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Articles by Cary Moody in JoVE
JoVE Immunology and Infection
기본 인적 Keratinocytes에서 Organotypic 뗏목 문화의 생성
1Department of Microbiology & Immunology, University of North Carolina-Chapel Hill, 2Lineberger Cancer Center, University of North Carolina-Chapel Hill
Other articles by Cary Moody on PubMed
소과 면역 결핍 바이러스에 수직 전송의 확인에 자연스럽 게 젖소 중 합 효소 연쇄 반응을 사용 하 여 감염
이 연구의 목적은 소과 면역 결핍 바이러스 (BIV) 자연적으로 감염 된 젖소에서 수직으로 전송 하는지 여부를 확인 했다. 20-2 댐/송아지 쌍 미시시피 농업과 임업 실험 역 유제품에서 연구 했다. 송아지, 말 초 혈액 백혈구는 이러한 샘플에서 정화 했다 및 백혈구 DNA 중 합 효소 연쇄 반응을 BIV provirus의 pol 유전자 영역 대상 지정에 사용 된 다음 혈액 샘플을 수집. 남부 blotting와 교 잡 증폭 조각의 BIV 특이성을 확인을 위해 사용 되었다. BIV provirus 22 송아지 (64%)의 14 세로 전송 시연에서 발견 되었습니다. 그들은 바이러스의 lactogenic 전송의 가능성을 허용 혈액 수집 하기 전에 자신의 어머니가 무엇 인가 할 수 있기 때문에 종 아리의 transplacental 전송의 최종 해석에서 실격 했다. BIV의 transplacental 전송 22 송아지 (27%)의 6에 발견 되었다.
상피 세포 클론 출현의 행렬식으로 엡 스타인-바 바이러스 테르미니의 길이
엡 스타인-바 바이러스 (EBV) DNA의 재확인된 터미널 시퀀스는 수치로 제공 하는 바이러스 성 감염 된 세포에 clonality 정도의 전염 성 virions 중 이종. 체 외 감염, 암 세포를 적은 단자 EBV episomes 베어링 반복 후 (TRs) 빠르게 확산. 단일 세포 클론에서 TR 번호 다양 반비례 잠재 막 단백질 2A 수량 unspliced 선구자 인 크로스 조인 된 TRs (LMP2A) 성적 증명서. 따라서, EBV clonality 상피 세포 변환 후 발생 하는 감염 LMP2A 향상 된 종양의 진행을 최적화 하는 TR 번호 선택을 반영 될 수 있습니다.
엡 스타인-바 바이러스로 인코딩된 LMP2A NF KappaB 전사 인자 통로의 변조에 의해 바이러스와 세포 유전자 발현을 조절
엡 스타인-바 바이러스 (EBV)-관련된 악성 종양 바이러스와의 호스트 셀 사이의 복잡 한 상호 작용을 반영 하는 바이러스가 숨겨진 유전자 발현의 뚜렷한 패턴 표시. EBV 연관 된 상피 종양 nasopharyngeal 암 (NPC), 금하는 LMP1 단백질 나타납니다만 종양의 비율을 제한 하는 반면에 지속적으로 잠재 된 멤브레인 바이러스 인코딩 단백질 LMP2A 표현 됩니다. NPC의 pathogenesis lmp2a의 기여를 이해 하려고, 우리는 암 세포 라인에 안정적으로 어느 한 야생-타입 재조합 EBV (rEBV)와 체 외 감염 또는 돌연변이 rEBV lmp2a는 삭제 (rEBV-2A) 설립. LMP2A 하지만 하지 LMP1 EBV 유전자 발현의 NPC 같은 패턴을 지속적으로 Rebv에 감염 하는 암 세포에서 관찰 되었다. 그러나 rEBV-2a에 감염 하는 암 종 세포의 신호 변환기에서 LMP1 높은 수준의 표현 전사 (STAT)의 활성 제-레 귤 레이트 된 L1 TR 발기인. 이 효과, 기저 Rebv에 감염 된 암 세포에서 STAT 활동 감소 했다 고이 억압을 lmp2a의 부재에 안심 했다와 일치. 이 변조 합계 활동의 암 세포 선에서 IL 6 autocrine 분 비를 억제 하는 lmp2a의 기능 연관. Exogenous IL 6 표현의 LMP1 STAT3 활성화 Rebv에 감염 된 암 종 세포 라인 그리고 EBV 양성 C666 1 NPC 셀 라인을 통해 유도 수 있었다. 일리노이-6 LMP2A 중재 억제 NF kappaB 저해의 결과 이었다. 이러한 데이터 공개 LMP2A 암 세포의 두 주요 전사 요소 경로 변조 하 고이 찾는 EBV 연관 된 종양의 병 인에 중요 한 있을 수 있습니다 것이 좋습니다.
엡 스타인-바 바이러스로 인코딩된 Lmp2a에 의해 세포 성장 레 귤 레이 터 Mtor의 변조
번역 개시의 제어는 세포 성장과 확산 잠재력을 금하는 데 단백질 합성 기계의 구성 요소와 함께 규제 하는 하나의 수단 이다. 인간의 종양 바이러스 엡 스타인-바 바이러스 (EBV)에 의해 대기 시간 단백질 lmp2a의 식을 활성화 phosphatidylinositol 3-kinase/Akt 위치한 mTOR (rapamycin의 포유류 대상)의 성장 신호는 필수적인 중재자의 업스트림. 우리는 mTOR 표현의 번역, 진 핵 개시 인자 4E 바인딩 단백질 1, 및 향상 된 c-Myc 단백질 번역의 부정적인 레 귤 레이 터의 wortmannin rapamycin에 민감한 저해로 이어지는 암 종 세포에서 lmp2a에 의해 활성화 됩니다 보여 줍니다. 세포 변환 컨트롤에서 DNA 종양 바이러스에 의해 개입 EBV tumorigenesis의 필수적인 요소가 될 가능성이 높습니다.
인간의 Papillomaviruses Caspases 상피 분화 유도 바이러스 성 게놈 증폭에 따라 활성화 합니다
인간 papillomaviruses (HPVs)의 라이프 사이클 상피 분화 맨 층 화 레이어에 제한 늦게 바이러스 성 이벤트와 연결 됩니다. 우리의 연구 표시 HPV 활성화 capases-3-7, 그리고 차별화, 시-9 반면 최소한의 활성화는 정상적인 keratinocytes 차별화에서 관찰 되었다. 활성화 바이러스 라이프 사이클에 caspases의 잠재적인 역할을 제안 하는 apoptosis 상당한 수준의 결핍에서 발생 했습니다. 이 지원 caspase 억제제의 추가 크게 차별화 종속 바이러스 성 게놈 증폭 장애인. 보존된 caspase 분열 모티브 복제 단백질 e1에서에서 확인 되었다 ((46)DxxD(49)) 재조합 caspase 3 및 caspase 7 체 외 대상 이었다. 이 사이트의 돌연변이 저해 caspase 분열 생산성 바이러스 라이프 사이클에 필요한 나타내는 바이러스 유전자의 증폭. 우리의 학문은 설명 HPV caspases 차별화 생산성 바이러스 성 복제를 용이 하 게 활성화 하 고 자 궁 경부 암 세포 분화에 바이러스 성 유전자 기능을 제어 하는 방법을 나타냅니다.
인간 유 두 종 E1 Helicase Keratinocytes에서 바이러스 성 게놈의 정비 촉진 WD 반복 단백질 P 80와 상호 작용 합니다
때문에 그들의 작은 유전자 코딩 용량 제한, 인간 papillomaviruses (HPV)의 수명 주기 완료를 위한 호스트 요소에 광범위 하 게 지. 이 따라, 일차 helicase E1를 포함 하 여 대부분의 HPV 단백질 여러 단백질 상호 작용에 관여. E1의 보존된 영역 아직 되지 않은 사실을 관찰 작용 함수를이 helicase의 소설 대상을 식별 하 탠덤 선호도 단백질 정화 (TAP) 질량 분석을 결합 하 여 사용 하 여 우리를 묻는 메시지가. 이 방법은 N 터미널 사이의 새로운 상호 작용의 발견을 주도 HPV의 40 아미노산 입력 11 (HPV11) E1 및 셀룰러 WD 반복 단백질 p 80 (WDR48). 우리는 상호 p80 anogenital HPV에서에서 E1 단백질 가운데만 아니라 피부 나 동물 종류 중 보존은 발견. Colocalization 연구 보여준 E1 E1 핵 지역화 신호에 의존 하는 방식으로 핵을 세포질 로부터 p 80을 재배포할 수 있습니다. Hpv11에서 E1 단백질에 있는 3 개의 아미노를 함유한 산 성 대체 및-31 p 80 바인딩 및 그것의 relocalization 핵을 파기 하는 발견 했다. HPV31 E1, 이러한 대체 감소 하지만 일시적인 바이러스 성 DNA 복제를 완전히 폐지 하지 않았다. 반면 매우 낮은 복사본 번호 유지 했다 세 번째 돌연변이 단백질 인코딩을 HPV31 유전자 돌연변이 E1 단백질의 두 인코딩 했다 불멸 하 게 기본 keratinocytes에서 episomes로 유지 되지 않습니다. 이러한 연구 결과 p80 E1 상호 undifferentiated keratinocytes에 바이러스 성 episome의 효율적인 유지 관리를 위해 필요 하다는 것이 좋습니다.
인간의 Papillomaviruses 차별화에 따라 바이러스 성 게놈 증폭에 대 한 ATM DNA 손상 통로 활성화
인간 papillomaviruses (HPV)는 자 궁 경부 암의 원인이 되는 에이전트. HPV 감염 주기 밀접 하 게 연결 된 바이러스 성 게놈 증폭 된 호스트 상피의 분화 상태에 늦은 유전자 표현과 virion 생산 suprabasal 셀으로 제한. E6 및 E7 단백질 차별화, 따라 DNA 합성에 도움이 되는 환경을 제공 하지만 약간은 생산성 바이러스 성 게놈 증폭을 조절 하는 메커니즘에 관하여 알려진 다. Keratinocytes HPV 31 episomes와 화학 억제제를 안정적으로 유지 하는 사용 하 여, 바이러스 성 단백질 CHK2, BRCA1 및 nbs1의 인 산화에 의해 표시 된 대로 셀, 차별화에 ATM DNA 손상 반응 활성화 하는 보여 줍니다. 이 활성화가 바이러스의 복제 foci의 형성에 관해서는 바이러스 성 게놈 증폭에 대 한 필요 합니다. 반면, undifferentiated keratinocytes에서 ATM 키 니 아 제 활동의 저해가 했다 바이러스 성 게놈의 안정적인 유지 보수에 영향을 주지 않습니다. 이전 연구 HPVs caspase 3/7 활성화 차별화에 따라 낮은 수준의 유도 하 고 이것이 E1 복제 단백질 및 게놈 증폭의 분열에 대 한 중요 한 것으로 나타났습니다. 우리의 연구 caspase 분열 HPV DNA의 행동을 통해 세포 손상 단백질 키 니 아 제 CHK2 ATM 니 E7 바인딩을 결과로 활성화 될 수 있는 긍정적인의 분화에 따라 유도 하는 방법을 보여 줍니다. 이러한 결과 주요 규제 메커니즘 생산적인 HPV 복제 세포 분화에 대 한 책임을 식별 합니다. 우리의 결과 HPV 감염을 치료 하는 안티 바이러스 치료의 개발에 대 한 잠재적인 영향.
인간 유 두 종 바이러스 Oncoproteins: 변환 경로
인간 유 두 종 바이러스 (HPV) 감염 및 자 궁 경부 암의 개발 간의 연결에 30 년 전, 처음 알려졌다 고 오늘 HPV의 특정 하위 이러한 악성 종양의 원인이 되는 에이전트는 압도적인 증거가 있다. P53 및 retinoblastoma 단백질 HPV E6 및 E7 oncoproteins의 well-characterized 대상 있지만 최근 연구 결과 추가 경로 변경 됩니다 변환에 대 한 동등 하 게 중요 한 것으로 나타났습니다. 이러한 추가 요소는 세포 주기 진행, telomere 유지 보수, apoptosis 및 염색체 안정성의 중요 한 레 귤 레이 터. HPV oncoproteins 이러한 활동을 수정 하는 방법을 이해 발암의 기본 메커니즘에 대 한 새로운 통찰력을 제공 합니다.
인간 유 두 종 바이러스 유형 31 E1의 핵 수출 Cdk2 인 산화에 의해 규제 하 고 바이러스 성 게놈 유지 보수에 필요한
인간 유 두 종 바이러스 (HPV)에서 초기자 단백질 E1 helicase 바이러스 성 게놈의 복제에 대 한 필수입니다. E1 포함 3 개의 기능 도메인: ATPase/helicase 활동은 C 터미널 효소 도메인, 복제, 그리고 N-터미널 지역 비보 불가결 하지만 체 외에 바이러스 성 DNA 복제에 필요한의 기원에서 특정 시퀀스를 인식 하는 중앙 DNA 바인딩 도메인. E1이 N 맨끝 부분 바이러스 라이프 사이클에 누구의 기능은 불분명 남아 보존된 핵 수출 신호 (NES)를 포함 합니다. 이 연구 HPV31 e1의 핵 수출 S92 및에 위치한 근처에 E1 NES 각각 S106 두 serines 잔류물의 E/A-Cdk2 인 산화에 의해 저해입니다 증거를 제공 합니다. 우리 e1의 핵 수출 일시적인 바이러스 성 DNA 복제에 중요 하지 않습니다 하지만 undifferentiated keratinocytes HPV episome의 장기적인 유지 관리를 위해 중요 한 결정 핵에 국한 E1 돌연변이 단백질을 사용 하 여. E1 핵 수출 하지 바이러스 성 DNA 복제에 대 한 필요 하지만 여러 세포 분열을 통해 게놈 유지 관리에 필요한 연구 결과 e1의 연속 핵 축적은 세포 성장에 치 명 타 가능성 제기. 이 가능성의 지원 e1의 핵 축적 극적으로 S 단계에서 세포 주기 진행을 지연 하 여 세포 증식 감소를 관찰 합니다. 이러한 결과 근거 하 여 우리는 e1의 핵 수출 필요 하다는, 적어도 세포 증식에 미치는 해로운 영향을 방지 하기 위해 핵에 바이러스 성 helicase이의 축적을 제한 부분에 제안 합니다.
인간 유 두 종에서 바인딩 모티브 18 (HPV18) E1 입력 ^ E4 CDK 단지 및 G2/M 세포 주기 검거 Keratinocytes의 협회에 대 한 필요 하지만 차별화 종속 바이러스 성 게놈 증폭 또는 L1 Capsid 단백질 식에 대 한 필요 하지 않습니다
인간 유 두 종 바이러스 (HPV) E4 단백질의 G2/M 체포 기능 바이러스 성 게놈 증폭에 필요한 것을 가설을 세웠다. 전체 길이 HPV18 E1 ^ E4 단백질 효율적인 바이러스 성 게놈 증폭에 대 한 필수적입니다. 여기 우리 HPV18 e1에서 CDK이 분 합의 인식 주제 내에서 주요 결정 요인 식별 ^ E4 활성 CDK 단지 예측된 CDK 인 산화 사이트 (트레오닌 23)에서 체 외 인 산화와 협회에 대 한 중요 한. 최적의 바인딩 순서 ((43)RRLL(46)) within this E4 motif is required for G2/M arrest of primary keratinocytes and correlates with cytoplasmic retention of cyclin B1, but not cyclin A. Disruption of this motif in the E4 ORF of HPV18 genomes, and the subsequent generation of stable cell lines in primary... 우리 결론 HPV18 E4 G2/M 체포 기능 초기 식물 이벤트에 역할을 재생 되지 않습니다.
유 두 종 바이러스 E1 Helicase의 핵 축적 S 상 진행을 차단 하 고 ATM 종속 DNA 손상 반응을 트리거합니다
유 두 종 바이러스 게놈의 복제 원점에서 바이러스 성 E1 및 E2 단백질 사이의 복잡 한 조립에 의해 시작 됩니다. E1 helicase는 원본에 바인딩되는 중앙 도메인 C 터미널 ATPase/helicase 도메인으로 이루어져 고 핵을 포함 하는 N-터미널 규제 영역 가져오기 및 내보내기 신호는 nucleocytoplasmic 였죠 중재. 우리는 이전에 e1의 핵 축적은 그것의 핵 수출 하 여 예방할 수 있는 세포질 확산에 해로운 영향을 보고 했다. 여기 우리가 나타났습니다 다른 유 두 종 바이러스에서 e1의 그 핵 축적 형식 블록 세포 주기 진행 초기 S 단계에서 DNA 손상 반응 (DDR)의 활성화를 유발 및 원점 바인딩 및 e1의 ATPase 활동 필요 방식으로 ATM 통로의. E 2와 함께 복잡 한 형성 유도 DDR e1의 능력을 감소 하지만 세포 주기 검거를 방지 하지 않습니다. 일시적인 바이러스 성 DNA 복제 여전히 S 위상 체포 셀에서 발생 하지만 의외로에 의해 영향을 받는 것도 ATM 키와는 DDR의 유도에 따라 다릅니다. 마지막으로, 우리는 DDR에 유도 된 인간 유 두 종 바이러스 31 (HPV31) 입력 이기도 하는 증거를 제공-돌연변이 E1 단백질 핵 수출에 대 한 결함을 표현 keratinocytes 불후의 명작. 우리가 제안 하는 e1의 핵 수출 세포 주기 검거와 바이러스 라이프 사이클 및 E2 추가 보호 undifferentiated 셀과 그 복잡 한 형성의 episomal 유지 관리 단계는 DDR의 유도 E1 핵에 있을 때 한 DDR을 받고에서 방지.
