stabilizza Gli Antigeni Di Yersinia Pestis
La progettazione di sistemi di consegna polimerici biodegradabili basato su polyanhydrides che avrebbe fornito una migliore integrità strutturale degli antigeni di Yersinia pestis è stato l'obiettivo principale di questo studio. Di conseguenza, il full-length proteina di fusione di Y. pestis (F1-V) o una Y. pestis fusione proteina ricombinante (F1(B2T1)-V10) era incapsulato e pubblicato da microparticelle basate su bis(p-carboxyphenoxy) 1,6 esano (CPH) e copolimeri acido sebacico (SA) e 1,8-bis(p-carboxyphenoxy)-3,6-dioxaoctane (CPTEG) e copolimeri CPH fabbricate da atomizzazione criogenico. Un enzyme-linked immunosorbent assay è stato utilizzato per misurare le variazioni nell'antigenicità delle proteine rilasciate. La F1 ricombinante (B2T1)-V10 era instabile dopo il rilascio dalle microparticelle CPH:SA idrofobico, ma mantenuto la sua struttura e antigenicità in anfifili CPTEG:CPH sistema. Il full-length F1-V stabile è stato rilasciato da CPH:SA e da CPTEG:CPH le microparticelle. Al fine di determinare l'effetto dei monomeri anidride acetica sulla struttura della proteina, modifiche in primario, secondario, e la struttura terziaria, come pure l'antigenicità di entrambi antigeni di Y. pestis, sono stato misurato dopo incubazione in presenza di soluzioni sature di monomeri anidride acetica SA, CPH e CPTEG. I risultati hanno indicato che l'ambiente anfifili fornito dal monomero CPTEG era importante preservare la struttura e l'antigenicità di entrambe le proteine. Questi studi offrono un approccio che può essere chiarita una conoscenza approfondita dei meccanismi che regolano antigenica instabilità al fine di ottimizzare le prestazioni in vivo dei dispositivi di consegna biodegradabili come vettori di proteine e/o coadiuvanti vaccino.
Adsorbimento Di Proteine Su Microparticelle Biodegradabili Polyanhydride
L'adsorbimento delle proteine del plasma su microparticelle polyanhydride in vitro basati su acido sebacico (SA), bis(p-carboxyphenoxy)-1,6 esano (CPH), e 1,8-bis(p-carboxyphenoxy)-3,6-dioxaoctane (CPTEG) è stato studiato. Tre modello proteine da siero bovino (albumina (BSA), immunoglobulina G (IgG), fibrinogeno (Fg)) sono stati usati. L'adsorbimento è stato studiato mediante spettroscopia fotoelettronica a raggi x ed elettroforesi del gel. Elettroforesi 2D è stato usato per studiare l'adsorbimento delle proteine del plasma da siero bovino. Sono state rilevate differenze nella quantità di proteine adsorbiti in funzione dei seguenti: composizione del copolimero (i) e (ii) specifiche proteine studiate. È stata osservata una correlazione diretta tra idrofobicità di polimero e proteine adsorbiti e quantità più elevate di Fg e IgG sono stati assorbiti. Sono stati eseguiti studi di rilascio in vitro con microparticelle ovoalbumina incapsulato che sono state incubate con Fg; questi studi hanno mostrato una riduzione della quantità di OVALBUMINA rilasciato dalle microparticelle quando Fg è adsorbito sulla superficie. Comprensione dei modelli di adsorbimento di proteine su dispositivi di somministrazione parenterale è preziosa nell'ottimizzazione delle loro prestazioni in vivo.
Polyanhydride Microparticelle Migliorano Attivazione E Presentazione Dell'antigene Delle Cellule Dendritiche
Il presente studio è stato progettato per valutare l'attività adiuvante di microparticelle polyanhydride preparate in assenza di ulteriori stabilizzatori, eccipienti o modulatori immuni. Microparticelle è composto da diversi rapporti di entrambi bis(p-carboxyphenoxy) 1,6 esano (CPH) e acido sebacico o 1,8-bis(p-carboxyphenoxy)-3,6-dioxaoctane e CPH sono stati aggiunti alle colture in vitro di cellule dendritiche derivate dal midollo osseo (DCs). Le microparticelle sono stati efficacemente e rapidamente phagocytosed da DCs in assenza di opsonizzazione e senza centrifugazione o agitazione. Entro 2 h, interiorizzate particelle erano localizzati rapidamente a un vano acide, phagolysosomal. Da 48 h, solo una minore riduzione dimensioni microparticelle è stata osservata nel vano phagolysosomal, indicando l'erosione della particella minima coerente con essere localizzate all'interno di una stabilità delle particelle favorendo microambiente intracellulare. Polyanhydride microparticelle aumentata espressione superficiale di histocompatability principali complessi classe II DC, le molecole co-stimulatory CD86 e CD40 e la lectina C-tipo CIRE (DC-SIGN murino; CD209). Inoltre, stimolazione di microparticelle di DCs anche rafforzata la secrezione delle citochine IL-12 p 40 e IL-6, un fenomeno trovato ad per essere dipendente dalla chimica dei polimeri. DCs colta con microparticelle di polyanhydride e ovoalbumina indotta da proliferazione antigene-specifiche polimero chimica-dipendente sia CD4(+) OT-II e cellule OT-I T cellule. Questi dati indicano che le polyanhydride particelle possono essere adattati per sfruttare il potenziale plasticità della risposta immunitaria, con conseguente capacità di indurre protezione immunitaria contro molti tipi di agenti patogeni.
Mannosio-funzionalizzato "patogeno-like" Polyanhydride Nanoparticelle Destinazione C-tipo Lectina Recettori Sulle Cellule Dendritiche
Targeting per i recettori di riconoscimento del patogeno su cellule dendritiche (DCs) offre il vantaggio di innescare percorsi di segnalazione specifici per indurre una risposta immunitaria efficace e su misura. In questo lavoro, descriviamo un nuovo approccio alla consegna mirata antigene decorando la superficie delle nanoparticelle polyanhydride con specifici carboidrati per fornire proprietà di "agente patogeno-like" che assicurano le nanoparticelle impegnano recettori lectina C-tipo su DCs. La superficie delle nanoparticelle polyanhydride era funzionalizzata dal legame covalente dei residui dimannose e lattosio, utilizzando un acido carbossilico ammina reazione di accoppiamento. Coculture delle nanoparticelle funzionalizzate con DCs derivate da midollo osseo significativamente aumentata espressione superficiale delle cellule di MHC II, le molecole di costimolazione delle cellule T CD86 e CD40, il recettore di lectin del tipo C CIRE e il recettore del mannosio CD206 sopra le nanoparticelle nonfunctionalized. Le nanoparticelle funzionalizzate sia nonfunctionalized erano efficientemente interiorizzate da DCs, indicando che l'internalizzazione delle nanoparticelle funzionalizzate era necessaria ma non sufficiente per attivare DCs. bloccando il mannosio e CIRE recettori prima dell'aggiunta di nanoparticelle funzionalizzate alla cultura inibiscono l'espressione di superficie maggiore di MHC II, CD40 e CD86. Insieme, questi dati indicano che il fidanzamento di CIRE e il recettore del mannosio è un meccanismo chiave attraverso il quale le nanoparticelle funzionalizzate attivare DCs. Questi studi forniscono informazioni preziose nella progettazione razionale di piattaforme nanovaccine mirati per indurre risposte immunitarie robuste e migliorare l'efficacia del vaccino.
Design Razionale Dell'agente Patogeno-mimando Anfifili Materiali Come Nanoadjuvants
La possibilità esiste oggi per la ricerca trasversale che utilizzano i progressi nella scienza dei materiali, immunologia, patogenesi microbica e analisi computazionale per progettare efficacemente la prossima generazione di coadiuvanti e vaccini. Questo studio integra questi progressi in un approccio bottom-up per la progettazione molecolare di nanoadjuvants in grado di imitare la risposta immunitaria indotta da un'infezione naturale ma senza gli effetti collaterali tossici. Polyanhydrides biodegradabile anfifili possiedono la capacità unica di imitare gli agenti patogeni e patogeno associated molecular patterns per quanto riguarda la persistenza all'interno e l'attivazione di cellule immunitarie, rispettivamente. Le proprietà molecolari responsabili per le abilità che mimano patogeno di questi materiali sono state identificate. Il valore dell'utilizzo di polyanhydride nanovaccines è stato dimostrato mediante l'induzione di lunga durata protezione contro una sfida letale di Yersinia pestis dopo una singola somministrazione dieci mesi prima. Questo approccio ha il potenziale allettante per catalizzare lo sviluppo di prossimi generazione vaccini contro malattie causate da emergenti e riemergenti agenti patogeni.
