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Articles by Chad M. Vezina in JoVE
JoVE General
Un alto rendimiento In situ Método de hibridación para caracterizar los patrones de expresión de ARNm en el ratón Fetal del tracto urogenital inferior
Aquí se describe un rendimiento de alta eficiencia
Other articles by Chad M. Vezina on PubMed
Antioxidante Inhibe El ADN Tamoxifeno-aductos En El Explante Cultura Del Endometrio
Fresh explantes endometriales humanos se incubaron durante 24 horas a 37 grados C, ya sea con el tamoxifeno (10-100 micro M) o el vehículo (0,1% de etanol). Tres metabolitos es decir, alfa-hydroxytamoxifen, 4 hidroxitamoxifeno-, y N-desmetiltamoxifeno fueron identificados en los medios de cultivo. El tejido se tamaño limitado, pero aductos de ADN formados por la vía de alfa-hidroxitamoxifeno se detectaron utilizando auténticas alfa-(N-deoxyguanosyl (2)) normas tamoxifeno. Relativos aductos ADN-niveles de 2,45, 1,12, y 0,44 por 10 (6) nucleótidos se detectaron después de incubaciones con 100, 25 y 10 micro M tamoxifeno, respectivamente. La exposición simultánea de los explantes a 100 micro M tamoxifeno con ácido ascórbico 1 mM redujo el nivel de alfa-hidroxitamoxifeno considerablemente (68,9%). La formación de tamoxifeno aductos de ADN detectables en los explantes procedentes de las mismas muestras expuestas a 100 tamoxifeno micro M con ácido ascórbico 1 mM fueron también inhibido. Estos resultados apoyan el papel de la biotransformación oxidativa del tamoxifeno en la subsiguiente formación de aductos de ADN en este tejido.
La Formación De Aductos De ADN En Hígado De Rata De Precisión De Corte Y Rebanadas De Pulmón Expuestos a Benzo [a] Pireno
Químicas de ADN-aductos proporcionan una medida integrada de la exposición, la absorción, bioactivación, la desintoxicación, y la exposición de reparación del ADN después de que un agente genotóxico. Benzo [a] pireno (BaP), un prototipo de hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAP), se puede bioactivación por el citocromo P-450s (APP) y la epóxido hidrolasa de metabolitos genotóxicos que forman aductos covalentes con el ADN. En este estudio, se utilizó la precisión de corte de hígado de rata y rebanadas de pulmón expuestas a BaP para investigar los tejidos específicos de las diferencias en la absorción química y la formación de aductos de ADN. Para investigar la contribución de APP bioactivar (como CYP1A1 y CYP1B1) sobre la formación de aductos BaP-ADN, los animales fueron pretratados también in vivo con 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD, la dioxina) antes incubación in vitro de láminas de tejido con BAP. Además, la distribución tisular de BaP y BAP-ADN niveles de aducto de estudios in vivo se compararon con los de los experimentos in vitro trozo de tejido. Los resultados indican un tiempo y la concentración que dependen de aumento en el tejido asociado a BaP tras la exposición de hígado de rata y las rebanadas de tejido pulmonar a BaP in vitro, con niveles generalmente más altos de BaP retenidos en el tejido pulmonar. Además, de rata cortes de hígado y pulmón metaboliza BaP a intermediarios reactivos que forman aductos covalentes con el ADN. Totales BaP aductos de ADN aumenta con la concentración y tiempo de incubación. Los niveles de aducto (fmol aducto / ug ADN) en rebanadas de pulmón fueron mayores que el hígado en todas las dosis. Cortes de hígado mayor contenido de uno y dos aductos de menores, mientras que contenía dos rebanadas de pulmón aductos menores principales y 3. El perfil cualitativo tejidos específicos de estos aductos en rodajas de tejido fue similar a la observada a partir de los estudios in vivo, que valida aún más el uso de este modelo. El pretratamiento de los animales con TCDD antes de la incubación in vitro con BaP potenció los niveles de formación de aductos de ADN. Pretratamiento TCDD alterado la distribución de aductos en el pulmón, pero no en cortes de hígado. En conjunto, los resultados sugieren que los tejidos específicos cualitativa y diferencias cuantitativas en BaP aductos de ADN podría contribuir al pulmón ser un tejido diana para la carcinogénesis BaP. Además, los resultados validar el uso de láminas de tejido precisión de corte incubadas en cultivo de órganos dinámico como un modelo útil para el estudio de la formación de aducto químico-ADN.
La Exposición Subcrónica a La TCDD, PeCDF, PCB126, PCB153 Y: Efecto Sobre La Expresión Génica Hepática
Hemos empleado microarrays de ADN para identificar los únicos hepáticos patrones de expresión génica asociados a la exposición subcrónica a la 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD) y otros hidrocarburos aromáticos halogenados (Hahs). Mujeres Harlan Sprague-Dawley, las ratas fueron expuestas durante 13 semanas a dosis equivalentes de vista toxicológico, cuatro Hahs diferentes basados en el factor de equivalencia tóxica de cada producto químico: TCDD (100 ng / kg / día), 2,3,4,7,8-pentaclorodibenzofurano (PeCDF, 200 ng / kg / día), 3,3 ', 4,4' ,5-pentaclorobifenilo (PCB126, 1.000 ng / kg / día), o 2,2 ', 4,4', 5,5 ' -hexaclorobifenilo (PCB153, 1.000 mcg / kg / día). Global perfiles de expresión génica de cada exposición, que cuenta de 8799 establece sonda genética contenida en Affymetrix GeneChips RGU34A, se compararon mediante análisis de componentes principales. El receptor de aril hidrocarburos (AHR) ligandos TCDD, PeCDF y PCB126 producido muy similares perfiles globales de expresión génica que eran únicas en el ligando nonAhR PCB153, lo que subraya el gran impacto de la activación de Ahr y / o el daño hepático resultante de la expresión génica global en mujeres hígado de rata. Muchos genes se co-expresó durante la TCDD de 13 semanas, PeCDF o exposiciones PCB126, incluyendo clásicos Ahr reguladas por los genes y los genes de algunos que antes no se caracterizan por ser Ahr reguladas, como la molécula de adhesión celular carcinoembrionario-4 (C-CAM4) y adenilato ciclasa asociada a la proteína 2 (CAP2). En tiempo real de la transcriptasa inversa-reacción en cadena de la polimerasa confirmó el incremento en la expresión de estos genes en ratas TCDD, PeCDF, y PCB126 expuestos, así como la altura o hacia abajo-regulación de varios otros nuevos que respondan a las dioxinas genes. En resumen, los microarrays de ADN ha identificado correctamente que responden a las dioxinas genes que se expresan después de la exposición a ligandos Ahr (TCDD, PeCDF, PCB126), pero no después de la exposición al ligando no Ahr PCB153. En conjunto, estos hallazgos podrían ayudar a dilucidar algunas de las características fundamentales de la toxicidad de las dioxinas y podría clarificar más el papel biológico de la vía de señalización Ahr.
Regulación a La Baja Gene Hepática Tras La Exposición Aguda Y Subcrónica a La 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina
La exposición crónica a la 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD) ha demostrado que conducir al desarrollo de hepatotoxicidad y carcinogenicidad en el hígado de las ratas hembras. En este estudio, se investigó regulación a la baja hepática de genes en respuesta a la exposición aguda y subcrónica TCDD. Se identificaron 61 sondas que mostraron una regulación a la baja del doble o mayor subcrónica siguiente (13 semanas), la exposición a la TCDD. Análisis comparativo de la expresión hepática de estas 61 sondas se llevó a cabo con ratas expuestas a subchronically PeCDF, PCB126, PCB153, y una mezcla de PCB126 y PCB153. PCB153 producido poca o ninguna alteración en estas sondas, mientras que la mezcla binaria imitado más de cerca la regulación a la baja observada con TCDD. Para discernir si la represión de los genes dentro de este conjunto de sondas se producen como respuesta principal a la exposición a la TCDD, se analizó la capacidad de respuesta temprana de 11 genes a las 6, 24 y 72 h después de una sola exposición a la TCDD. Hemos observado represión principios de los 11 genes dentro de este curso de tiempo inicial, lo que indica que la represión de este subconjunto de los genes se produce como una respuesta primaria a la exposición TCDD y no como una respuesta secundaria a 13 semanas de tratamiento subcrónica. Además, el género, especie, y la dependencia Ahr de estas respuestas también fueron investigados. Género y la represión dependiente de las especies se observó dentro de este subconjunto de los genes. Por otra parte, la utilización de los ratones knock-out AhR, hemos sido capaces de determinar la regulación a la baja Ahr-dependiente de siete de los 11 genes. En conjunto, estos resultados ayudan a los esfuerzos para entender la multitud de efectos impuestos por TCDD y ligandos AhR en la expresión génica.
Noggin Se Requiere Para El Patrón Del Lóbulo Ductal Normal Y En Ciernes En La Próstata Del Ratón
Expresión mesenquimales de la PONTE LAS PILAS antagonista de BMP en el desarrollo de próstata juega un papel crítico en el desarrollo prenatal próstata ventral y se opone a BMP4 mediada por la inhibición de la proliferación celular durante el desarrollo postnatal ductal. El examen morfológico de los recién nacidos Noggin / - los fetos masculinos reveló anomalías genitourinarias como la criptorquidia, la separación incompleta del intestino posterior del seno urogenital (UGS), la ausencia de la almohadilla mesenquimal ventral, y una pérdida completa de la próstata ventral (VP) en ciernes. El examen del lóbulo específico de expresión de los marcadores en los E14 o Noggin-- UGS rescatados por el trasplante bajo la cápsula renal de un ratón desnudo masculino confirmó una pérdida completa de la determinación del vicepresidente. Efectos más modestos se observaron en los lóbulos, incluyendo disminución del número de brotes ductal en la próstata dorsal y lateral de los recién nacidos Noggin / - varones. BMP4 y BMP7 han demostrado inhibir ductal incipiente y por consecuencia negativa regulación de la proliferación de células epiteliales. Mostramos aquí que puede neutralizar la inhibición PONTE LAS PILAS! En ciernes por la BMP4 y rescata a la morfogénesis de ramificación de BMP4 expuestos UGS en la cultura de órganos y muestran que los efectos de la BMP4 y actividades PONTE LAS PILAS convergen en P63 + en las células epiteliales ubicadas en las nacientes consejos de los conductos. En conjunto, estos estudios muestran que el eje de la BMP-PONTE LAS PILAS regula los patrones de la próstata ventral, regula ductal en ciernes, y controla la proliferación de células epiteliales P63 + en los conductos de las nacientes del desarrollo de la próstata del ratón.
Señalización De Hedgehog En El Crecimiento De La Próstata Y La Hiperplasia Benigna De La Próstata
Hedgehog (Hh) de señalización ha sido reconocida por su papel en el patrón axial, mesenquimal epitelial de señalización inductiva, y la regulación del crecimiento durante el desarrollo fetal. En muchos tejidos embrionarios, Hh funciona como un estímulo proliferativo. Sonic hedgehog y el erizo indio se expresan ambos por el urotelio del feto esbozo de la próstata, donde regulan la proliferación y diferenciación celular y juegan un papel en la próstata ductal en ciernes. Considerando señalización Hh en ratón próstata disminuye durante la adolescencia y se mantiene a un nivel bajo en el adulto, robusto señalización Hh se encuentra comúnmente en la próstata humano adulto. La razón por la (s) de señalización Hh robusta en la próstata humana adulta y las acciones de señalización Hh en el crecimiento y la diferenciación en el adulto no son bien entendidos. Sin embargo, el aumento de señalización Hh se ha asociado con el cáncer de próstata y se ha demostrado para acelerar el crecimiento del cáncer de próstata. Estas observaciones sugieren que despertar inadecuado de esta señal de crecimiento y desarrollo puede desempeñar un papel fundamental en la neoplasia de próstata. Esta revisión examina el papel de la señalización Hh durante el crecimiento de la próstata temprano y en sus acciones durante el corolario de enfermedades de la próstata, incluyendo la hiperplasia benigna de próstata y cáncer de próstata. El uso de inhibidores de HH como una modalidad terapéutica para el tratamiento andrógeno-independiente de la enfermedad de la próstata también se discute.
Las Dioxinas Causan Agenesia Próstata Ventral Mediante La Interrupción De Patrón Dorsoventral En El Desarrollo De La Próstata Del Ratón
Ductal de próstata el desarrollo se inicia con andrógeno-dependientes en las señales del feto del seno urogenital (UGS) mesénquima que estimulan la formación de yemas en el epitelio prostático UGS. 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD, 5 mcg / kg dosis materna) inhibe la ventral y dorsolateral, pero en ciernes de próstata, no anterior. Hemos tratado de determinar en qué etapa de la especificación en ciernes, o el inicio, se inhibió. La formación de yemas ventral máximo de próstata se inhibe cuando la exposición se extendió TCDD E15.5-16.5 y la formación de yemas dorsolateral de próstata cuando se extendió E14.5-15.5. Debido a los brotes ventral y dorsolateral se especifican en estos momentos, la TCDD deterioro de la especificación de las yemas. La hipótesis de que la TCDD inhibe la especificación brote ventral formando una barrera continua del músculo liso entre el mesénquima y el epitelio de UGS en la región ventral UGS próstata, bloqueando mesenquimales-epiteliales de señalización, pero no hay barrera, fue encontrado. La hipótesis de que los receptores aumento de aril hidrocarburos (AHR), la señalización en UGS ventral y dorsolateral aumento de su sensibilidad a la TCDD, pero los niveles de AHR translocador nuclear (ARNT) de proteína, mRNA Ahr, y AHR-dependiente de la expresión génica no fueron superiores a los anteriores, donde UGS en ciernes no se vio afectada. Sin embargo, hemos identificado la expresión de la superposición de Ahr, ARNT y AHR inducida transcripciones en el mesénquima periprostática que íntimamente contactos epitelio de UGS, donde se especifican las yemas. Esto fue considerado un sitio putativo de TCDD de acción en los UGS para la inhibición de la especificación brote ventral y dorsolateral de próstata. Por lo tanto, la hiperactivación de la AHR señalización aparece para interrumpir el patrón dorsoventral de las UGS, la reprogramación en las yemas de próstata se especifican, y los lóbulos de la próstata se forman. Patrón interrumpido axial proporciona un nuevo paradigma para la comprensión de cómo la exposición en el útero TCDD provoca la agenesia de la próstata ventral y puede arrojar luz sobre cómo afecta el desarrollo de TCDD de otros órganos.
WNT5A Inhibe Selectivamente El Desarrollo Del Ratón Próstata Ventral
El establecimiento de los patrones de la próstata en ciernes ocurre temprano en la próstata, pero el desarrollo de los mecanismos responsables de este evento son poco conocidos. Hemos investigado el papel de WNT5A en los brotes de modelado de próstata a medida que surgen desde el seno del ratón fetal urogenital (UGS). Wnt5a ARNm se expresó en UGS mesénquima durante la brotación y fue focalmente hasta reguladas, como los brotes surgidos de la dorsolateral anterior, ventral y las regiones de UGS. Se observó la morfología anormal de UGS y los patrones de la próstata en el brote Wnt5a fetos masculinos nulos, demostró que el número de yemas de próstata se redujo en un recombinante de las proteínas de ratón WNT5A durante la morfogénesis de tipo salvaje UGS in vitro, y demostró que el desarrollo de la próstata ventral se vio afectada de forma selectiva cuando estos UGSs WNT5A tratados has sido injertado en cápsulas en los riñones de ratones inmunodeficientes y crecido durante 28 días. Además, un anticuerpo inhibidor WNT5A, añadido a los medios de cultivo de órganos UGS, rescatado prostática gemación de la inhibición por un inhibidor de brote ventral prostática, 2,3,8,7-tetraclorodibenzo-p-dioxina, y la morfogénesis restaurado próstata ventral cuando estos tejidos fueron injertados inmunodeficientes en cápsulas renales de ratón y se cultivaron durante 28 días. Estos resultados sugieren que WNT5A participa en la morfogénesis yema prostática, restringiendo el desarrollo del ratón próstata ventral.
Ácido Retinoico Induce La Formación De Yemas De Próstata
La formación de las yemas de próstata desde el seno urogenital (UGS) para iniciar el desarrollo de próstata requiere una acción localizada de varios factores morfogenéticos. Este informe revela todo-trans-retinoico (RA) es un potente inductor de la próstata del ratón en ciernes que se asocia con cambios recíprocos en la expresión de dos reguladores de brotación: Sonic hedgehog (Shh) y la proteína morfogenética ósea 4 (BMP4). La localización de la señalización de los retinoides y la expresión de la síntesis de la AR, el metabolismo y los genes de los receptores en las UGS en los días de embriones 14.5-17.5 implicar a la AR en el mecanismo de iniciación de brotes. En la cultura del órgano de UGS, AR aumentó la expresión de la próstata en ciernes, Shh aumento y disminución de la Bmp4. Prostática en ciernes fue estimulado en la ausencia de la AR mediante SHH recombinante, mediante el bloqueo de la señalización de BMP4 a PONTE LAS PILAS, o por el tratamiento combinado con SHH y PONTE LAS PILAS! En los medios de UGS cultivo de órganos. Estas observaciones sugieren que los cambios recíprocos en la señalización hedgehog y BMP de la AR puede regular la iniciación del capullo.
AHR De Señalización En El Crecimiento De La Próstata, La Morfogénesis Y La Enfermedad
La mayoría de las pruebas de receptor de aril hidrocarburos (AHR) de señalización en el crecimiento de la próstata, la morfogénesis y la enfermedad se deriva de la investigación con 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD) para activar farmacológicamente la RHA en diversas fases de desarrollo. Esta revisión describe los efectos de TCDD en la morfogénesis de la próstata y las interacciones entre el RAC y pone de relieve otras vías de señalización durante el crecimiento normal de la próstata y aberrante. A pesar de AHR modula la señalización de estrógeno y andrógeno de señalización en otros tejidos, la interferencia entre estos receptores de hormonas esteroides y la señalización de AHR no puede dar cuenta de las acciones de TCDD en la morfogénesis de la próstata. En cambio, la AHR parece actuar dentro de un marco de cooperación de las señales de desarrollo para regular el tiempo y los patrones de crecimiento de la próstata. Activación inapropiada de la AHR de señalización como consecuencia de la vida temprana exposición a la TCDD altera el equilibrio de estas señales, la morfogénesis afecta la próstata, y tiene un efecto impronta en el desarrollo de la próstata que predispone a la enfermedad de la próstata en la edad adulta. Mecanismos de señalización de AHR en el crecimiento de la próstata y la enfermedad están empezando a ser descifrados y estudios recientes han puesto de manifiesto sus interacciones con WNT5A, el ácido retinoico, el factor de crecimiento de fibroblastos 10, y el factor de crecimiento endotelial vascular vías de señalización.
Señalización De Estrógeno No Es Necesario Para Modelar Bud Prostática O Su Interrupción Por El 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina
Los estrógenos juegan un papel importante en el desarrollo de próstata, la salud y la enfermedad. Mientras que la señalización de los estrógenos es esencial para el desarrollo normal de la próstata después del parto, se sabe poco sobre su papel en los animales control prenatal. Hemos probado la hipótesis de que la señalización de los estrógenos es necesario para el patrón masculino brote de próstata. Patrones en ciernes fueron examinadas por microscopía electrónica de barrido del epitelio del seno urogenital de tipo salvaje ratones, los ratones que carecían del receptor de estrógeno (ER) alfa, ERbeta, o ambos, y los ratones de tipo salvaje expuestos a la ICI 182.780 antiestrógeno. Fenotipos en ciernes no detectable difieren entre cualquiera de estos grupos, lo que sugiere que la señalización de los estrógenos no es necesario para establecer el prototipo de modelo de la próstata en los varones en ciernes de control. Este hallazgo contribuye a nuestra comprensión de los efectos de la exposición a los estrógenos de bajo nivel en el desarrollo de próstata temprano. En la exposición in útero a la 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD), pueden alterar el patrón en el que los brotes de próstata formar y reducir su número. Por varias razones, incluyendo una observación previa de que los efectos inhibitorios de la TCDD en ciernes de próstata en ratas dependen en gran medida en el sexo de los fetos adyacentes, probamos la hipótesis de que la señalización de los estrógenos que se necesita para TCDD para interrumpir la próstata en ciernes. Sin embargo, en ciernes no detectable difieren entre los ratones de tipo salvaje, o ratones que carecen de ERalpha, ERbeta, o ambos, que fueron expuestos prenatalmente a la TCDD (5 mcg / kg en el día embrionario 13,5). Tampoco ICI 182.780 detectable afectar la respuesta a la TCDD. Estos resultados sugieren fuertemente que la señalización de los estrógenos no es necesario para TCDD para inhibir la próstata epitelial en ciernes.
Beta-catenina Promueve La Identidad Progenitor Respiratoria En El Ratón Del Intestino Anterior
El sistema respiratorio de mamíferos, que consiste en tanto tráquea y los pulmones, inicia desde el endodermo del intestino anterior. El programa molecular que instruye células endodérmicas a adoptar el destino respiratorio no se entiende completamente. Aquí nos muestran que la inactivación condicional de la beta-catenina (también llamado CTNNB1) en el endodermo del intestino anterior conduce a la ausencia tanto de la tráquea y los pulmones debido a una falla en el mantenimiento de la suerte respiratoria. En la expresión inversa, condicional de una forma activa de la beta-catenina conduce a la expansión de la Nkx2.1, un marcador temprano de la tráquea y los pulmones, en el endodermo adyacentes, incluyendo el epitelio del estómago. Los análisis de estos mutantes muestran que la pérdida o ganancia de la identidad de la tráquea progenitor / pulmonar está acompañada por una expansión o contracción de la identidad progenitora del esófago / estómago, respectivamente. Nuestros resultados revelan un papel a principios de la beta-catenina en el establecimiento de los progenitores en las vías respiratorias del ratón endodermo del intestino anterior.
2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina Inhibe El Factor De Crecimiento De Fibroblastos 10-inducida Por La Formación De Yemas De Próstata En El Seno Urogenital Ratón
2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD) dorsalizes el patrón de las yemas de próstata en desarrollo desde el seno urogenital (UGS) de los ratones macho del feto, causando algunos brotes que se forman en posiciones inadecuadas al tiempo que bloquea la formación de los demás. Esta acción teratogénica TCDD conducto de la próstata reduce significativamente el número principal y hace que la agenesia de la próstata ventral en los machos expuestos. El propósito de este estudio fue determinar si la inhibición del factor de crecimiento de fibroblastos 10 (FGF10) de señalización se mecánicamente vinculados a la próstata del ratón deterioro incipiente por TCDD. En el útero TCDD inducida por la exposición receptor de aril hidrocarburos que responde a citocromo P450 1B1 ARN mensajero (ARNm) en las regiones ventrales UGS en FGF10 y el crecimiento de fibroblastos receptor del factor de 2 (FGFR2) ARNm expresadas en ciernes y donde fue severamente inhibida por TCDD. Sin embargo, la exposición de TCDD no redujo FGF10 o FGFR2 la abundancia de ARNm en las UGS o modificar su distribución. La adición de proteína de FGF10 a los medios de UGS cultivo de órganos aumentó la abundancia de UGS las células epiteliales basales immunopositive de fosforilada regulada por señal extracelular quinasa (ERK). FGF10 también aumentó el número de 5-bromo-2'-desoxiuridina (BrdU) marcado con las células epiteliales de UGS y aumentó el número de brotes de próstata formados por UGS. La adición de TCDD a los medios de UGS cultivo de órganos no alteró FGF10 inducida por la activación de ERK en el epitelio basal, pero UGS impedido FGF10 inducida por la incorporación de BrdU y bloquearon FGF10 inducida por la formación de yemas de próstata. Estos resultados identifican las células basales del epitelio urogenital seno como el lugar clave de FGF10 acción durante el desarrollo fetal y el de próstata sugiere que los actos que puedan TCDD aguas abajo de FGFR2 y ERK para restringir la proliferación de células epiteliales de UGS y prevenir la formación de yemas de próstata.
Reglamento De La Androgénica Número Ventral Brote Epitelial Y Patrón De Seno Urogenital Ratón
El seno urogenital ventral (UGS) de los ratones macho control tiene dos filas de 3-4 yemas de próstata en el nacimiento, pero ¿cómo los andrógenos regulan brote ventral (VB) el número y el patrón es claro. VBS en ambos sexos que parecía ser una mezcla de las yemas de próstata y la uretra. Los ratones de UGSs tfm masculino y antiandrógenos (flutamida)-expuestos tuvieron pequeña VBS, lo que sugiere que el inicio de un VBS es andrógeno-independiente. Los ratones machos tfm son ampliamente consideradas como insensibles por completo de andrógenos sin embargo, sus UGSs eran 5-alfa-dihidrotestosterona (DHT) - capacidad de respuesta. VBS (6-8) fueron distribuidos generalmente bimodal en el eje izquierda-derecha, tanto en la señalización de hombres mínimos y normales de andrógenos. Sin embargo, las hembras de control y expuestos a la DHT tfm hombres tenían 13-14 VBS, cuya izquierda-derecha distribución fue bastante uniforme. Estos resultados sugieren que el número de VB y distribución responder bifásicamente como andrógenos señalización aumenta desde un mínimo, y que los andrógenos regular especificación yema. Agenesia completa de VB por el inhibidor selectivo de la incipiente 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD), la señalización necesaria alto en andrógenos.
Isoforma De Tiempo Distintos, La Dosis, Y La Castración Que Dependen De Alteraciones En La Expresión Que Contiene Flavina Monooxigenasa En El Hígado Del Ratón Después Del Tratamiento Del 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina
Flavin-monooxigenasa (FMO) de expresión en el hígado del ratón macho está alterada después (TCDD), 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina de la exposición o la castración. Debido a la TCDD se elimina lentamente del cuerpo, se examinaron las alteraciones hepáticas de ARNm de FMO para un máximo de 32 días siguientes al 10 o 64 microg / kg de TCDD la exposición por sonda oral en ratones macho C57BL/6J. Fmo2 ARNm se indujo significativamente menos 1, 4, y 8 días, mientras que FMO3 ARNm se indujo también a los 32 días respecto a los controles. FMO3 los niveles de mRNA mostró un aumento dependiente de la dosis a los 4, 8, y 32 días después de la exposición; FMO1, Fmo4 y Fmo5 ARNm no mostraron tendencias claras. Debido a la castración por sí sola también aumentó Fmo2, FMO3, y ARNm Fmo4 se examinaron los efectos combinados de la castración y el tratamiento de TCDD en la expresión de FMO. Una mayor que efecto aditivo se observó con Fmo2 y FMO3 la expresión del ARNm. Fmo2 mRNA mostró un aumento de 3 a 5 veces después de la castración o 10 mcg / kg de TCDD la exposición mediante una sonda nasogástrica, mientras que un aumento de aproximadamente 20 veces se ha observado entre el control con tratamiento simulado-castrado y castrado ratones tratados con TCDD. Del mismo modo, el tratamiento con 10 mcg / kg de TCDD sí sola el aumento FMO3 ARNm 130 - y 180 veces en los ratones castrados farsa y castrados en comparación con sus controles, respectivamente, mientras que, FMO3 ARNm se incrementó aproximadamente 1.900 veces entre el control con tratamiento simulado y castrado-TCDD ratones tratados. Un aumento en hepática FMO3 proteína en los ratones tratados con TCDD se observó por inmunotransferencia y ensayando metionina S-oxidasa actividad. En conjunto, estos resultados proporcionan evidencias para la isoforma de tiempo, distinto de la dosis, y la castración que dependen de los efectos de la TCDD en FMO expresión y sugieren la diafonía entre TCDD y las vías de transducción de señales de testosterona.
Sulfatasa 1 Es Un Inhibidor De La Morfogénesis Ductal Con La Expresión Presenta Dimorfismo Sexual En El Seno Urogenital
La glándula de la próstata se desarrolla a partir del seno urogenital en respuesta a los andrógenos circulantes. Los andrógenos iniciar y estimular la morfogénesis de ramificación en el seno urogenital a través de mediadores desconocidos. Proteoglicanos heparán sulfato son importantes moléculas extracelulares que secuestran muchos factores de crecimiento en la matriz extracelular y facilitar la señalización por algunos factores de crecimiento como parte de los complejos ternarios que incluyen factores de crecimiento, receptores, y las cadenas de heparan sulfato. Varias enzimas modificar la estructura química de sulfato de heparán para regular aún más su actividad. Un examen de estas enzimas para la expresión de dimorfismo sexual en el seno urogenital identificado sulfatasa 1 (Sulf1) como una enzima que se había reducido regulado en el seno urogenital masculino coincidente con el inicio de la morfogénesis de próstata. Down-regulación de Sulf1 fue acompañado por un aumento de las formas más altamente sulfatados de sulfato de heparano, y un aumento similar se observó en mujeres senos urogenitales tratados con testosterona. La inhibición de la sulfatación de novo de heparán sulfato bloqueado la morfogénesis de próstata, que apoya la importancia de la modificación del heparán sulfato para el desarrollo de la próstata. Para probar funcionalmente el papel específico de la próstata durante el desarrollo Sulf1, Sulf1 se expresó ectópica en el seno urogenital. Se inhibió parcialmente testosterona estimulada morfogénesis ductal, y se reduce la activación de los receptores del factor de crecimiento de fibroblastos, así como las ERK1 y ERK2 MAPKs. Estos datos identifican sulfatasa 1 como un inhibidor de la morfogénesis prostática ramificación y de señalización del factor de crecimiento que es el regulado como parte de la respuesta normal a la acción de andrógenos en el seno urogenital masculino.
Análisis Toxicogenómicos De La Exposición a La TCDD, PCB126 Y PCB153: Identificación De Biomarcadores Genómicos De La Exposición a Ligandos AhR
Dos bioensayos de cáncer al año realizadas por el Programa Nacional de Toxicología han demostrado que la exposición crónica a compuestos similares a las dioxinas (DLC) para dar lugar al desarrollo de ambas lesiones neoplásicas y no neoplásicas en el tejido hepático de ratas Sprague Dawley hembras. La mayoría, si no todos, de los efectos hepatotóxicos inducidos por DLC se cree que implica la unión y la activación del factor de transcripción, el receptor de aril hidrocarburos (AHR). Toxicogenómica se llevó a cabo para identificar las respuestas genómicas que pueden estar contribuyendo al desarrollo de hepatotoxicidad en ratas.
Los Posibles Mecanismos De Protección De Receptor De Aril Hidrocarburos (AHR) Señalización En La Hiperplasia Prostática Benigna
El receptor de aril hidrocarburos (AHR) es un ligando conservadas evolutivamente activa el factor de transcripción conocido por su papel en la mediación de las respuestas tóxicas similares a las dioxinas a los contaminantes ambientales. Sin embargo, AHR de señalización también ha surgido como un participante activo en los procesos de desarrollo normal y progresión de la enfermedad. En este artículo examinamos el papel de la AHR de señalización en el desarrollo de la próstata y los procesos de enfermedad, con un énfasis particular en la hiperplasia prostática benigna (HPB). La activación inapropiada AHR se ha asociado recientemente con un menor riesgo de la HPB sintomática en los seres humanos y se ha demostrado que perjudican el desarrollo de la próstata y perturbar la señalización endocrina en los roedores. Destacamos conocidas las respuestas fisiológicas a la activación de AHR en la próstata y otros tejidos y discutir los posibles mecanismos por los cuales pueden actuar en la próstata humana adulta para proteger contra la HPB sintomática.
Una Alta Resolución Molecular Atlas Del Tracto Urogenital Inferior Del Ratón Fetal
Estromal-epitelial interacciones en el tracto urogenital inferior (LUT) son esenciales para el desarrollo de las vesículas seminales y la próstata en los hombres, el desarrollo de la vagina y del útero en las mujeres, la uretra y el desarrollo en ambos sexos. Perfiles de expresión génica de la estroma y epitelio LUT aislada ha desentrañado los mecanismos de desarrollo LUT, pero estos estudios son confundidos por celular heterogénea y poco definida subpoblaciones contenida dentro de cada compartimento tisular. Se utilizó la hibridación in situ para sintetizar una alta resolución molecular atlas de 17 días de post-coito LUT de ratón fetal. Se identificaron los ARNm que las poblaciones celulares de marcas selectivas de la vesícula seminal, conducto eyaculador, la próstata, la uretra y la vagina, la subdivisión de estos tejidos en 16 estroma y epitelio sub 8 compartimentos. Estos resultados proporcionan una poderosa herramienta para el mapeo de TUS patrones de expresión génica, y también ponen de manifiesto previamente no sub-compartimientos que pueden desempeñar funciones mecánicas en el desarrollo de la LUT que antes desconocíamos.
Atlas De La Expresión Génica De Wnt Y R-espondina En El Tracto Inferior Del Ratón En Desarrollo Urogenital Masculino
Próstata desarrollo está influenciado por β-catenina de señalización, pero no está claro que catenina β-activadores están involucrados, donde se sintetizan, y si su abundancia de ARNm está influenciada por los andrógenos. Se identificaron WNT / β-catenina-β-galactosidasa de respuesta de actividad en el tracto urogenital inferior (LUT) de ratones transgénicos reportero, pero β-galactosidasa actividad era diferente entre las cuatro cepas de ratones que hemos examinado. Se utilizó la hibridación in situ para comparar los patrones de Wnts, r-spondins (Rspos, co-activadores de β-catenina de señalización), ARNm β-catenina-respuesta, y un receptor de andrógenos que responde a ARNm en el tipo salvaje del feto masculino, femenino del feto, y el LUT masculina neonatal. La mayoría de los ARNm de Wnt y la RSPO estuvieron presentes en el TUS durante el desarrollo de la próstata. Los patrones de expresión presentan dimorfismo sexual se observaron para WNT / β-catenina que responde a los genes, y por Wnt2b, Wnt4, Wnt7a, Wnt9b, Wnt10b, wnt11, Wnt16, y mRNAs Rspo3. Estos resultados ponen de manifiesto las diferencias sexuales en la señalización Wnt / β-catenina en LUT fetal, el apoyo a la idea de que esta vía puede ser directa o indirectamente, responden a los andrógenos durante el desarrollo de próstata ductal.
Patrones De Expresión Génica En El Cuerpo Lúteo Bovino Después De La Repetida Intrauterinos Infusiones De Bajas Dosis De Prostaglandina F2alpha
Luteólisis natural implica múltiples pulsos de prostaglandina F2alpha (PGF) liberadas por el útero no gestante. Este estudio investigó la expresión de 18 genes de 5 vías diferentes, después de múltiples dosis bajas de pulsos de PGF. Las vacas en el día 9 del ciclo estral recibieron cuatro infusiones intrauterinas con fosfato 0,25 ml de solución salina tamponada (PBS) o PGF (0,5 mg PGF en 0,25 ml de PBS) a intervalos de 6 h. Una biopsia lútea se recogió 30 minutos después de cada infusión de PBS o PGF. Había cuatro grupos de tratamiento: control (n = 5; 4 infusiones PBS), 4XPGF (n = 5; 4 infusiones PGF), 2XPGF-no-retrocedido (n = 5; PGF-PBS-PGF-PBS, una regresión después de los tratamientos ), y 2XPGF-retrocedido (n = 5; PGF-PBS-PGF-PBS; regresión después de los tratamientos). Como era de esperar, en primer pulso de PGF aumento de mRNA de los genes inmediatos tempranos Jun, Fos, NR4A1, y EGR1, pero, inesperadamente, mRNA también aumentaron para androgénica (STAR) y las vías angiogénicos (VEGF). En segundo pulso de la PGF induce genes tempranos inmediatos y los genes relacionados con la activación del sistema inmune (IL1B, FAS, FASLG, IL8). Sin embargo, el ARNm de VEGF y STAR se redujeron por la infusión PGF segundo. Después de pulsos PGF tercero y cuarto, un patrón claramente luteolítico de la expresión génica fue evidente con la inhibición de las vías esteroidogénicas y angiogénico y que, no hubo inducción de vías para la activación del sistema inmune y la producción de PGF. El patrón de la expresión génica inducida por PGF fue similar en CL no destinados a la luteólisis (2X-no-regresión) después del impulso de PGF primero pero era muy distinto después de la segunda pulso PGF. Así, aunque el pulso inicial PGF induce mRNA de muchos caminos, los impulsos de la segunda y después de PGF aparecer para establecer el patrón distinto de la expresión génica que resulta en luteólisis.
