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Articles by Caroline A. Genco in JoVE
JoVE Bioengineering
Biomoleculares de detección utilizando el sensor de reflectancia de imágenes interferométricas (IRIS)
1Department of Electrical and Computer Engineering, Boston University, 2Department of Biomedical Engineering, Boston University, 3Center for Advanced Genomics Technology, Boston University, 4Department of Medicine, Section of Infectious Diseases, Boston University School of Medicine, 5Department of Microbiology, Boston University School of Medicine, 6CNR (National Research Council), Istituto di Chimica del Riconoscimento Molecolare
Cuantitativo, de alto rendimiento, en tiempo real, y sin etiquetas de detección biomolecular (ADN, proteínas, etc) sobre SiO
Other articles by Caroline A. Genco on PubMed
Inmunización Con Polisacárido Capsular De Porphyromonas Gingivalis Previene La Pérdida De P. Gingivalis-sacados Oral ósea En Un Modelo Murino
El polisacárido capsular (CPS) de los patógenos periodontales Porphyromonas gingivalis es un factor de virulencia importante para este organismo. Nos purifica p. gingivalis CPS, ratones inmunizados con este antígeno y evaluó el potencial de la vacuna de p. gingivalis CPS utilizando el modelo murino desafío oral. Animales inmunizados con p. gingivalis CPS desarrollaron niveles elevados de inmunoglobulina M (IgM) y de IgG en suero que reaccionó con organismos enteros p. gingivalis. Los ratones inmunizados con p. gingivalis CPS estaban protegidos de la pérdida del hueso oral p. gingivalis-sacados. Estos datos demuestran que p. gingivalis CPS es un candidato de vacuna para la prevención de la pérdida del hueso oral p. gingivalis-sacados.
Ratones Que Carecen De óxido Nítrico Sintasa Inducible Demuestran Asesinato Deteriorada De Porphyromonas Gingivalis
Porphyromonas gingivalis es un agente etiológico primario de periodontitis severa generalizada, y los datos emergentes sugieren la importancia de especies reactivas de oxígeno y nitrógeno en daño a los tejidos periodontales, así como en la muerte microbiana. Desde que no lanzó el óxido nítrico () inducible no sintasa (iNOS) ha demostrado poseer inmunomoduladores, citotóxicos, y efectos antibacterianos en modelos experimentales, desafió iNOS deficientes (iNOS(-/-)) ratones con p. gingivalis utilizando un modelo de cámara subcutánea para estudiar la contribución específica de NO a la defensa del huésped durante la infección de p. gingivalis. iNOS(-/-) ratones inocularon con p. gingivalis desarrolladas lesiones de piel y el rechazo de la cámara con mayor frecuencia y en mayor grado que del mismo modo desafiaron C57BL/6 ratones de tipo salvaje (WT). Líquido de la cámara de iNOS(-/-) ratones poseyó p. gingivalis significativamente más que el de los ratones WT. Las respuestas de la inmunoglobulina G a p. gingivalis en suero era similar en peso y iNOS(-/-) ratones y las inducciones de factor de necrosis tumoral alfa y beta de interleukin-1, Interleucina-6, y prostaglandina e (2) fueron comparables entre las cepas de dos ratón. Aunque se observaron diferencias en los recuentos de leucocitos totales en fluidos de cámara entre iNOS(-/-) y ratones WT, el porcentaje de leucocitos muertos polimorfonucleares (PMN) fue significativamente mayor en los líquidos del iNOS(-/-) ratón cámara que muestras WT. Curiosamente, PMNs caseína-sacados de ratones iNOS(-/-) habían lanzado más superóxido de PMNs WT al ser estimulados con p. gingivalis. Estos resultados indican que la modulación de los niveles de superóxido es un mecanismo por el cual NO influye en la función PMN y que NO es un elemento importante de la defensa del huésped contra p. gingivalis.
Lisina Específica Gingipain K Y Receptor Hemo/hemoglobina HmuR Están Implicados En La Utilización De Hemo En Porphyromonas Gingivalis
Hemos divulgado previamente en la identificación y caracterización de los Porphyromonas gingivalis A7436 receptor de membrana externa de tensión HmuR, que participa en la adquisición de hemina y hemoglobina. Demostramos que HmuR interactúa con la lisina-(Kgp) y arginina-(HRgpA) proteasas específicas (gingipains) y que Kgp y HRgpA puede enlazar y degrada la hemoglobina. Aquí, Divulgamos sobre la importancia fisiológica del complejo HmuR-Kgp en utilización de hemo en p. gingivalis a través de la construcción y caracterización de un mutante de kgp definida y un hmuR kgp doble mutante en p. gingivalis A7436. El p. gingivalis kgp mutante exhibió una disminución de la capacidad para enlazar tanto hemina y hemoglobina. Se retrasó el crecimiento de esta variedad con la hemoglobina y su capacidad para utilizar hemina como fuente única de hierro fue disminuida en comparación con la cepa de tipo salvaje. Inactivación de genes hmuR tanto kgp dio lugar a la mayor disminución de la capacidad de p. gingivalis para enlazar la hemoglobina y hemina, así como disminuyó la capacidad de utilizar la hemina o hemoglobina como fuente única de hierro. Colectivamente, estos resultados in vivo confirman que HmuR tanto Kgp están implicados en la utilización de hemina y hemoglobina en p. gingivalis A7436.
Los Dominios C-terminal De La Poliproteína De K Gingipain Son Necesarios Para El Montaje De La Enzima Activa Y La Expresión De Actividades
La proteasa de cisteína lisina específica de Porphyromonas gingivalis (gingipain K, Kgp) se expresa como una proteína de gran precursor que consiste en una secuencia de líder, un pro-fragment, un dominio catalítico con un subdominio de IgG-como C-terminal (IgSF) y un dominio grande hemaglutinina/adherencia (HA). A fin de directamente estudio el papel de estos dominios no catalíticos en el proceso de pro-Kgp y maduración en p. gingivalis, la forma de tipo salvaje del gen fue reemplazado con variantes de la canceladura codificación C-terminal había truncado proteínas, incluyendo KgpDeltaHA3/4 (aa Delta1292-1732), KgpDeltaHA2-4 (aa Delta1157-1732), KgpDeltaHA1-4 (aa Delta738-1732), KgpDeltaC-término/HA (aa Delta681-1732) y KgpDeltaIg/C-término/HA (aa 602-1732). Mancha blanca /negra norteña y análisis de transcripción reversa polimerasa reacción en cadena (RT-PCR) revelaron que todas las variantes del gen kgp truncadas fueron transcritas en p. gingivalis. A pesar de los altos niveles de transcripciones kgpDeltaC-término/HA y kgpDeltaIg/C-término/HA, no Kgp-específica del antígeno fue detectado en las culturas de estos mutantes según lo determinado por análisis de Western blot con anticuerpos monoclonales específicos para el dominio catalítico de Kgp. Además, sólo apenas mensurables cantidades de actividad específica Kgp fueron detectados en estos dos mutantes. Los restantes mutantes expresan Kgp una actividad significativa, sin embargo, a niveles más bajos en comparación con la cepa parental. La disminución de la actividad resultó más probablemente de alterado plegable o impedido la secreción de la proteína. El truncamiento de gene kgp también fue demostrado para alterar la distribución de la proteína gingipain entre formas asociadas a membrana y - secretadas. Mientras tanto la proteína como actividad gingipain K fueron asociados a membrana de la célula en la cepa parental, los mutantes habían liberado grandes cantidades de proteína y actividad en los medios de comunicación. Tomados juntos, estos resultados sugieren que los dominios c-terminal HA de Kgp no sólo son esenciales para la expresión completa de la actividad gingipain, sino también para el adecuado procesamiento de la Asamblea compleja Multiproteinas sobre la membrana externa de p. gingivalis. Por otra parte, nuestros resultados indican que el subdominio de inmunoglobulina-como es indispensable para la correcta plegable y expresión de la gingipains.
Las Gonocócicas Piel Regulada TbpA Y TbpB Genes Se Expresan Durante La Infección Gonocócica Mucosa Natural
Hierro está limitando en el huésped humano y patógenos bacterianos responden a este entorno mediante la regulación de la expresión génica a través de la proteína del regulador de absorción férrico (piel). Estudios in vitro han demostrado que Neisseria gonorrhoeae controla la expresión de varios genes críticos a través de un mecanismo de hierro - y piel-mediada. Mientras más experimentos in vitro están diseñados para determinar la respuesta de N. gonorrhoeae a una concentración de hierro exógeno de cero, estos organismos no exponerse a las severas limitaciones de hierro in vivo. Para determinar si N. gonorrhoeae expresa genes regulados por hierro y piel en vivo durante la infección gonocócica no complicada, examinamos los perfiles de expresión génica de los especímenes obtenidos de sujetos masculinos con infecciones uretrales. RNA fue aislado de muestras uretrales y utilizado como plantilla para amplificar, por PCR (RT-PCR), de la transcriptasa reversa gonocócicas genes conocidos que regularse por hierro y piel (tbpA, tbpB y piel). El gen expresa constitutivamente rmp gonocócica se utilizó como control positivo. RT-PCR análisis indicó que muestras de gonorrea positivo donde fue visto rmp expresión eran también positivo fbpA 93% (51/55), 87% (48/55) tbpA positivos y 86% (14 de 16 pruebas) tbpB positivo. Además, detectamos una transcripción de la piel en el 79% (37 de 47 probado) de las muestras positivas. También medimos aumentos en los niveles de anticuerpos de la inmunoglobulina G contra TbpA (91%) y antígenos TbpB (73%) en el suero de sujetos masculinos infectados en comparación con los controles no infectados. Una tendencia positiva entre la expresión génica de tbpA y TbpA los niveles de anticuerpos en el suero indica una relación entre los niveles de la expresión génica y de la respuesta inmune en sujetos masculinos infectados con gonorrea por primera vez. Estos resultados indican que gonocócica hierro y piel-regulada tbpA y tbpB genes se expresan en la infección gonocócica y que temas masculinos con infecciones gonocócicas mucosas presentan anticuerpos contra estas proteínas.
Activación De Genes Inflamatorios En Células Endoteliales Aórticas Humanas En Porphyromonas Gingivalis Fimbria-dependiente
Estudios epidemiológicos y patológicos han sugerido que la infección con el patógeno oral Porphyromonas gingivalis puede potenciar aterosclerosis y enfermedad coronaria humana. Además, ha demostrado que acelera la aterosclerosis en la apolipoproteína E-deficiente la infección invasivas, pero no no invasivas p. gingivalis (ApoE(-/-)) ratones y acelerar las respuestas inflamatorias locales en tejido aórtico. En el presente estudio, utilizando microarrays de alta densidad del oligonucleótido, hemos definido el perfil de expresión génica de células endoteliales aórticas humanas (HAEC) después de la infección con invasivas y no invasivas p. gingivalis. Después de la infección de HAEC invasivo p. gingivalis cepa 381, observamos la regulación al alza de 68 genes. Genes codificantes de las citoquinas, Gro2 y Gro3; la molécula de adhesión intercelular de moléculas de adhesión vascular de 1 (ICAM-1), célula de la molécula de adhesión (VCAM) -1 y ELAM-1 (E-selectina); la Quimiocina Interleucina-8 (IL-8); y las moléculas proinflamatorias IL-6 y ciclooxigenasa-2 estaban entre los más altamente upregulated genes en p. gingivalis que haec 381-infectado comparado con control HAEC no infectada. Aumento de los niveles de mRNA de señalización moléculas reguladores transcripcionales y superficie de la célula también se observaron receptores. De nota, sólo 4 de estos 68 genes fueron también alza en HAEC infectado con la mutante de fimA no invasiva p. gingivalis. Transcripción reversa-PCR, enzyme-linked immunosorbent assay y células activado por fluorescencia clasificación análisis confirmaron la expresión de ICAM-1, VCAM-1, E- / P-selectinas P-selectins-6 y IL-8 en HAEC infectados con p. gingivalis invasoras. También demostramos que aumento de la expresión de ICAM-1 y VCAM-1 en tejido aórtico de ApoE(-/-) ratones desafiados por vía oral con p. gingivalis invasoras pero no con el mutante de fimA no invasiva p. gingivalis por análisis inmunohistoquímico. Tomados en conjunto, estos resultados demuestran p. gingivalis mediada por fimbria invasión estimula inflamatoria expresión génica HAEC y el tejido aórtico e indica que la infección invasiva p. gingivalis acelera las respuestas inflamatorias directamente en la aorta.
Sensibilización De Las Células Endoteliales Aórticas Humanas a Lipopolisacárido Vía Reglamento De Toll-like Receptor 4 Por Invasión Bacteriana De La Fimbria-dependiente
Receptores Toll-like (TLRs) son para arriba-regulada diferencialmente en respuesta a la infección microbiana y enfermedades inflamatorias crónicas tales como ateroesclerosis. Datos epidemiológicos apoyan la idea de que la enfermedad periodontal puede ser un factor de riesgo para la aceleración de la ateroesclerosis. Porphyromonas gingivalis, el agente etiológico de la enfermedad periodontal, invade el endotelio, se ha detectado en el tejido humano ateromatoso y acelera la formación de ateroma en la apolipoproteína E-/-ratones con inducción concurrente de TLRs en la aorta. Como las células endoteliales pueden presentar antígeno via TLRs y desempeñar un papel importante en el desarrollo de la aterosclerosis, examinamos la expresión de TLR en los células endoteliales aórticos humanas (HAEC) cultivados con wild-type p. gingivalis, un mutante de la fimbria deficientes y antígenos purificados. Observamos mayor expresión TLR en HAEC infectados con p. gingivalis salvaje-tipo por clasificador de células activado por fluorescencia, pero no con mutante no invasor, fimbria deficientes o purificado antígenos de p. gingivalis. A raíz de un desafío de tipo salvaje p. gingivalis, activación funcional de TLR2 y TLR4 evaluaron la estimulación posterior con ácido de lipoteicoico TLR agonistas Staphylococcus aureus (SLTA; Ligando de TLR2) y lipopolisacárido de Escherichia coli (LPS; Ligando de TLR4). HAEC indiscutible ha podido provocar la proteína chemoattractant de monocitos 1 (MCP-1) en respuesta a LPS o SLTA pero hacerlo cuando cultivadas con wild-type p. gingivalis. P. gingivalis inducida por TLR2 y expresión-4 HAEC funcionalmente reaccionaron a SLTA y e. coli LPS según lo medido por un aumento en la producción de MCP-1. Además, la expresión de MCP-1 sacado por e. coli LPS era inhibitable con el anticuerpo específico de TLR4 y polimixina B. Estos resultados indican que invasor p. gingivalis estimula la expresión de TLR en la superficie del endotelio y estas células preparadas responden a ligandos de TLR específicos definidos.
Modulación De Hemina-dependiente De Los Lípidos Una Estructura De Porphyromonas Gingivalis Lipopolisacárido
Porphyromonas gingivalis es una periopathogen fuertemente asociado con el desarrollo de la periodontitis del adulto tipo. Tanto las características de virulencia de periopathogens y factores relacionados con el anfitrión se creen que contribuyen a la periodontitis. P. gingivalis lipopolisacárido (LPS) muestra una cantidad considerable de heterogeneidad estructural de lípido A, que contiene ambas estructuras de lípido A penta - y tetra-acilada. Sin embargo, poco se sabe sobre cómo se regula el lípido un contenido estructural de p. gingivalis. Alteraciones en los lípidos un contenido pueden facilitar la capacidad de p. gingivalis para modular la respuesta del huésped innata a esta bacteria. En este informe, se muestra que la concentración de hemina en el medio de crecimiento significativamente modula el lípido lipopolisacárido un contenido estructural de p. gingivalis. Hemina es un componente clave de microambiental de fluido gingival cervical que se cree que varían según el estado de la ulceración vascular. A concentraciones bajas de hemina, se encontró una estructura de lípidos A penta-acilada principales, mientras que en las altas concentraciones de hemina, se observaron múltiples estructuras de tetra - y penta-acilada lípido A. Concentraciones de hemina, no adquisición de hierro, eran responsables de las alteraciones en los lípidos un contenido estructural. Las modificaciones del contenido lípido A estructurales eran independientes del procedimiento de extracción de LPS y ocurrieron en una variedad de cepas de laboratorio así como un aislado clínico recién obtenido. Las proteínas conocidas hemina Kgp y HmuR contribuyeron a los lípidos una mecanismo de detección de modulación. A lo mejor de nuestro conocimiento, éste es el primer informe que hemina, un componente microambiental clínicamente relevante de p. gingivalis, puede modular el lípido una estructura que se encuentra en una bacteria. Puesto que el tetra - y penta-acilada P. gingivalis lípido A estructuras tiene efectos sobre la activación de Toll-like receptor 4 de oposición, la alteración de los lípidos un contenido estructural puede tener efectos significativos sobre la respuesta del huésped a esta bacteria.
Expresión De Los Genes NspA Y SecY Activada Por Hierro En Neisseria Meningitidis Grupo B Por Los Mecanismos Dependientes De Piel Y - Independientes
Nuestros estudios de microarrays de genoma completo de Neisseria meningitidis MC58 previamente identifican un conjunto de 153 genes cuya transcripción se activó durante el crecimiento en hierro. En este estudio, regulación mediada por piel del gen activado hierro nspA fue confirmada, mientras que el hierro-activa la regulación del gen secY fue demostrada para ser independiente de la piel. Secuencias de análisis de la Unión de la piel en el gene del partido y hierro adicionales-activación y piel regulada gene identificado una unidad ATAAT hexamérica (G/T) en las regiones de operador de estos genes similares a la observada en los genes de piel y hierro-reprimidas. Estos estudios indican que la expresión de los genes activados por hierro del partido y secY en N. meningitidis ocurren por mecanismos dependientes de piel e - independientes, respectivamente.
Un ARN Pequeño Novela Piel Y Hierro-regulada, NrrF, Se Requiere Para Indirecta Mediada Por Piel Regulación De Los Genes SdhA Y SdhC En Neisseria Meningitidis
Hierro es esencial para el crecimiento bacteriano y tóxicos en concentraciones más altas; por lo tanto, la homeostasis de hierro es estrictamente regulada. En Neisseria meningitidis la mayoría de regulación génica sensible al hierro está mediada por la absorción férrica regulador proteína (piel), un clásico se define como un represor transcripcional. Recientemente, sin embargo, estudios de microarray han identificado un número de genes en N. meningitidis que son el hierro y la piel activada, demostrando un nuevo papel para la piel como un activador transcripcional. Puesto que la piel se ha demostrado que indirectamente activar la transcripción de genes a través de la represión de pequeñas moléculas de ARN reguladores en otros organismos, presumimos que un mecanismo similar podría explicar dependiente de la piel, transcripción de genes activados por hierro en N. meningitidis. En este estudio, utilizamos un enfoque de Bioinformática a pantalla para detectar la presencia de pequeñas moléculas de ARN piel regulada en N. meningitidis MC58. Esta pantalla había identificado un ARN pequeño, adjunto llamado NrrF (para neisserial regulador RNA sensible a hierro [Fe]), que fue demostrada para ser hierro sensible y regulado de la piel y que tiene un orthologue bien conservado en N. gonorrhoeae. Además, esta pantalla identificado un número de otros transcritos de RNA pequeños probables, novela. Por último, utilizamos un nuevo enfoque de la bioinformática para predecir objetivos regulatorios del ARN pequeño NrrF. Este análisis condujeron a la identificación de los genes sdhA y sdhC, que posteriormente se demostró que bajo la regulación de la NrrF en un mutante de nrrF. Este estudio es el primer informe de small RNAs de N. meningitidis y el primero en utilizar un enfoque de Bioinformática a identificar, a priori, los objetivos regulatorios de un ARN pequeño.
Porphyromonas Gingivalis Mediada Por Enfermedad Periodontal Y La Aterosclerosis: Diferentes Enfermedades Con Características Comunes En Patogenesia Por TLRs
Receptores Toll-like (TLRs) son un grupo de receptores de patrón molecular asociado a patógenos, que desempeñan un papel importante en la señalización inmune innata en respuesta a la infección microbiana. Se ha demostrado que los TLRs son diferencialmente regulada en respuesta a la infección microbiana y enfermedades inflamatorias crónicas tales como ateroesclerosis. Además hiperlipidémicos ratones deficientes en exhibición señalización TLR2 y TLR4 MyD88 disminución las respuestas inflamatorias y disminuyeron la ateroesclerosis. La acumulación de pruebas ha implicado a agentes infecciosos específicos incluyendo el patógeno de la enfermedad periodontal Porphyromonas gingivalis en la progresión de la aterosclerosis. Pruebas en seres humanos, lo que sugiere que la infección periodontal predispone a la aterosclerosis se derivan de estudios que demuestran que el patógeno periodontal p. gingivalis reside en la pared de los vasos ateroscleróticos y seroepidemiológico estudios demostrando una asociación entre anticuerpos IgG específicos a patógeno y la aterosclerosis. Hemos establecido que las vías de señalización inflamatorias que p. gingivalis utiliza depende del tipo celular y esta especificidad influye claramente inmune innata de señalización en el contexto del local y distante inflamación crónica inducida por este patógeno. Hemos demostrado que p. gingivalis requiere TLR2 inducir ósea inflamatoria oral perder en ratones. Además, hemos demostrado que la infección de p. gingivalis acelera aterosclerosis en hiperlipidémicos ratones con un aumento asociado en la expresión de TLR2 y TLR4 en lesiones ateroscleróticas. Nuestro trabajo reciente con p. gingivalis ha demostrado la efectividad de las estrategias de intervención específica (inmunización) en la prevención de la ateroesclerosis acelerada de patógeno. Mejorar la comprensión de los mecanismos de conducción infección e inflamación crónica durante la aterosclerosis en última instancia puede proporcionar nuevos objetivos para la terapia.
Fimbrias Bacterianas Estimulan La Activación Proinflamatorias En El Endotelio a Través De Diferentes TLRs
Las proteínas fimbrias mayores y menores, producidas por el patógeno humano Porphyromonas gingivalis se requieren para la invasión de células endoteliales aórticas humanas y para la estimulación de las respuestas inflamatorias potentes. En este estudio, Divulgamos que se unen a formas nativas de ambos las proteínas fimbrias mayores y menores y TLR2 la señal para esta respuesta. Fimbrias mayores y menores obligados a una proteína quimérica humana TLR2:Fc con un K(d) observada de 28,9 nM y 61.7 nM, respectivamente. Unión directa de las fimbrias mayores y menores a una proteína quimérica humana de CD14-Fc también estableció la unión específica de las fimbrias mayores y menores a CD14 con cinética de saturación clásico. Usando una importantes p. gingivalis y mutante de fimbrias menores, confirmamos que TLR2 vinculante en células toda depende de la expresión de las fimbrias mayores y menores. Aunque no observamos vinculantes con las fimbrias mayores o menores a la proteína quimérica TLR4-Fc, para ambas proteínas de señalización a través de TLR4 fue demostrada en riñón embrionario humano 293 células transfectadas con TLR4 y solamente en la presencia de MD-2. Transfección transitoria de dominante-negativo formas de TLR2 y TLR4 redujo la producción de IL-8 por células endoteliales aórticas humanas tras estimulación con mayores o menores fimbrias. La posibilidad de dos patrones moleculares asociados microbio bien definidos de seleccionar para los receptores de reconocimiento inmune innato basados en proteínas accesorias puede proporcionar una forma novedosa para un patógeno sentido y la señal en entornos de host apropiado.
Expresión De La Proteína Reguladora Mundial Gonocócica Piel Y Genes Que Abarca El Pelaje Y Hierro Regulón Durante La Infección in Vitro E in Vivo En Las Mujeres
La proteína reguladora de absorción férrica, piel, funciona como una proteína reguladora global de la transcripción del gen en la mucosa patógeno Neisseria gonorrhoeae. Hemos demostrado previamente varios N. gonorrhoeae reprimidas piel genes se expresan en vivo durante la infección gonocócica mucosa en los hombres, que sugiere que este organismo se infecta en un entorno de hierro-limitada y que la piel se expresa en estas condiciones. En este estudio hemos demostrado expresión del gen de la piel gonocócica in vitro, en células epiteliales cervicales humanas y en muestras de sujetos femeninos con Infección gonocócica no complicada. Estudios in vitro confirman que la expresión del gen piel gonocócica fue reprimida durante el crecimiento bajo condiciones de hierro-repleto de crecimiento pero que se mantuvo un nivel basal de la proteína. Mediante fusiones transcripcionales de la GFP construidos a partir de secuencias específicas de encuadernación piel dentro de la región del promotor/operador de piel, determinamos que esta región del operador era funcional durante la infección de células epiteliales cervicales N. gonorrhoeae. Además, revertir análisis de PCR de transcripción, así como análisis de microarrays, usando una piel personalizados de Neisseria y hierro regulón microarray reveló que varios genes regulados de piel y de hierro fueron expresados durante la infección de células epiteliales cervicales N. gonorrhoeae. Análisis de microarrays de los especímenes obtenidos de sujetos femeninos con Infección gonocócica no complicada corroboran nuestros resultados in vitro y el punto hacia un papel clave de genes gonocócica piel y hierro-regulada en enfermedad gonocócica.
Toll-like Receptor 2 Juega Un Papel Fundamental En La Progresión De La Ateroesclerosis Que Es Independiente De Los Lípidos De La Dieta
Receptores Toll-like (TLRs), un grupo de receptores de reconocimiento de patrón microbiano asociado a patógenos, juegan un papel importante en la señalización inmune innata y se regulan diferencialmente en enfermedades inflamatorias crónicas como la aterosclerosis. Sin embargo, la participación de TLRs en la progresión de la aterosclerosis es todavía confusa.
Compromiso De Vías De Señalización Inmunes Innatas Específicas Durante La Porphyromonas Gingivalis Inducida Por Aterosclerosis E Inflamación Crónica
Receptores Toll-like (TLRs) son un grupo de receptores de patrón molecular asociado a patógenos, que desempeñan un papel importante en la señalización inmune innata en respuesta a la infección microbiana. Se ha demostrado que los TLRs son diferencialmente regulada en respuesta a la infección microbiana y enfermedades inflamatorias crónicas tales como ateroesclerosis. La expresión de TLRs son marcadamente aumentada en lesiones ateroscleróticas humanas y esto ocurre preferentemente por las células endoteliales y macrófagos en áreas infiltradas con células inflamatorias. Además polimorfismos en el gene humano codifica un receptor TLR (TLR4) que atenúa la señalización del receptor y disminuye la respuesta inflamatoria a los patógenos gram-negativos, se asocia con bajos niveles de ciertas circulación mediadores de la inflamación y un menor riesgo de ateroesclerosis en los seres humanos. Los avances recientes han establecido un papel fundamental para la inflamación en la mediación de todas las etapas de la aterosclerosis. Sin embargo, los gatillos que inician y sostienen el proceso inflamatorio no han sido definitivamente identificados. Aunque se carecen de pruebas definitivas de un papel de la infección, contribuir a la aterogénesis, múltiples investigaciones han demostrado que agentes infecciosos evocan cambios celulares y moleculares apoyo de esa función. Pruebas en seres humanos, lo que sugiere que la infección periodontal predispone a la aterosclerosis se derivan de estudios que demuestran que el patógeno periodontal Porphyromonas gingivalis reside en la pared de los vasos ateroscleróticos y seroepidemiológico estudios demostrando una asociación entre anticuerpos IgG específicos a patógeno y la aterosclerosis. Nuestro trabajo reciente con p. gingivalis ha demostrado la efectividad de las estrategias de intervención específica (inmunización) en la prevención de la ateroesclerosis acelerada de patógeno. También hemos establecido que las vías de señalización inflamatorias que p. gingivalis utiliza depende del tipo celular y esta especificidad influye claramente inmune innata de señalización en el contexto de la inflamación crónica local frente a la inflamación crónica distante. Postulamos que la infección bacteriana media las respuestas inflamatorias que involucran vías específicas de inmunes innatas en células hospedadoras definida. Además, estas respuestas inflamatorias pueden correlacionarse con ateroesclerosis y complicaciones trombóticas en última instancia.
CIS - Y Trans-actuar Elementos Que Intervienen En La Regulación De NorB (norZ), El Gene Que Codifica El óxido Nítrico Reductasa En Neisseria Gonorrhoeae
La capacidad de Neisseria gonorrhoeae para no reducir el óxido nítrico () puede tener efectos inmunomoduladores importante en el host durante la infección. Por lo tanto, una comprensión integral del mecanismo regulador del gen de la óxido nítrico reductasa (norB) necesita ser aclarado. Para lograr esto, se analizaron las regiones funcionales de la región de río arriba norB. El promotor contiene un motivo-10 extendido (TGNTACAAT) que se requiere para la expresión de alto nivel. Análisis de eliminación y sustitución de la región de río arriba norB reveló que ninguna secuencia aguas arriba del motivo-10 participa en norB regulación bajo condiciones anaeróbicas o en presencia de NO. Sin embargo, la sustitución de una repetición invertida de bp 29 secuencia inmediatamente aguas abajo de la extendido-10 motivo dio altos niveles de expresión aeróbica de una norB:: lacZ fusión. Inactivación insertional de nsrR gonocócica, predicho que se unen a esta secuencia de repetición invertida, resultó en la pérdida de represión norB y no eliminado capacidad de inducción. Complementación de la solo-copia de nsrR en trans restaurado regulación de transcripción norB tanto NorB actividad por NO. En Escherichia coli, expresión de un gen nsrR gonocócica reprime norB gonocócica; inducción de norB ocurrió en presencia de exógeno adicional NO. NsrR también regula aniA y dnrN, así como su propia expresión. También determinamos que la piel regula norB por un método de activación indirecta novela, previniendo el atascamiento de un homólogo de ArsR gonocócica, un segundo represor cuyo sitio de supuesta Unión superpone el sitio de unión de la piel.
Estimulación De Los Receptores Toll-like 2 En Plaquetas Humanas Induce Una Respuesta De Thromboinflammatory a Través De La Activación De La Fosfatidilinositol 3-quinasa
Las células del sistema inmune innato utilizan receptores Toll-like (TLRs) para iniciar la respuesta proinflamatoria a la infección microbiana. Estudios recientes han demostrado agudos infecciones están asociadas con un aumento transitorio en el riesgo de eventos trombóticos vasculares. Aunque las plaquetas desempeñan un papel central en la trombosis aguda y acumulando evidencia demuestra su papel en la inflamación y de la inmunidad innata, las investigaciones sobre la expresión y funcionalidad de la plaqueta TLRs han limitado. En el presente estudio, se demuestra que las plaquetas humanas expresan TLR2, TLR1 y TLR6. Incubación de las plaquetas aisladas con Pam (3) CSK4, un agonista sintético de TLR2/TLR1, directamente inducida por la agregación plaquetaria y la adhesión al colágeno. Estas respuestas funcionales fueron inhibidas en ratones deficientes de TLR2 y en plaquetas humanas, por el tratamiento previo con bloqueo de TLR2 anticuerpo. Estimulación de la plaqueta TLR2 también aumentó la expresión superficial de P-selectina, activación de la integrina alpha(IIb)beta(3), generación de especies reactivas del oxígeno y en sangre entera humana, formación de plaquetas-neutrófilo heterotípicos agregados. TLR2 estimulación también activa el fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3-K) / la vía de señalización de Akt en las plaquetas y la inhibición de PI3-K redujo significativamente las respuestas CSK4-inducida de la plaqueta de Pam (3). Desafío in vivo con vivos Porphyromonas gingivalis, una bacteria gramnegativa patógeno que utiliza TLR2 para inmune innata de señalización, también indujo importante formación de agregados de plaquetas-neutrófilo en salvaje-tipo pero no ratones TLR2-deficientes. Juntos, estos datos proporcionan la primera demostración que plaquetas humanas expresan TLR2 funcional capaz de reconocer componentes bacterianos y activación de las vías de plaquetas trombótica o inflamatoria. Este trabajo fundamenta el papel de las plaquetas en la respuesta inmune e inflamatoria y sugiere un mecanismo por el cual las bacterias directamente podrían activar las plaquetas.
Ateroesclerosis Inflamatoria Mediada Por Patógeno Está Mediada En Parte Mediante Respuestas Inflamatorias Inducidas Por 2 Toll-like Receptor
Estudios en seres humanos han establecido que polimorfismos en genes que codifican los receptores Toll-like inmunes innatos (TLRs) se asocian a aterosclerosis inflamatoria. En ratones hiperlipidémicos, han divulgado TLR2 y TLR4 para contribuir a la progresión de la aterosclerosis. Humano y ratón estudios apoyan un papel para el patógeno oral Porphyromonas gingivalis en la aterosclerosis, aunque se desconocen los mecanismos por los cuales este patógeno estimula ateroesclerosis inflamatoria mediante la activación del sistema inmune innato. Usando un genéticamente definido apolipoproteína E-deficiente (modelo de ratón ApoE(-/-)) demostramos que aterosclerosis inflamatoria mediada por patógeno se produce a través de mecanismos tanto TLR2 dependientes e independientes del TLR2. Infección de p. gingivalis en ratones que poseen TLR2 funcional inducida por la acumulación de macrófagos, así como mediadores inflamatorios incluyendo CD40, IFN-gamma y las citoquinas proinflamatorias IL-1 beta, IL-6 y factor de necrosis tumoral alfa en las lesiones ateroscleróticas. La expresión de estos mediadores inflamatorios se redujo en las lesiones ateroscleróticas de p. gingivalis infectados TLR2 deficientes (TLR2(-/-)) ratones. Estos estudios proporcionan un vínculo mecánico entre un receptor inmune innato y ateroesclerosis acelerada de patógeno por un patógeno bacteriano clínicamente y biológicamente relevante.
Porphyromonas Gingivalis Acelera Inflamatorias Aterosclerosis De La Arteria Innominada De Ratones Deficientes De ApoE
Estudios en seres humanos apoyan un papel para el patógeno oral Porphyromonas gingivalis en el desarrollo de la aterosclerosis inflamatoria. El objetivo de este estudio fue determinar si la infección de p. gingivalis acelera inflamación y aterosclerosis de la arteria innominada de ratones, una arteria que se ha reportado que exhiben muchas características de la enfermedad aterosclerótica humana, incluyendo la ruptura de la placa.
