생활 시 냅 스 소포 마커: Synaptotagmin GFP

Genesis (New York, N.Y. : 2000). Sep-Oct, 2002  |  Pubmed ID: 12324970

병아리 유전자에 대 한 낚시: 트리플 레이블 전체 마운트 형광 제자리 교 잡에 조류 배아에 동시와 중복 유전자 발현 검색

Developmental Dynamics : an Official Publication of the American Association of Anatomists. Mar, 2004  |  Pubmed ID: 14991720

멀티 컬러 전체 마운트 제자리 교 잡 배아 개발에 두 개 이상의 유전자의 공간 식 패턴을 비교 하는 것에 대 한 강력한 기술 이다. 단일 배아의 3 개의 다른 Mrnas의 검출을 허용 하는 제자리 교 잡 (물고기) 프로토콜에서 증폭된 트리플 레이블 전체 마운트 형광을 개발 했습니다. 우리의 프로토콜 사용 haptenylated riboprobes, 뒤에 양 고추냉이 과산화 효소와 tyramide 신호 증폭 (TSA) 형광 탐지 시스템을 활용 하는 anti-hapten 항 체를 사용 하 여 순차 항 체 검출에 동시 제자리 교 잡. 기존의 형광 현미경 confocal 형광 현미경 검사 법 단일 셀 해상도 허용 하 고 특정된 조직 내에서 특수 한 세포 유형 차별화 조직 수준에서 유전자 발현을 겹치는 영역을 식별 합니다. 이 프로토콜은 물고기를 단독으로 또는 기술 또는 녹색 형광 단백질 colocalization와 함께 자신의 제자리 교 잡 프로토콜을 채택 하는 것에 대 한 고체 시작 지점으로 사용에 종사 하는 연구자를 제공할 것입니다.

소는 필수적인 Drosophila Glutamate 수용 체 단위 중앙 Neuropil 및 신경 근육 학 교차로에서 작동 하는

The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. Mar, 2005  |  Pubmed ID: 15788777

Drosophila 앞으로 유전자 화면 돌연변이 결함이 있는 시 냅 스 개발에 대 한 나쁜 리셉션 (brec)를 식별합니다. Brec homozygous 돌연변이 배아는 치명적인, 마비, glutamatergic 신경 근육 학 교차로 (NMJ)에서 감지할 수 없는 시 냅 스 전송 표시. 유전 매핑 보완성 시험과 게놈 시퀀싱 쇼 brec 돌연변이 중단 이전에 새롭거나 ionotropic glutamate 수용 체 소 단위 라는 여기 "GluRIID." GluRIID CNS의 시 냅 스 neuropil 전체 광범위 하 게는 물론, NMJ의 postsynaptic 도메인에 표시 됩니다. Null brec 돌연변이 NMJ에서 모든 알려진된 glutamate 수용 체 소 단위는 immunocytochemistry에 의해 탐지 및 모든 기능 glutamate 수용 체 제거 됩니다. 따라서, 우리 GluRIID 어셈블리 또는 glutamate 수용 체는 NMJ에서의 안정화를 위해 필수적 이다는 결론. Null brec 돌연변이 체 배아에 모터 뉴런의 주기적인 흥분 성의 전류 주파수는 크게 감소, CNS 모터 패턴 활동 Gluriid에 의해 규제 됩니다 시연. 비록 시 냅 스 개발 및 분자 차별화 null 돌연변이에 교란 그렇지 않으면 표시 가능한 hypomorphic brec 돌연변이 극적으로 undergrown NMJs 애벌레의 개발 끝에 의해 표시 하 GluRIID 종속 중앙 패턴 활동 주변 시 냅 스 성장을 조절 하자. 이러한 연구는 glutamate 수용 체 어셈블리/주변 NMJ에서 안정화를 위해 필수적 이며 CNS에서 제대로 꽃무늬 모터 출력에 필요한 새로 확인된 된 glutamate 수용 체 소 단위로 Gluriid를 공개.

인간 ESCRT 및 ALIX 단백질의 Midbody 및 Cytokinesis 기능 단백질 상호 작용

The EMBO Journal. Oct, 2007  |  Pubmed ID: 17853893

TSG101 그리고 ALIX 작동 에이즈 신진 및 multivesicular 바디 (MVB)에서 기 형성 다른 Endosomal 정렬 복잡 한 필요 바이러스 vesicles의 출시에 필요한 전송 (ESCRT) 통로 요인이 상호 작용 하는 곳. Proteomic 분석 공개 ALIX와 TSG101/ESCRT-나도 cytokinesis, CEP55, CD2AP, ROCK1, 및 iqgap1를 포함 하 여에 관련 된 단백질의 시리즈 바인딩합니다. ALIX와 TSG101 centrosomes에 집중 하 고 중앙 CEP55 '경첩' 지역 및 TSG101 및 ALIX 내 GPP 기반 모티프 간의 직접적인 상호 작용을 통해 세포를 분할의 midbodies를 채용. ESCRT III와 VPS4 단백질도, 많은 ESCRT 통로 midbody에 localizes 나타내는 모집 합니다. ALIX와 TSG101/ESCRT-나의 고갈 세포에이 단백질에 대 한 요구 사항을 확인 하는 VPS4 overexpression와 마찬가지로 헬러 세포 cytokinesis의 절단 단계를 억제 한다. 또한, ALIX 점 돌연변이 블록 cep55와 CHMP4/ESCRT-III 바인딩 또한 억제 절단, 두 상호 작용 필수적입니다 나타내는. 이러한 실험 ESCRT 통로 HIV 신진, MVB 기 형성과 cytokinesis의 절단 단계 동안 유사 막 분열 행사를 용이 하 게 채용 될 수 있습니다 것이 좋습니다.

손상 호 세포 외 트랩 (NET) 형성: 인간의 신생아의 소설 선 천 적 면역 결핍

Blood. Jun, 2009  |  Pubmed ID: 19221037

호 중구는 고도로 전문화 된 타고 난 이펙터 셀 병원 체의 살인에 대 한 진화. 인간의 신생아 패 혈 증과 다른 심각한 감염 성 합병증에 기여 하 고 불완전 하 게 특징을 호 부전의 일반적인 multifactorial 증후군이 있다. 신생아의 항균 방어에 새로운 결함 식별: 호 세포 외 트랩 (그물)을 형성 하는 무 능력. 그물 격자 세포 외 DNA, chromatin 일 및 항균 단백질을 미생물을 죽이 세포 외에서 중재 하 고 신호를 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 인산 (NADPH) 산화 효소 생성 된 반응성 산소 종 (ROS)에 의해 독특한 죽음 통로 통해 폼을 생각 됩니다. 용어 및 preterm 유아에서 중 성구 양식 그물 건강 한 성인에 게 서 백혈구 염증 agonists 대조에 의해 활성화 될 때 실패를 찾았습니다. 그물 형성에서 결핍 세균 죽이 세포 외에 이전에 인식할 수 없는 적자에 의해 paralleled 있다. 로스의 로스는 필요 하지만 충분 한 신호 중 개인 하 고 신생아 백혈구에 연결 된 또는 다운스트림 경로 식별을 보여주는 사 NADPH 산화 효소와 성인 세포에서와 신생아 호 중구에 의해 그물 형성의 결함을 보완 하지 않았다. 장애인된 그물 형성 신생아 유아 감염에 걸리기는 일반적인 발달 면역 결핍의 중요 한 일 면 있을 수 있습니다.

임상적으로 관련 된 농도에서 심장 Myocytes에서 담배 연기의 수성 추출의 직접적인 독성 효과

Toxicology and Applied Pharmacology. Apr, 2009  |  Pubmed ID: 19371621

우리의 목표는 임상 관련 농도 담배 연기의 수성 추출 물 (CSE) 시뮬레이션 된 국 소 빈 혈 동안 심 실 myocytes에 직접적인 해로운 영향을 미칠 확인 메커니즘을 조사에 참여 했다.

인간의 ESCRT III와 VPS4 단백질이 Centrosome 및 스핀 들 유지 보수를 위해 필요 합니다

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Jul, 2010  |  Pubmed ID: 20616062

ESCRT 통로 포유류와 고세균에 cytokinesis의 최종 절단 단계에서 중재 하는 데 도움이 됩니다. 포유류, ALIX와 TSG101, ESCRT 통로의 두 초기 행동 단백질 phosphoprotein cep55와 직접 상호 작용을 통해 midbody를 모집 합니다. CEP55 셀 사이클의 대부분을 통해 centrosome에 있지만 다음 시작 cytokinesis, midbody ESCRT 통로 또한 centrosomal 링크를 할 수 있습니다 제안 마이그레이션합니다. 여기에, 우리는 체계적으로 유사 분열 및 세포 분열의 다른 단계에서 늦은 행동 포유류 ESCRT III와 VPS4 단백질에 대 한 요구 사항 분석. VPS4A, VPS4B, 또는 11 다른 인간의 ESCRT III (CHMP) 저해 단백질 절단 그 소모를 찾았습니다. 현저 하 게, 개별 ESCRT III와 VPS4 단백질의 고갈도 다 극 스핀 들 (대부분의 ESCRT-III/VPS4 단백질) monopolar 스핀 들 (CHMP2A 또는 CHMP5)를 생산 하 고 염색체 분리 및 핵 형태학에 결함을 일으키는 centrosome 및 스핀 들 극 번호 변경. VPS4 단백질 스핀 들 극 유사 분열 중에 그리고 midbodies cytokinesis,이 단백질이 두 사이트에서 직접 기능을 암시 하는 동안에 집중. 우리는 절단, 중 함으로써 세포 분열의 다른 단계를 통해 정렬 된 진행 하도록 한 다음 midbodies에서 그들의 유지 보수 또는 확산을 규제 하는 데는 centrosomes에서 ESCRT-III/VPS4 단백질 기능 그 결론.

재발을 극복 하 고 죄 사 함 기간 개선 Antitumor 면책 악용

Cancer Immunology, Immunotherapy : CII. Dec, 2011  |  Pubmed ID: 22198309

암 생존자는 종종 약물에 저항력이 클론 진화 및 종양 줄기 세포를 다시 채우기 재발. 우리의 전 임상 연구 약물 내성 클론 및 종양 줄기 세포를 포함 하는 환자 자신의 종양 세포를 죽이 체 외에서 효과적인 cytotoxic T 세포로 말기 암 환자의 림프 톨 관용 구경꾼 생체 조건에서 변환 될 수을 시연 했다. 우리 설계는 임상 시험으로 합리적인 단계 III/IV 위장 stromal 종양 (GIST)의 치료를 위해 imatinib peginterferon α-2b 결합 그 peginterferon α-2b 역할 antitumor 면역 촉진 위험 신호 종양 살해 위태롭게 공급 종양 관련 항 원 leukopenia, 따라서 적절 한 수지상 세포와 Th1 응답 향해 cytotoxic T-림프 구 분화에 대 한 허용 하지 않고 생체 조건 종양 유발 공차 imatinib 효과적인 하면서. 8 환자의 중간 분석 IFN-γ-producing-CD8(+),-CD4(+),-NK 세포 및 IFN-γ-producing-tumor-infiltrating-lymphocytes, 기억을 상당한 Th1 반응 및 NK 세포 활성화의 중요 한 유도 시연 했다. 3.6 년 메디아 후속 후 완료 응답 (CR) + 부분 응답 (홍보) = 100%, 전반적인 생존 = 100%, 한 환자는 죄 사 함에 관련이 없는 질병으로 사망, 6 7 evaluable 환자는 계속 홍보/CR에 (5 환자) 진행 없는 생존 (1 환자 PFS) 또는 단계 III imatinib monotherapy (CALGB150105/SWOGS0033)의 유전자 형 관련 PFS의 95% 신뢰 수준의 상한선을 초과매우 유망한 임상 결과 설명 합니다. 현재 재판은 더 큰 미래의 시험을 위한 준비에 닫힙니다. 우리 조합의 타겟된 치료 immunotherapy 안전 하 고 유도 상당한 Th1 반응 및 NK 세포 활성화 및 GIST, 따라서 다른 종양 종류에는 개발을 보증에 검증 된 매우 유망한 임상 효능 결론.

Glutathione 종속 Reductive 스트레스 미토 콘 드 리아 산화 및 세포 독성을 트리거합니다

The FASEB Journal : Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. Dec, 2011  |  Pubmed ID: 22202674

주된 nonprotein thiol의 효과 조사, glutathione (GSH) redox 항상성에 우리 두 손실 및 이득-의-기능 GSH 콘텐츠 체 외의 결과 확인 하기 위해 상호 보완적인 약리 및 유전 전략 고용. 우리 cytosol 감소 산화 민감한 녹색 형광 단백질 (roGFP) 조사 및 감소/산화 thioredoxins (Trxs)의 수준을 사용 하 여 미토 콘 드리 아에서 산화 환 원 이벤트를 모니터링 합니다. H(2)O(2) 나는 Trx reductase 억제제 1-클로-2, 4-dinitrobenzene (DNCB) 배아 쥐 심장 (H9c2) 셀에 8 개 또는 50 Mv를 더 glutathione redox 잠재적인, E(hc) (GSSG/2GSH)를 각각 산화를 불러 일으켰다. 대조적으로, H9c2 셀 또는 glutamate 시스테인 리가 (GCL) 촉매 소 단위 (GCLC) 또는 GCL 한정자 소 단위 (GCLM) 인간의 배아 신장 293 T (HEK293T) 셀, GSH의 3-에 4 배 증가 하 고 더 많은 7 또는 12 mV 발생에서 overexpression에 N-아 세 틸-l-시스테인 (NAC) 치료는 각각 E(hc), 감소. 마지막으로 redox 변화 미토 콘 드리 아 Rogfp와 trx2에 의해 표시 된 대로이 조건을 역설적으로 미토 콘 드 리아 산화 수준을 증가, NAC 치료 (EC(50) 4 m m) 또는 GCLC 또는 GCLM overexpression 증가 된 세포 독성을 전시 하 고 더 줄이는 주위에 민감성을 선생님의 감소 수준에서 달성 했다. 함께 찍은, 우리의 연구 결과 공개는 GSH 의존 reductive 스트레스 트리거하 미토 콘 드 리아 산화 및 세포 독성. 소설 메커니즘-장, 반장 님, Limphong, 피, Pieper, 제이, 리 우, 질문, Rodesch, C. K., 기독교인, E., 벤자민, I. J. Glutathione-종속 reductive 스트레스 트리거 미토 콘 드 리아 산화 및 세포 독성.

Dystrophinopathy 근육 표본에서 Dystrophin 면역 형광 검사의 정량화입니다

Neuropathology and Applied Neurobiology. Jan, 2012  |  Pubmed ID: 22243335

목표: Duchenne 근 위축 증 (DMD)은 일반적으로 관련 된 결 석 또는 거의 dystrophin 식 sarcolemmal 멤브레인에 결 석. 근육 생 검 섹션의 immunofluorescent 연구에서 dystrophin 신호는 매우 낮은 수준의 정량화 기술 도전을 선물 한다. 이 특히 원리 증명 약물 실험 설정에는 탐지 및 정량화 무슨 수 있습니다 식의 수준에 상당한 변화가 중요, 절대 dystrophin 수준을 낮게 유지 하는 경우에. 방법: spectrin에 대 한 co-stained 섹션에서 낮은 수준의 dystrophin 식의 믿을 하 고 반자동 immunofluorescent 부 량 수 있도록 이미지 분석 방법을 개발 했습니다. 우리 sarcolemmal 멤브레인을 아마도 나타내는 spectrin 마스크 내의 픽셀에만 dystrophin 신호 강도 계량 사용자 지정 Metamorph 스크립트를 사용 하 여 연속 영역 spectrin 마스크를 만들 수. 이 메서드를 사용 하 여, 우리 DMD, 베 커 근 위축 증 (BMD), 중간 근 위축 증 (IMD)과 일반적인 제어 조직 환자 시리즈에서 근육 생 검 조직을 분석 했다. 결과: 분석 여러 날에 대 한 직렬 섹션의 재현성, 및 정규화 된 dystrophin:spectrin 강도 비율 (일반적인 제어 조직의 백분율로 표시) 서쪽 오 점 분석에 의해 결정 된 대로 dystrophin 식 수준을 잘 연관 확인 한다. 결론:이 방법은 DMD 요법의 실험을 위한 biomarker 탐지의 강력 하 고 안정적인 방법을 제공합니다. © 2012 저자. Neuropathology 및 응용된 생물학 © 2012 영국 Neuropathological 사회.