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Articles by Carlos Maluquer de Motes in JoVE
JoVE Immunology and Infection
特定のヒトと動物のウイルスを用いた微生物ソースのトラッキングのための費用対効果の高い方法
研究では、MSTのツールとして提案したヒト/ブタ/ウシDNAウイルス、アデノウイルスとpolyomaviruses、特定の定量化のために定量PCRを用いて水中の硝酸塩による尿/糞便汚染または汚染源の同定のための費用対効果の高い方法を説明します。
Other articles by Carlos Maluquer de Motes on PubMed
糞便汚染のソースを追跡するためのウシおよびブタアデノウイルスの検出
本研究では、動物起源のアデノウイルスを検出するための分子の手順は、豚や牛のことで、これらのウイルスの排泄のレベルを評価し、環境のウイルス汚染の特定のソースのトレースを容易にするためにテストを設計するために開発されました。オリゴヌクレオチドの二組は、ウシとヒツジアデノウイルスを検出するために、ブタアデノウイルスおよび他のを検出するために、次のいずれかを設計されています。アッセイの特異性は31糞便サンプルと1年間の期間に毎月採集した12下水試料で評価した。データはまた、動物のアデノウイルスの環境の有病率に関する情報を提供した。ブタアデノウイルスは24の17で検出された（70％）豚のサンプルのプールは、ほとんどの分離株が密接に3血清型に関連していると、勉強しました。ウシアデノウイルス株は属のMastadenovirusとAtadenovirusに属するとタイプ2、4、および7のウシアデノウイルスに似ていると、8例中6例（75％）の研究のプールに存在していた。プライマーは、これらのセットは、ヒトアデノウイルスコントロールと都市型下水サンプルがテストされた入れ子になったPCRアッセイで陰性結果が得られた。同様に、以前にヒトアデノウイルスの検出のために設計したプライマーのセットはまた、動物アデノウイルスの陰性の結果を作り出した。これらの結果は、水と食料と環境の研究のための糞便汚染の発生源を追跡するためにこれらのテストの有用性を評価するためのさらなる研究の重要性を示しています。
環境での糞便汚染源の決定のためのヒトおよび動物アデノウイルスとPolyomavirusesの同定
アデノウイルス科とPolyomaviridae家族は糞便または尿中に長期間排泄されるウイルスの広い多様性を含んでいる。本研究では、環境内の有病率と人間と動物のアデノウイルスおよびpolyomavirusesのソース·トラッキングツールなどの潜在的有用性の予備的な分析が開発されました。特に都市下水、食肉処理場、および河川水サンプルを含む環境試料に適用したヒトアデノウイルス（HAdV）、ブタアデノウイルス（PAdV）、ウシアデノウイルス（BAdV）、およびウシpolyomaviruses（BPyV）を標的とするPCRに基づく分子アッセイ。 PAdVとBPyVは、それぞれ、潜在的にブタまたはウシ糞便汚染のいずれかの方法で影響を受けた試料の非常に高い割合で検出された。しかし、BAdVを分析廃水試料中のBPyVより低い有病率を示す、1つだけのサンプルで検出された。動物由来の糞便汚染の22食肉処理場のサンプルはHAdVの存在を否定的な結果を示した。分析した河川水試料は、汚染の多様な情報源の存在を示す、人間と動物のアデノウイルスおよびpolyomaviruses両方の存在のために陽性であった。検出されたウイルスの同定は、増幅された配列の分析により確認した。すべてのBPyV分離株は塩基配列で97％の類似性を示した。これはPAdV5、BAdV6、とBPyVは、環境試料中に発生することが報告されていることが初めてです。ヒトおよびブタアデノウイルスおよびヒトおよびウシpolyomavirusesは、ウイルス汚染の有無を評価するため、環境試料中の糞便/尿汚染の起源を追跡するためのツールとして提案されている。
マウスモデルからスツールのBSEとスクレイピープリオンの排泄
感染動物からの糞便、汚染、環境内のプリオン病の伝播の潜在的な源として提案されている。この作品は、界面活性剤ベースの抽出および免疫沈降（IP）に基づいている便のPrP（res）を検出するための手順の開発を説明しています。手順はTSE-スパイク羊やマウスの糞便を分析することによって評価し、感染した脳組織の5-10μgのの感度とPRP（RES）に特異的であることが証明された。プリオンの排出を分析するために、我々は4日後に接種し、また末端病気スクレイピー感染マウスから糞便を介して経口的に接種したマウスからの便を調べた。 PRP（解像度）が唯一の直後TSE病原体の経口摂取後の糞便中に検出された。説明する手順では、プリオンの排泄を研究するため、プリオンによって潜在的な環境汚染を評価するための有用なツールとなる可能性があります。
微生物ソース追跡ツールとしてのウシポリオーマウイルスの定量のための定量PCRアッセイの開発
アデノウイルスとpolyomavirusesは、高濃度に排泄されるヒトおよび動物の集団で配布されている2つの異なるDNAウイルスの家族である。これらのファミリに含まれる特定のウイルスを標的とする環境汚染の具体的にソースをトレースするための有望な有用なツールであることが証明されている。本研究では、ウシpolyomavirusesに特異的な定量PCRアッセイは、都市下水、食肉処理場の下水、河川水を含む尿と環境試料中のウシpolyomavirusesの排泄レベルと濃度を決定するために開発され、使用されていました。プライマーとTaqManプローブのセットは、ウシポリオーマウイルスVP1遺伝子の77 bpの領域を標的とするように設計され、反応条件を最適化した。検出限界は、試験管当たり1から10ゲノムコピーで設立されました。アッセイは、特異的であった、ヒトまたはブタの糞便汚染を含むサンプルを分析したときに否定的な結果をもたらした。これは、我々の知識に、ウシの尿サンプル中に排泄されるウシpolyomaviruses（10（4）GC / lの値を意味する）の最初の説明です。ウシpolyomavirusesも検出され、と畜場廃水およびウシ由来の汚染を含む多くの環境試料中のこれらのウイルスの拡散を示しています川の水で定量した。このホワイトペーパーで説明する手順では、環境試料中の牛の汚染の有無の指標として、ウシpolyomavirusesの分析のための定量的なソースの追跡ツールを提供しています。
小説モンキーアデノウイルスの分離は、サルアデノウイルスの進化の歴史の新しい系統クレードを明らかに
霊長類のアデノウイルスはヒト（HAdV）とサル（SAdV）8種（ヒトアデノウイルスGへと、サルアデノウイルス）に分類され分離されています。本研究では、新規アデノウイルスは、カニクイザルモンキー（カニクイザル）のコロニーから分離されたとVero細胞で継代培養。その完全なゲノムを精製し、ヘキソン遺伝子、プロテアーゼ遺伝子、DNA結合タンパク質（DBP）および100 kDaのタンパク質を包含する領域をPCRにより増幅し、プライマーウォーキングによって配列決定した。これらの4つの遺伝子の配列解析を分離新しい他の霊長類アデノウイルス80％の同一性を有しており、組換え事象を欠いていたことが明らかになった。 4つの遺伝子の組み合わせのシーケンスに基づいて、この新しい猿のADVの進化の関係の研究SAdV-3に密接な関係を支持し、SAdV-6、アカゲザルから分離された系統。これらの3つのタイプによって形成されたクレードは、残りのクレードから分離し、種HAdV-A、FおよびGが関連している小説の枝を確立され、新たに単離された猿ADVに対応した遺伝的距離は大幅に属するようにするために、これらとは異なります新しい、まだ確立されていない種。ここで示された結果はSAdVに我々の知識を広げ、霊長類のアデノウイルスの進化の歴史の理解に重要な貢献を表しています。
アポトーシスと N1 経由で異なるバインド サーフェスが発生して病原性に異なる貢献ワクシニア タンパク質による NF-κ 活性化の抑制。
ワクシニア ウイルス (VACV) タンパク質 N1 細胞病原性因子であるし、VACV B 細胞リンパ腫 (Bcl)-2 の家族に属している-そのメンバー アポトーシスやインターフェロン (IFN) 規制要因 3 （IRF-3) と核因子-κB (NF-) などのプロ炎症性転写因子の活性化を阻害するタンパク質のような。通常、N1 はアポトーシスと NF-κ 活性化を阻害しません。N1 がこれらの異なった機能を発揮する方法を理解するには、残基の Bcl-2 のような表面の溝と N1 サブユニットから成るホモのフォームに使用されるインターフェイスでを変異しています。N1 抗アポトーシス アクティビティのみ表面溝の突然変異誘発を廃止し、野生型 N1 変異のサイトだけでは異なっていたこれらの変異体タンパク質結晶構造解析を示した。逆に、ダイマー インターフェイスの突然変異誘発 N1 モノマーを変換し、NF-κ 活性化の阻害のみ影響を受けます。総称して、これらのデータはプロ炎症 N1 を阻害すること表示及びアポトーシス誘導タンパク質の独立したサーフェスを使用して信号します。各アクティビティにウイルスの病原性の相対的な寄与を決定するには、変異 N1 対立遺伝子 N1 欠けている VACV ひずみに導入され、これらのウイルスの病原性マウスの皮内および鼻腔内接種後に分析されました。N1 NF-κ 阻害のため障害者変異を含む VACV N1 削除ウイルスに似た弱毒感染を誘発するが, 両方のモデルでは、変異体 N1 アポトーシスを阻害することはできませんを含む VACV 野生型ウイルスに似たような病原性があった。これは、抗アポトーシス活動 N1 の病原性にこれらの in vivo モデルで運転しないし、ウイルス感染に対する免疫応答のプロ炎症性シグナル伝達の重要性を強調を示します。
