Nef-vermittelte Suppression Von CD4 Erhöht Menschlichen Immunschwäche-Virus Typ 1-Replikation in Primären T-Lymphozyten

Journal of Virology. May, 2002  |  Pubmed ID: 11932428

Bildung Eines Human-Immunschwäche-Virus Typ 1 Kern Optimale Stabilität Entscheidend Ist Für Die Virale Replikation

Journal of Virology. Jun, 2002  |  Pubmed ID: 11991995

Demontage Des Humanen Immundefizienz-Virus Typ 1-Kerne in Vitro Zeigt Vereinigung Von Nef Mit Dem Subviralen Ribonukleoproteinkomplex

Journal of Virology. Apr, 2003  |  Pubmed ID: 12634398

Nef Hat Keinen Einfluss Auf Die Effizienz Des Menschlichen Immunschwäche-Virus Typ 1 Fusion Mit Zielzellen

Journal of Virology. Oct, 2003  |  Pubmed ID: 12970449

Klein-Molekül Hemmung Der Humanen Immundefizienz-Virus Typ 1-Replikation Durch Spezifische Ausrichtung Der Letzte Schritt Der Reifung Virion

Journal of Virology. Jan, 2004  |  Pubmed ID: 14694123

Bifunktionelle Anti-Human Immunodeficiency Virus Typ 1 Kleine Moleküle Mit Zwei Neuen Wirkmechanismen

Antimicrobial Agents and Chemotherapy. Feb, 2004  |  Pubmed ID: 14742233

Montage Eigenschaften Des Menschlichen Immunschwäche-Virus Typ 1 CA-Protein

Journal of Virology. Mar, 2004  |  Pubmed ID: 14963157

Kopplung Von Human Immunodeficiency Virus Typ 1 Fusion an Virion Reifung: Eine Neue Rolle Des Gp41 Zytoplasmatischen

Journal of Virology. Apr, 2004  |  Pubmed ID: 15016865

Nef Stimuliert Menschlichen Immunschwäche-Virus Typ 1-Replikation in Primären T-Zellen Durch Erhöhung Virion-assoziierten Gp120 Ebenen: Korezeptor-abhängige Anforderung Für Nef in Der Viralen Replikation

Journal of Virology. Jun, 2004  |  Pubmed ID: 15163722

Die Reihenfolge Der CA-SP1-Übergang Macht Die Unterschiedliche Empfindlichkeit Von HIV-1 Und SIV, Das Kleine Molekül Reifung-Inhibitor 3-O-{3 ', 3'-Dimethylsuccinyl}-Betulinsäure

Retrovirology. 2004  |  Pubmed ID: 15225375

Strukturelle Voraussetzungen Für Die Anerkennung Des Humanen Immundefizienz-Virus Typ 1 Kern Während Wirtsrestriktion in Nachtaffenauges Zellen

Journal of Virology. Jan, 2005  |  Pubmed ID: 15613315

Betulinsäurederivaten Beispielsweise HIV-1 Virostatika

Trends in Molecular Medicine. Jan, 2005  |  Pubmed ID: 15649820

Antimikrobielle Peptide Aus Amphibienhaut Stark Hemmen HIV-Infektion Und Übertragung Des Virus Von Dendritischen Zellen, T-Zellen

Journal of Virology. Sep, 2005  |  Pubmed ID: 16140737

Hemmung Der HIV-1-Reifung über Drug Association Mit Dem Viralen Gag-Protein in Unreifen HIV-1-Teilchen

The Journal of Biological Chemistry. Dec, 2005  |  Pubmed ID: 16251182

Das kleine Molekül 3-O-(3',3'-dimethylsuccinyl)-Betulinic Säure (DSB) dabei wirksam hemmt Human Immunodeficiency Virus, Typ 1 (HIV-1) Replikation durch proteolytische Spaltung die virale Gag-Protein an einem bestimmten Standort zu stören. Hier haben wir bewiesen, dass der antivirale Mechanismus die Vereinigung der DSB mit Gag bei einem 1:1-Stöchiometrie in unreifen HIV-1-Teilchen beinhaltet. Die Bindung wurde speziell, wie Mutationen im Gag, die Resistenz zu DSB bewirken Verbandes, gehemmt, die von DSB aber nicht von der inaktiven zusammengesetzte Betulinic Säure startete sein könnte. Die Ergänzung der DSB gereinigten unreife Kerne virale hemmte die Spaltung der Gag an der CA-SP1-Kreuzung in vitro so reproduzieren die Wirkung des Medikaments während der Reifung von HIV-1-Teilchen vorhanden. Auf der Grundlage dieser Ergebnisse schlagen wir ein Modell, in dem ein Trimer des DSB mit der CA-SP1-Kreuzung der angrenzenden Untereinheiten innerhalb der Gag-Polymer verknüpft. Das Modell könnte die Fähigkeit sehr ähnliche Verbindungen, die gezielt gegen die scheinbar unzusammenhängenden Schritte des HIV-1-Reifung und Virusangriffe erklären.

Reifung Der Viralen Kern Verbessert Die Fusion Von HIV-1-Teilchen Mit Primären Menschlichen T-Zellen Und Makrophagen Monozyte Abgeleitet

Virology. Mar, 2006  |  Pubmed ID: 16375941

HIV-1 Infektion erfordert die Fusion von viralen und zellulären Membranen in einer Reaktion katalysiert durch die virale Umschlag Proteine gp120 und gp41. Vor kurzem berichteten wir, dass effiziente HIV-1 Partikels Fusion mit Zielzellen Reifung der viralen Kern durch eine Aktivität der gp41 zytoplasmatischen Domäne verknüpft ist. Hier zeigen wir, dass die Reifung die Verschmelzung verschiedener rekombinante Viren mit Primär- und Labor-angepasste Env-Proteine mit primären humanen CD4 + T-Zellen erhöht. Insgesamt war die HIV-1 Fusion abhängiger von Reifung auf Viren mit 4-fach-Tropic Umschlag Proteine als R5-Tropic-Viren. Fusion von HIV-1 mit Monozyte abgeleiteten Makrophagen war auch Partikel Reifung abhängig. Wir schließen, dass die Fähigkeit zu paar Fusion Partikel Reifung ein gemeinsames Merkmal der HIV-1-Env-Proteine ist und eine wichtige während der HIV-1-Replikation in-vivo Rolle kann.

Eine Mutation in Der Humanen Immundefizienz-Virus Typ 1-Gag-Protein Destabilisiert Die Interaktion Der Umschlag Protein Untereinheiten Gp120 Und Gp41

Journal of Virology. Mar, 2006  |  Pubmed ID: 16474147

Das Gag-Protein des humanen Immundefizienz-Virustyp 1 (HIV-1) ordnet die Umschlag-Proteinkomplex bei der Virus-Montage. Die verfügbaren Daten zeigen, dass diese Interaktion Anerkennung der gp41 zytoplasmatischen Schwanz (CT) geht durch die Matrix-Protein (MA)-Region des Pr55(Gag). Hier zeigen wir die Substitution von Asp für Leu an Position 49 (L49D) in MA führt eine bestimmte Reduzierung in Partikel-assoziierte gp120 ohne Auswirkungen auf die Ebenen von gp41. Mutierte Virionen konnten in einem Takt Infektiosität trotz eines relativ geringen Mangels Fusion mit Zielzellen deutlich reduziert werden. Studien mit HIV-1-Teilchen mit verminderter Gehalt an Umschlag Proteine vorgeschlagen, dass die L49D-Mutation auch einen postentry Schritt in Infektion hemmt. Abschneiden des gp41 Schwanz oder Pseudotypisierung durch vesikuläre Stomatitis Virus Glykoprotein, wiederhergestellt die Fusion und die Infektiosität des L49D mutierten Virionen in Wildtyp Ebenen. Abschneiden von gp41 auch zu entsprechenden Ebenen von gp120 auf Partikel mit und ohne die MA-Mutation und verbessert die Replikation des L49D mutierten Virus in T-Zellen. Die gestörte Fusion und Infektiosität L49D mutant Teilchen waren auch eine einzelne Punkt-Mutation im gp41 CT ergänzt, die das Tyrosin-haltigen endocytic Motiv gestört. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass eine veränderte Interaktion zwischen der MA-Domäne der Gag und der zytoplasmatischen gp41-Schwanz zu Dissoziation von gp120 von gp41 HIV-1 Partikels Montage, wodurch sich gestörte Fusion und Infektiosität führt.

Nachweis Einer Funktionellen Verbindung Zwischen Ungestrichen Von Human Immunodeficiency Virus Geben 1 Ader Und Nukleare Einfuhr Die Virale Preintegration Komplex

Journal of Virology. Apr, 2006  |  Pubmed ID: 16571788

Human-Immunodeficiency-Virustyp 1 (HIV-1) Partikel beginnen ihre Replikation bei Verschmelzung mit der Plasmamembran Zielzellen und Freisetzung der viralen Kern zu Host Zelle Zytoplasma. Bald danach trennt das virale Kapsid, ein Polymer der CA-Protein besteht, aus der komplexen internen Ribonucleoprotein. Während dieser Abbau-Prozess weitgehend unverstanden bleibt, gibt die verfügbare Erkenntnisse, dass richtige ungestrichen des Kerns ein wichtiger Schritt in der Infektion ist. Mängel am häufigsten ungestrichen führen zu einem Ausfall des Virus reverse Transkription, aufgrund einer Unfähigkeit zu bilden eine funktionelle virale preintegration Komplex (PIC) zu unterziehen. In einer früheren Studie berichteten wir, dass eine HIV-1-Mutant mit zwei Auswechslungen in CA (Q63A/67A) ungewöhnlich war, dass es schlecht infektiöse noch normale Niveaus der viralen DNA synthetisiert wurde. Hier berichten wir, dass dieser Mutant für nukleare Eintrag beeinträchtigt wird. Quantitative Analyse der viralen DNA-Synthese aus infizierten Zellen durch das südliche Beflecken und Echtzeit-PCR ergab, dass die Q63A/Q67A-Mutant in der Synthese von einem langen Terminal wiederholen (1-LTR) und 2-LTR-Kreisen beeinträchtigt wird. Isolierung von PICs von akut infizierten Zellen ergab, dass die Q63A/Q67A-Mutant Protein-DNA-komplexen ähnlich dem Wildtyp in Ertrag und die gesamte Komposition produziert, aber diese Bilder enthalten erhöhte Konzentrationen von CA und waren wertgemindert für Integration in-vitro. Diese Ergebnisse zeigen, dass Mutationen in CA können schädliche Auswirkungen auf nukleare Ausrichtung und Integration, darauf hindeutet, dass diese Schritte im Lebenszyklus von HIV-1 richtige ungestrichen des viralen Kerns abhängig sind.

Sättigung Des TRIM5 Alpha-vermittelte Beschränkung Von HIV-1-Infektion Hängt Von Der Stabilität Der Eingehenden Virale Kapsid

Virology. Jul, 2006  |  Pubmed ID: 16624363

HIV-1-Infektion ist in einem Nettozahlern Stadium einige simian Zelllinien durch artspezifische Varianten des TRIM5 Alpha beschränkt. Einschränkung zielt auf das virale Kapsidprotein (CA) und abgeschwächte reverse Transkription führt. TRIM5 alpha Einschränkung kann durch die Zugabe von infektiösen Virus-ähnliche Partikel (VLPs), wodurch Zellen permissive Infektion durch ein Virus HIV-1-Reporter gehemmt werden. Durch den Einsatz von HIV-1 VLPs mit Gag Spaltung Website Auswechslungen und Punktmutationen in CA, die die Stabilität des viralen Kapsid verändern, zeigen wir, dass Sättigung des TRIM5 alpha Einschränkung hängt von der Stabilität des das Kapsid in den eingehenden VLPs. Unterschiede in der Forderung nach Spaltung der bestimmte Sites in Gag zwischen unterschiedlichen afrikanischen Green Monkey-Zelllinien beobachtet wurden. Die Ergebnisse empfehlen dringend, dass der Mechanismus der HIV-1-Beschränkung von TRIM5 Alpha Beizug der viralen Kapsid mit der Einschränkung-Faktor vor Abschluss der ungestrichen beinhaltet.

Human-Immunodeficiency-Virus Typ 1 Widerstand Gegen Die Niedermolekularer Reifung Inhibitor 3-O-(3',3'-dimethylsuccinyl)-Betulinic Säure Wird Durch Eine Vielzahl Von Einzelnen Aminosäure Ersetzungen Am Standort Dekolleté CA-SP1 Gag Verliehen

Journal of Virology. Dec, 2006  |  Pubmed ID: 17035324

Die zusammengesetzte 3-O-(3',3'-dimethylsuccinyl)-Betulinic Säure (DSB) dabei wirksam und gezielt hemmt humanen Immundefizienz-Virustyp 1 (HIV-1) Replikation verzögert die Spaltung der CA-SP1-Kreuzung in Gag, zur beeinträchtigt Reifung der viralen Kern. In dieser Studie untersuchten wir HIV-1 Resistenz gegen DSB durch die Analyse von HIV-1-Mutanten, die Codierung einer Vielzahl von individuellen Aminosäure-Ersetzungen in der CA-SP1-Dekolleté-Website. Drei der die Auswechslungen waren tödlich für HIV-1-Replikation wegen nachteilige Auswirkungen für die Partikel-Versammlung. Die übrigen Mutanten stellte eine Reihe von Replikation Effizienz; Allerdings konnte jeder Mutant replizieren in Anwesenheit von Konzentrationen der DSB, die Wild-Typ HIV-1 effektiv gehemmt. Mutationen, die eine Resistenz zu DSB auch führte zu gestörter Bindung der Verbindung zu unreifen Virionen in HIV-1 und Verlust der DSB-vermittelte Hemmung der Spaltung von Gag. Überraschenderweise beibehalten zwei der DSB-resistenten Mutanten eine fortgeschrittene Fähigkeit, die Verbindung, die darauf hindeutet, dass die Bindung des DSB zu unreif HIV-1-Teilchen möglicherweise nicht ausreichend für antivirale Aktivität zu binden. Insgesamt zeigen unsere Ergebnisse, dass Gag Aminosäuren L363 und A364 entscheidend für die Hemmung der HIV-1-Replikation von DSB sind und schlagen vor, daß diese Rückstände wichtige Kontakte mit der Droge in Zusammenhang mit der Montage HIV-1-Partikel bilden. Diese Ergebnisse haben Auswirkungen auf die Gestaltung und Screening für neuartige Hemmer der HIV-1-Reifung.

Viralen Und Zellulären Faktoren, Die HIV-1 Ungestrichen Zu Regulieren

Current Opinion in HIV and AIDS. May, 2006  |  Pubmed ID: 19372808

Die unmittelbaren Ereignisse in HIV-1 Infektion infolge Fusion von HIV-1-Teilchen mit den Zielzellen sind schlecht definiert und schwer zu studieren. Es wird im allgemeinen gedacht, dass das virale Kapsid einen Demontage-Prozess durchläuft, der weitgehend als ungestrichen bezeichnet hat. Die jüngste Identifizierung artspezifische Host-Beschränkung-Faktoren, die das virale Kapsid Ziel hat neues Interesse an retrovirale ungestrichen ausgelöst.

Selektive Beschränkung Der Nef-Genen Humanen Immundefizienz-Virustyp 1 Durch Einen Proteasom-abhängige Mechanismus

Journal of Virology. Feb, 2007  |  Pubmed ID: 17108041

Das Nef-Protein erhöht die humanen Immundefizienz-Virustyp 1 (HIV-1) Infektiosität durch die Erleichterung eines frühen Postentry Schritt im Lebenszyklus Virus. Wir berichten hier, das MG132 oder Lactacystin, jeder ein spezifischer Hemmer zelluläre Proteasom-Aktivität, bevorzugt verbessert die zelluläre Permissivität für Nef-Genen im Vergleich zu Wildtyp HIV-1 Infektion. Pseudotypisierung durch das Glykoprotein des Virus der vesikulären Stomatitis gerendert Nef-Genen HIV-1-Teilchen minimal schneller auf die Verbesserung Auswirkungen der Proteasom-Hemmer. Diese Ergebnisse legen nahe, dass Nef die Infektiosität von HIV-1-Teilchen verbessert durch das verringern ihre Anfälligkeit zu Proteasomal Verringerung der Zielzellen.

Eine Mutation in α-Helix 3 Ca Rendert Humanen Immundefizienz-Virus Typ 1 Cyclosporin A, Beständig Und Abhängige: Rettung Durch Eine Zweite-Website-Substitution in Einer Distalen Region Von CA

Journal of Virology. Apr, 2007  |  Pubmed ID: 17267487

Die Replikation von vielen Isolate des humanen Immundefizienz-Virustyp 1 (HIV-1) wird durch die Bindung des der Host Zelle Protein Cyclophilin A (CypA) an das virale Kapsidprotein (CA) verbessert. Die immunsuppressive Medikament Cyclosporin A (CsA) und seine nonimmunosuppressive Analoga binden mit hoher Affinität zu CypA und HIV-1-Replikation zu hemmen. Frühere Studien haben festgestellt, dass zwei Mutationen, A92E und G94D, in der Schleife CypA-Bindung der Zertifizierungsstelle, die die Fähigkeit des HIV-1, in Anwesenheit von CsA replizieren zu verleihen. Interessanterweise stimuliert CsA die Replikation von HIV-1-Mutanten, die entweder die A92E oder G94D-Substitution bei einigen menschlichen Zelllinien enthalten. Hier zeigen wir, dass die Substitution von Alanin für Threonin an Position 54 ca (T54A) auch HIV-1 Resistenz gegenüber und der Abhängigkeit von CsA verleiht. Wie die zuvor identifizierten CsA-resistenten/abhängige Mutanten wurde Infektion von der T54A Mutant durch CsA Ziel zellspezifische Weise stimuliert. RNA Interferenz-vermittelte Reduktion CypA Ausdrucks verbessert die Permissivität der HeLa-Zellen auf eine Infektion durch den T54A-Mutanten. Eine Schutzbeschaltung Mutation, Codierung eine Substitution von Threonin für Alanin an Position 105 ca (A105T), wurde durch Anpassung des T54A mutierten Virus für Wachstum in CEM Zellen identifiziert. A105T rettete gestörter Single-Cycle Infektiosität und Replikation Mängel der T54A und A92E Mutanten. Diese Ergebnisse zeigen, dass CA Determinanten außerhalb der Schleife CypA-Bindung die Abhängigkeit der HIV-1 Infektion auf CypA modulieren können.

Reifung-abhängige Humanen Immundefizienz-Virus Typ 1 Partikel Fusion Erfordert Eine Karboxyl--Terminal-Region Der Zytoplasmatischen Schwanz Gp41

Journal of Virology. Sep, 2007  |  Pubmed ID: 17609279

Lentiviruses, einschließlich humanen Immundefizienz-Virustyp 1 (HIV-1), kodieren normalerweise Verschmelzung Glykoproteine mit langen zytoplasmatischen Schwänze (CTs). Wir berichteten bereits, dass unreife HIV-1-Teilchen durch ein System eingeführt werden die 152-Aminosäure-CT von gp41 Fusion mit Zielzellen gehemmt sind. Die gp41-CT wurde auch gezeigt, vermitteln die reinigungsresistente Vereinigung der HIV-1-Umschlag-Glykoprotein Komplex mit unreifen HIV-1-Teilchen, darauf hinweist, dass die gp41-CT eine stabile Komplexe mit Gag in unreifen Virionen bildet. In der vorliegenden Studie analysierten wir die Auswirkungen des progressiven Kürzungen und Punktmutationen im gp41 CT auf die Fusion von Reifen und unreifen HIV-1-Teilchen mit Zielzellen. Wir bestimmt auch die Auswirkungen dieser Mutationen auf der reinigungsresistente Association of gp41 mit unreifen HIV-1-Teilchen. Entfernung von der C-terminalen 28 Aminosäuren entlastet die Abhängigkeit der HIV-1 Fusion auf Reifung. Ein mutant Env-Protein fehlt dieser Region blieb jedoch verbunden mit unreifen HIV-1-Teilchen mit nichtionogene Waschmittel behandelt. Teilhabende Analyse der C-terminalen Region gp41 ergab ferner zwei spezifische Sequenzen für die Reifung-abhängige HIV-1 Fusion benötigt. Zusammenfassend zeigen unsere Ergebnisse, dass das extreme Carboxyl-Terminus von gp41 eine Schlüsselrolle spielt in der Kopplung von HIV-1 Fusion Kompetenz Virion Reifung. Sie zeigen weiter, dass die stabile Verbindung von gp41 mit Gag in unreifen Virionen zur Hemmung von unreifen HIV-1 Partikels Fusion nicht ausreicht.

Analyse Der Menschlichen Zelle Heterokaryons Zeigt, Dass Die Ziel-Zelle-Beschränkung Der Cyclosporin-resistenten Humanen Immundefizienz-Virus Typ 1 Mutanten Genetisch Dominant Ist

Journal of Virology. Nov, 2007  |  Pubmed ID: 17715216

Die Host Zelle Protein Cyclophilin A (CypA) bindet an CA des humanen Immundefizienz-Virustyp 1 (HIV-1) und fördert HIV-1 Infektion der Wirtszelle. Störung der Interaktion CypA-CA, entweder durch Mutation des Rückstands CA G89 oder P90 oder mit der immunsuppressive Medikament Cyclosporin (CsA), verringert HIV-1-Infektion. Zwei CA Mutanten, A92E und G94D, wurden zuvor durch Auswahl für das Wachstum von Wildtyp HIV-1 in den Kulturen der CD4(+) HeLa Zellkulturen mit CsA identifiziert. Interessanterweise wird die Infektion von einigen Zelllinien durch diese Mutanten in Anwesenheit von CsA, verbessert, während in anderen Zelllinien diese Mutanten durch das Medikament minimal betroffen sind. Über diese Zelle-abhängige-Phänotyp der A92E und G94D-Mutanten ist wenig bekannt, außer dass sie nicht Ausdruck des Faktors "Host" TRIM5alpha abhängig ist. Hier zeigen wir, dass die Infektion durch die A92E und G94D-Mutanten Nettozahlern frühzeitig im Lebenszyklus von HIV-1 beschränkt ist. Analyse der Heterokaryons zwischen CsA-abhängige HeLa-P4 und CsA-unabhängige 293T Zellen angedeutet, dass die CsA-abhängige-Infektion durch A92E und G94D-Mutanten durch eine dominante zelluläre Beschränkung. Wir zeigen auch, dass neben der CsA Zielzellen Infektion von Wildtyp HIV-1 vor der Rückübertragung hemmt. Diese Ergebnisse unterstützen die Existenz einer zellspezifische zelluläre Faktor Mensch fähig Einschränkung des HIV-1 bei einer frühen Nettozahlern Schritt durch einen CypA-abhängige Mechanismus.

Flucht Aus Der Dominanten HLA-B27 Eingeschränkten Zytotoxischen T-Lymphozyten Antwort in Gag Ist Verbunden Mit Einem Dramatischen Rückgang Der Humanen Immundefizienz-Virus Typ 1-Replikation

Journal of Virology. Nov, 2007  |  Pubmed ID: 17804494

Human Leukocyte Antigen (HLA) - B27 - positive, dass Themen selten in ihrer Fähigkeit, die Infektion mit dem humanen Immundefizienz-Virustyp 1 (HIV-1) zu steuern sind. Jedoch wurde spät viral Escape aus einer eng gerichtete immundominante Gag-spezifische CD8(+) T-Lymphozyten (CTL) Antwort bis zum Fortschreiten der AIDS in dieser Personen verbunden. Ermittlung des Mechanismus des Steuerelements immunvermittelte vorsehen, dass kritische Einblicke in die Entwicklung von HIV-1-Impfstoffen. Hier zeigen wir, dass die CTL-Escape-Mutation R (264) K in der HLA-B27 eingeschränkten KK10-Epitop in das Kapsid eines erheblichen Mangels Virusreplikation in-vitro-geführt. Die R (264) K-Variante war beeinträchtigt, späten reverse Transkription-Produkte, die angibt, dass die Replikation blockiert wurde, bei einem postentry Schritt zu generieren. Insbesondere wurde die R (264) K-Mutation in-vivo mit der Entwicklung der seltenen sekundären Mutation, S (173) A, die Virusreplikation in-vitro wiederhergestellt assoziiert. Darüber hinaus wurde die Infektiosität der Variante R (264) K durch den Zusatz von Cyclosporin A oder Infektion von einer Cyclophilin A-defizienten Zelllinie gerettet. Diese Daten zeigen eine schwere Funktionsstörung verhängt die R (264) K-Mutation während erster Schritt diese virale Replikation, die wahrscheinlich aufgrund der Unfähigkeit dieser Variante, in Anwesenheit von normalen Niveau von Cyclophilin A. replizieren Wir schließen, dass die Auswirkungen der R (264) K-Substitution auf Kapsid Struktur viral Escape schränkt und langfristige Wartung der dominanten CTL-Antwort gegen B27-KK10 ermöglicht, bietet eine Erklärung für die schützende Wirkung des HLA-B27 bei HIV-Infektion.

Analyse Von HIV-1 - X 4-Fusion Mit Unreifen Dendritischen Zellen Identifiziert Eine Bestimmte Einschränkung, Die Unabhängig Von CXCR4-Ebenen

The Journal of Investigative Dermatology. Feb, 2007  |  Pubmed ID: 16917492

Unreife dendritische Zellen (iDCs) sind wahrscheinlich zu den ersten Zielen von HIV-Infektionen während der sexuellen Übertragung. Wir analysieren, ob die relativ ineffizient Virusreplikation in iDCs spezifische Beschränkungen während des viralen Lebenszyklus zugeschrieben werden konnten. Mit iDCs von einem Gremium der Spender, machten wir uns um ihre Kapazität zur Unterstützung von Infektion und die Ausbreitung von X 4 - und R5-Tropic-Viren zu vergleichen. Wir spielten auch quantitative Durchflusszytometrie zur Bestimmung von relevanten Zelloberfläche CD4 und HIV-1-Co-receptors. Obwohl iDCs vergleichbarem funktionale CXC-Chemokin-Rezeptor 4 (CXCR4) und CC-Chemokin-Rezeptor 5 (CCR5) an der Zelloberfläche Ausdrücken, sie sind 100 und 1,000 8-fach weniger anfällig für Infektionen durch das X 4 - und R5-Tropic HIV-1-Stämme. Erhöhen der Oberfläche Ausdruck von CXCR4 durch Transduktion mit Lentiviralen Vektoren führte nicht zu erhöhten Replikation der X 4-Tropic-Sorten. Fusion von HIV - X 4 mit iDCs war deutlich weniger effizient im Vergleich zu HIV-R5. Wir schließen, dass ein Env-spezifische Block früh im viralen Zyklus in iDCs tätig ist. Diese Einschränkung kann zum Ausschluss der X 4-Tropic-Stämme während der HIV-1-Übertragung eine Rolle spielen.

NEF Fördert HIV-1-Infektiosität Durch Vereinigung Mit Der Virus-Montage Komplexer

Virology. Apr, 2008  |  Pubmed ID: 18191978

Das HIV-1-Zubehör-Protein Nef verbessert Virus Infektiosität durch einen frühen Nettozahlern Schritt einer Infektion zu erleichtern. NEF fungiert in der Virus-Produzent-Zelle, was zu einer positiven Änderung HIV-1-Teilchen. NEF selbst firmiert in HIV-1-Teilchen, wo es während Virion Reifung durch die virale Protease zerspaltet wird. Um die Rolle des Virion-assoziierte Nef in HIV-1 Infektion Fühler, erzielten wir ein Fusionsprotein bestehend aus der Host-Protein-Cyclophilin, mit denen das amino-Terminus von Nef ein (CypA) verknüpft. Das resultierende CypA-Nef-Protein verbessert die Infektiosität des Nef-Genen HIV-1-Teilchen und speziell in der Virionen über Assoziation mit Gag bei der Montage der Partikel aufgenommen wurde. Pharmakologische oder genetische Hemmung der CypA-Nef Bindung an Gag verhindert Aufnahme CypA-Nef in Virionen und gehemmter Infektiosität-Verbesserung. Unsere Ergebnisse zeigen, dass Infektiosität Verbesserung von Nef erfordert seine Verknüpfung mit einer Komponente der Montage HIV-1 Partikels.

Proteasomal Verschlechterung Des TRIM5alpha Bei Retroviren Beschränkung

PLoS Pathogens. May, 2008  |  Pubmed ID: 18497858

Das Host-Protein TRIM5alpha hemmt retroviral Infektion post-penetration frühzeitig durch gezielte das eingehende virale Kapsid. Während der genaue Mechanismus der Einschränkung unklar bleibt, haben jüngste Studien die Aktivität der zellulären Proteasomes in die Beschränkung der Retroviren reverse Transkription eingeführten TRIM5alpha verwickelt. Hier zeigen wir, dass TRIM5alpha auf Begegnung eine Beschränkung empfängliche retrovirale Core rasch abgebaut. Impfung von TRIM5alpha Ausdruck menschlichen 293T Zellen mit einem saturating HIV-1-Teilchen führte zu beschleunigten Abbau von HIV-1-restriktive Rhesusaffe TRIM5alpha Protein, aber nicht das nicht restriktive Protein in der menschlichen TRIM5alpha. Gefährdung der Zellen durch HIV-1 destabilisiert auch den Eule Affen Beschränkung Faktor TRIMCyp; Dies wurde durch Zusatz von der Hemmer-Cyclosporin A verhindert und wurde nicht mit einer HIV-1-Virus mit eine Mutation in das Kapsidprotein, das Einschränkung entlastet beobachtet, von TRIMCyp IVHIV. Menschlichen TRIM5alpha war ebenso schnell bei der Begegnung von der Beschränkung-Sensitive N-Tropic murine Leukämievirus (N-MLV) aber nicht die uneingeschränkte B-MLV degradiert. Vorbehandlung der Zellen mit Proteasom-Hemmer verhindern den HIV-1-induzierter Verlust der Rhesusaffe TRIM5alpha und TRIMCyp Proteine. Wir stellten außerdem Verschlechterung der endogenen TRIM5alpha in Rhesus-Makaken-Zellen, die nach HIV-1-Infektion. Wir schließen, dass Engagement eine Einschränkung-Sensitive Retroviren-Core TRIM5alpha Abbau durch einen Proteasom-abhängige Mechanismus führt.

Biochemische Charakterisierung Eines Rekombinanten TRIM5alpha-Proteins, Das Schränkt Humanen Immundefizienz-Virus Typ 1-Replikation

Journal of Virology. Dec, 2008  |  Pubmed ID: 18799573

Der Rhesus-Affen systeminterne Immunität Faktor TRIM5alpha(rh) erkennt eingehende Capsids aus einer Vielzahl von Retroviren, einschließlich humanen Immundefizienz-Virus Typ 1 (HIV-1) und equine infektiöse Anämie-Virus (EIAV) und hemmt die Anhäufung von virale reverse Transkriptionen. Jedoch direkte Interaktionen zwischen TRIM5alpha Proteinen einschränken und Retroviren Capsids sind nicht vorher erprobt mit reinen rekombinante Proteine. Strukturelle und mechanistische Studien der Retroviren Einschränkung zu erleichtern, haben wir die Methoden zum Ausdruck und reinigende eine aktive Chimärer TRIM5alpha(rh) Protein mit der RING-Domäne vom damit verbundenen menschlichen TRIM21 Protein entwickelt. Dieses rekombinante Protein TRIM5-21R wurde in SF-21 Insektenzellen ausgedrückt und durch drei chromatographischen Schritten gereinigt. Zwei getrennte TRIM5-21R Arten wurden gereinigt und Monomere und Dimere, entsprechen gezeigt, wie durch analytische Ultrazentrifugation analysiert. Chemisch vernetzte rekombinante TRIM5-21R Dimerisierung und Säuger-ausgedrückt TRIM5-21R und TRIM5alpha Proteine ausgestellt ähnlich Natrium Natriumdodecylsulfat-Sulfat-Polyacrylamid Gel Elektrophorese Mobilitäten, darauf hinweist, dass TRIM5alpha Säugetierproteine überwiegend Dimere sind. Gereinigte TRIM5-21R Ubiquitin Ligase Tätigkeit hatte und konnte Autoubquitylate mit verschiedenen E2-Ubiquitin, des in-vitro-Enzyme. TRIM5-21R gebunden und authentische EIAV Kern Teilchen direkt mit synthetischen Capsids rekombinanter Proteine von HIV-1 CA-NC komponiert. HIV-1 CA-NC Assemblys gebunden dimeren TRIM5-21R besser als Monomer TRIM5-21R oder TRIM5-21R Konstrukte, die die SPRY-Domäne oder die V1-Loop fehlten. Unsere Studien zufolge so TRIM5alpha Proteine dimeren Ubiquitin E3 Verknüpfung sind, die erkennen von Retroviren Capsids durch direkte Interaktion vermittelt durch die SPRY-Domäne und zeigen, dass diese Aktivitäten in Vitro mit reinen rekombinante Proteine abgewogen werden können.

Cyclophilin A-abhängige Einschränkung Des Humanen Immundefizienz-Virus Typ 1 Kapsid Mutanten Für Infektion Der Nondividing Zellen

Journal of Virology. Dec, 2008  |  Pubmed ID: 18829762

Unter Retroviren sind Lentiviruses ungewöhnlich in ihrer Fähigkeit, effizient sowohl nondividing als auch teilende Zellen wie aktivierten T-Zellen und Makrophagen, bzw. infizieren. Jüngste Studien implizieren das virale Kapsidprotein (CA) als ein entscheidender Faktor der Zelle-Zyklus unabhängig Infektion mit humanen Immundefizienz-Virustyp 1 (HIV-1). Wir untersuchten die Wirkungen von der Host-Zelle-Protein-Cyclophilin (CypA), die an HIV-1 CA, auf HIV-1-Infektion von nondividing Zellen bindet. Die HIV-1 CA-Mutanten, A92E, T54A und R132K waren für die Infektion von HeLa-Zellen Aphidicolin verhaftet, aber nicht HOS Zellen beeinträchtigt. Die Mutanten synthetisiert normale Mengen von zwei-lang-Terminal-Repeat Kreise in verhafteten HeLa-Zellen, darauf hinweist, dass die mutierten preintegration komplexe, die Kerne der beiden Division eingeben können und der nondividing. Die gestörte Infektiosität der CA-Mutanten auf beiden Teilen und nondividing HeLa-Zellen war erleichtert, indem entweder pharmakologischer oder genetische Störung der Interaktion CypA-CA oder RNA Interferenz-vermittelte Erschöpfung CypA Ausdruck in Zielzellen. Ein zweiter Standort Suppressor des Phänotyps CypA eingeschränkten wiederhergestellt auch die Fähigkeit der CypA eingeschränkten HIV-1-Mutanten, Wachstum-verhaftet HeLa-Zellen zu infizieren. Diese Ergebnisse zeigen, dass CypA eingeschränkten Mutanten speziell Wertminderung bei einem Schritt zwischen atomaren Import und Integration in nondividing HeLa Zellen. Diese Studie zeigt eine neuartige Ziel zellspezifische Beschränkung von HIV-1 CA Mutanten in nondividing Zellen, die CypA-CA Interaktionen abhängig ist.

Zellfreien Assays Für HIV-1 Ungestrichen

Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.). 2009  |  Pubmed ID: 19020817

Ungestrichen ist ein wesentlicher Schritt im Lebenszyklus Retroviren, die über die wenig bekannt ist. Ungestrichen ist definiert als die spezifische Dissoziation der Kapsid Schale vom Kern viralen im Host Zelle Zytoplasma. In diesem Kapitel werden die biochemischen Assays für HIV-1 ungestrichen in-vitro-Untersuchung beschrieben. Diese Techniken haben nützlich für die Charakterisierung von HIV-1-Mutanten, die Mängel aufweisen bewiesen im uncoating Schritt einer Infektion.

Struktureller Konvergenz Der Cryo-EM Und NMR Enthüllt Intersubunit Interaktionen Für HIV-1-Kapsid-Funktion Von Entscheidender Bedeutung

Cell. Nov, 2009  |  Pubmed ID: 19914170

Reife HIV-1-Partikel enthalten konisch geformten Capsids, die umschließen des viralen RNA-Genoms und wesentliche Aufgaben im Lebenszyklus Virus. Vorherige Strukturanalyse von zwei- und dreidimensionalen Arrays das Kapsid-Proteine (CA)-Hexamer ergab drei Schnittstellen. Hier präsentieren wir eine CryoEM-Studie eine röhrenförmige Versammlung der CA und eine hochauflösende NMR-Struktur von der CA C-terminalen Domäne (CTD) Dimer. In der Lösung Dimer Struktur weisen die Monomere unterschiedliche relative Orientierungen, die im Vergleich zu früheren Röntgen-Strukturen. Die Lösungsstruktur passt gut in die EM-Dichte-Karte, was darauf hindeutet, dass die Dimer-Schnittstelle in der montierten CA erhalten bleibt. Wir auch identifiziert einer CTD-CTD-Schnittstelle auf lokaler dreifache Achse in der CryoEM-Karte und ihre funktionale Bedeutung von Mutagenese bestätigt. In der tubulären Assembly variiert CA intermolekulare Schnittstellen, Platz für die Asymmetrie im Rohre vorhanden. Dadurch wird die notwendige Plastizität, um kontrollierte Virus Kapsid Dis/Montage zu ermöglichen.

Anti-HIV Aktivität Des Defekten Cyanovirin-N-Mutanten Wird Durch Dimerisierung Wiederhergestellt

The Journal of Biological Chemistry. Apr, 2010  |  Pubmed ID: 20147291

Cyanovirin-N (CV-N) ist ein zwei-Domain, Cyanobakterien Protein, das Human Immunodeficiency Virus (HIV) bei nanomolare Konzentrationen durch Bindung an hohen Mannose Zucker auf die HIV-Umschlag-Glykoprotein gp120 hemmt. Das Wildtyp-Protein kann als ein Monomer oder ein Domäne-vertauscht Dimer mit dem Monomer und Dimer mit zwei oder vier Zucker-Bindungsstellen, bzw. ein auf jede Domäne vorhanden sein. Hier zeigen wir, dass Monomer, einzelne Bindung Website Mutanten völlig inaktiv sind und eine einzelne Site, ob auf Domäne A oder B nicht ausreicht, um die antivirale Aktivität zu vermitteln ist. Verknüpfung inaktiv, Monomere Proteine in einem Kopf-an-Kopf-Rennen Mode durch eine intermolekulare Disulfid Bindung oder durch Erstellen einer ausschließlich Domäne vertauscht Dimer über ein Scharnier Rückstand Löschung wiederhergestellt antivirale Aktivität auf ein Niveau ähnlich der Wildtyp CV-N. Diese Ergebnisse zeigen eindeutig, dass Mehrfachstandort Bindung von CV-N Typ Lektine für virale Hemmung notwendig.

TRIM5alpha Stört Die Struktur Der Montierten HIV-1-Kapsid-komplexe In-vitro

Journal of Virology. Jul, 2010  |  Pubmed ID: 20410272

Der Host-Beschränkung-Faktor TRIM5alpha bietet systeminterne Abwehr von Retrovirus-Infektionen in den Säugetier-Zellen. TRIM5alpha blockiert Infektion durch gezielte das virale Kapsid nach Eintrag aber vor Abschluss der reverse Transkription, aber es ist unbekannt, ob diese Interaktion direkt die Struktur des viralen Kapsid ändert. Eine frühere Studie berichtet, dass Rhesusaffe TRIM5alpha Protein stabil zylindrischer komplexe durch Montage von in-vitro-rekombinante HIV-1 CA-NC-Protein gebildet ordnet und diese Einschränkung zu beschleunigten HIV-1 führt uncoating in Zielzellen. Um einen Einblick in den Mechanismus der TRIM5alpha-abhängige Einschränkung weiter zu gewinnen, haben wir die strukturellen Auswirkungen von TRIM5 Proteinen auf vormontierte CA-NC-komplexe durch Elektronenmikroskopie geprüft. Inkubation der montierten komplexe mit lysate Zellen auszudrücken die restriktive Rhesus TRIM5alpha Protein ergab deutliche Störung der normalen zylindrische Struktur der komplexe. Im Gegensatz dazu Inkubation mit lysate Steuerelement Zellen oder Zellen auszudrücken vergleichbarem nicht restriktive menschlichen TRIM5alpha Protein hatte kaum Auswirkungen auf die komplexe. Inkubation mit lysate Zellen zum Ausdruck des TRIMCyp Beschränkung Faktors auch gestört die Zylinder. Der Effekt der TRIMCyp wurde durch Zugabe von Cyclosporin, verhindert die Bindung von TRIMCyp an die HIV-1-Kapsid hemmt. Störung der CA-NC-Zylinder von TRIM5alpha und TRIMCyp war so mit der Besonderheit der Einschränkung korreliert. Diesen Ergebnissen zufolge gemeinsam TRIM5alpha-abhängige Einschränkung des HIV-1 Infektion von strukturellen Störung der das virale Kapsid zu abweichenden HIV-1 in Zielzellen ungestrichen Ergebnisse.

HIV Nukleare Eintrag: Deaktivieren Des Nebels

Viruses. May, 2010  |  Pubmed ID: 21994675

HIV-1 und andere Lentiviruses haben die ungewöhnliche Fähigkeit des nondividing Zellen zu infizieren, aber der Mechanismus, mit dem sie eine intakte Kernmembrane kreuzen, ist geheimnisvoll. Jüngsten Arbeiten, einschließlich einer neuen Studie (Lee, K.; Ambrose, Z.; Martin, T.D.; Oztop, I.; Mulky, A.; Julias, j.g.; Vandergraaff, N.; Baumann, j.g.; Wang, R.; Yuen, W. Et Al. Flexible Nutzung nuklearer Import Pathways von HIV-1. Cell Host Microbe2010, 7, 221-233) bestätigt, dass das virale Kapsid eine Schlüsselrolle in HIV-1 nukleare Eintrag in beiden spielt Zellen teilen und nondividing. Identifizierung von Mutationen im viralen Kapsid, die das Virus-Abhängigkeit Host Zelle Nucleoporins ändern stellt einen bedeutenden Fortschritt in dieser Verständnismängel Phase des Lebenszyklus des Virus.

Klein-Molekül Hemmung Des Humanen Immundefizienz-Virus Typ 1-Infektion Durch Virus-Kapsid-Destabilisierung

Journal of Virology. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 20962083

Human-Immunodeficiency-Virustyp 1 (HIV-1) Infektion ist abhängig von der richtigen Demontage des viralen Kapsid oder "uncoating," in die Zielzellen. Das Kapsid HIV-1 besteht aus einem konischen werden Komplex von das virale Kapsidprotein (CA) in einem hexagonalen Gitter angeordnet. Mutationen im CA, die das virale Kapsid-Ergebnis in destabilisieren beeinträchtigt Infektion wegen Mängel in reverse Transkription in Zielzellen. Wir beschreiben hier den Wirkmechanismus von ein kleines Molekül HIV-1-Hemmer, PF-3450074 (PF74), welche Ziele CA. PF74 verhält sich in einem frühen Stadium der HIV-1 Infektion und hemmt reverse Transkription in Zielzellen. Wir zeigen, dass PF74 spezifisch an HIV-1-Teilchen bindet und Ersetzungen in CA, die Widerstand gegen die Substanz verleihen Bindung verhindern. Eine einzelne Punkt-Mutation in CA, die den HIV-1-Kern stabilisiert verlieh auch starken Widerstand gegen das Virus ohne Hemmung zusammengesetzte Bindung. Behandlung von HIV-1-Teilchen oder gereinigte Kerne mit PF74 destabilisiert das virale Kapsid in-vitro. Darüber hinaus induziert die Verbindung die schnelle Auflösung der HIV-1-Kapsid in Zielzellen. PF74 antivirale Aktivität wurde befördert durch Bindung von der Host Protein Cyclophilin A auf das HIV-1-Kapsid und PF74 und Cyclosporin ausgestellt gegenseitigen Antagonismus. Unsere Daten zeigen, dass PF74 vorzeitige HIV-1 in Zielzellen, ungestrichen imitiert dabei die Aktivität des Faktors Beschränkung Retroviren TRIM5α auslöst. Diese Studie unterstreicht ungestrichen als Schritt im Lebenszyklus HIV-1, die anfällig für kleine Molekül Intervention ist.

Struktur Der Das HIV-1 in Kapsidprotein in Einem Konformationsgehinderten Gefangen Unmontiert Zustand Induziert Durch Klein-Molekül-Bindung

Journal of Molecular Biology. Feb, 2011  |  Pubmed ID: 21146540

Das Kapsidprotein (CA) spielt wichtige Rolle in der HIV-Infektion und Replikation, wesentliche virale Reifung. Das Fehlen von hochauflösenden Strukturdaten über unmontiert CA behindert die Entwicklung von antiviralen Medikamenten wirksam bei der Hemmung der Versammlung. Im Gegensatz zu Enzymen, die anvisierbare, funktionelle Substrat-Bindungsstellen haben, verfügt die Zertifizierungsstelle eine bekannte Website nicht diese Affekte katalytische oder andere angeborene Tätigkeit, wurden die leichter in Droge Entwicklungsbemühungen ausgerichtet werden können. Wir berichten die Kristallstruktur der HIV-1 CA, offenbart die Domäne-Organisation im Rahmen der Wildtyp in (FL) unmontiert CA. Die FL-CA nimmt eine antiparallele Dimer-Konfiguration Ausstellen einer Domäne Organisation sterisch unvereinbar mit Kapsid Assembly. Eine kleine Siedlung, generiert in Situ während der Kristallisation, ist an einem Scharnier-Standort ("H-Website"), darauf hinweist, dass die Bindung an diese domänenübergreifendes Region die ADP-Konformation stabilisiert eng gebunden. Elektronenmikroskopie-Studien auf entstehende Kristalle zeigen beide Dimere und Hexameric Gitter Koexistenz innerhalb einer einzelnen Bedingung, im Einvernehmen mit den Interconvertibility oligomere Formen und unterstützen die Machbarkeit Montage-inkompetent Dimere Staaten zu fördern. Lösung Charakterisierung in Anwesenheit der H-Seite-Ligand zeigt überwiegend unmontiert dimeren CA, auch unter Bedingungen, die Versammlung zu fördern. Unsere Struktur-Aufklärung über die HIV-1-FL-CA und Charakterisierung von einem potenziellen allosterische Bindungsstelle liefert dreidimensionale Ansichten von einer Versammlung-defekt-Konformation, ein Staates ausgerichtet, und somit unmittelbar relevant, Inhibitor-Entwicklung. Aufgrund unserer Erkenntnisse, schlagen wir eine beispiellose Mittel zur Verhinderung von CA Versammlung, durch "konformationsgehinderten Fallenstellerei" CA in Montage-inkompetent Konformationsänderungen Staaten von H-Sitebindung induziert.

Rhesus TRIM5α Stört Das HIV-1-Kapsid an Den Inter-Hexamer-Schnittstellen

PLoS Pathogens. Mar, 2011  |  Pubmed ID: 21455494

TRIM Proteine spielen wichtige Rollen in der angeborenen Immunabwehr gegen Retroviren Infektion, einschließlich humanen Immundefizienz-Virus Typ 1 (HIV-1). Rhesusaffe TRIM5α (TRIM5α(rh)) zielt auf das HIV-1-Kapsid und Infektion frühzeitig Nettozahlern, vor reverse Transkription blockiert. Studien haben gezeigt, dass Bindung von TRIM5α an die versammelten Kapsid unbedingt Beschränkung und erfordert die aufgerollte Spule und B30.2/SPRY-Domänen, sondern die molekulare Mechanismen der Einschränkung wird nicht vollständig verstanden. In dieser Studie untersuchten wir von CryoEM kombiniert mit Mutagenese und chemische Vernetzung, die direkten Interaktionen zwischen HIV-1-Kapsid-Proteine (CA)-Assemblys und gereinigten TRIM5α(rh) mit aufgerollte Spule und SPRY-Domains (CC-SPRY(rh)). Konzentration-abhängige Bindung des CC-SPRY(rh) CA-Assemblys wurde beobachtet, während unter den gleichen Bedingungen das menschliche Protein nicht gebunden. Wichtig ist, gestört CC-SPRY(rh), aber nicht ihre menschliche Entsprechung, CA Rohre nicht zufällige Weise freigeben Fragmente von Protofilaments bestehend aus CA Hexamers ohne Dissoziation in Monomere. Darüber hinaus wurde diese strukturelle Zerstörung von inter-Hexamer Vernetzung mit P207C/T216C Mutant CA mit Disulfidbrücken an der CTD-CTD Trimer Schnittstelle Kapsid Assemblys, aber nicht von Intra-Hexamer Vernetzung über A14C/E45C an der Schnittstelle von NTD-NTD verhindert. Die gleiche Störung-Wirkung von TRIM5α(rh) auf die Inter-Hexamer-Schnittstellen ist auch mit gereinigtem intakt HIV-1-Kernen aufgetreten. Diese Ergebnisse liefern Erkenntnisse über wie TRIM5α Virion Kern stört und zeigen, dass struktureller Schäden der viralen Kapsid von TRIM5α wahrscheinlich die wichtigen Komponenten des Mechanismus der TRIM5α-vermittelte HIV-1-Einschränkung ist.

Immunologie: TRIM5 Ist Double Duty

Nature. Apr, 2011  |  Pubmed ID: 21512569

Reifung Induziert Verbergens Der Neutralisierung Epitopes Auf HIV-1-Teilchen

PLoS Pathogens. Sep, 2011  |  Pubmed ID: 21931551

Um infektiös zu werden, werden HIV-1-Teilchen einen Reifungsprozess, die proteolytische Spaltung von der Gag und Gag-Pol Polyproteins unterzogen. Unreife Partikel enthalten eine hochstabile sphärische Gag-Gitter und sind für die Fusion mit Zielzellen beeinträchtigt. Die Fusion-Beeinträchtigung ist erleichtert, durch Abschneiden der gp41 zytoplasmatischen Schwanz (CT), darauf hinweist, dass eine Interaktion zwischen der unreifen virale Kern und gp41 innerhalb der Partikel HIV-1-Verschmelzung durch einen unbekannten Mechanismus unterdrückt. Wir die Hypothese, dass die Gestaltung des Env virale oberflächlich durch Wechselwirkungen mit der HIV-1-Kern phosphorylierter, während Partikel Reifung geregelt wird. Um dies zu testen, quantifizieren wir die Bindung eines Panels von monoklonalen Antikörpern zu Reifen und unreifen HIV-1-Teilchen durch Immunfluoreszenz-Bildgebung. Überraschenderweise stellte unreife Partikel deutlich verbesserte Anbindung von mehreren gp41-spezifische Antikörper, darunter zwei, die erkennen die Membran proximalen externe Region (MPER) und unterschiedlichen HIV-1-Stämme zu neutralisieren. Mehrere Unterschiede in Epitop-Ausstellung auf Reifen und unreifen Partikel wurden durch Abschneiden von der gp41 abgeschafft, die CT, wobei die unreife Fusion von HIV-1 in Verbindung mit veränderten Env-Konformation defekt. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass Störung des Fusion-abhängige Env Konformationsveränderungen trägt der gestörte Fusion von unreifen Partikeln. Maskierung der Neutralisierung-Sensitive Epitopes während Partikel Reifung kann dazu beitragen, HIV-1 immun ausweichen und hat praktische Bedeutung für Impfstoff-Strategien, die gezielt das gp41-MPER.

RING Domäne Mutationen Trennstelle TRIM5α Beschränkung Des HIV-1 Aus Hemmung Der Reverse Transkription Und Beschleunigung Der Ungestrichen

Journal of Virology. Feb, 2012  |  Pubmed ID: 22114335

Rhesus TRIM5α (TRIM5α(rh)) ist ein cytosolisches Protein, die stark HIV-1 bereits frühzeitig postentry, vor der Rückübertragung beschränkt. Die Fähigkeit von TRIM5α(rh), HIV-1 Infektion zu blockieren hat während der Infektion mit einem Rückgang von pelletable HIV-1-Kapsid korreliert wurden. Um die Fähigkeit der TRIM5α reverse Transkription blockieren genetisch zu zergliedern, studierte wir eine Reihe von TRIM5α(rh) RING-Domäne-Mutanten, die stark HIV-1 beschränken, sondern das Vorkommen der Rückübertragung zu ermöglichen. Diese TRIM5α(rh) RING-Varianten blockiert HIV-1 Infektion nach Rückübertragung aber vor der Integration, wie es die Weiterleitung der nuklearen viraler DNA zu Circularization in Form von 2 langen terminal wiederholen (2-LTR) Kreisen. Die Faltung der RING Domäne Varianten war ähnlich der der Wildtyp, wie Kernspinresonanz bewertet. RING-Domain-Änderungen, die das Auftreten von reverse Transkription zulässig waren in ihrer Fähigkeit, die Menge des pelletable im Vergleich zu Wildtyp TRIM5α Kapsid verringern beeinträchtigt. Ähnliche Wirkungen dieser bestimmten Gruppe von Mutationen wurden mit menschlichen TRIM5α Hemmung der N-Tropic murine Leukämievirus (N-MLV) beobachtet. Interessanterweise verhindert TRIM5α(rh) RING Domäne Varianten auch den Abbau des TRIM5α(rh), das nach Zelleingabe HIV-1 auftritt. Diese Daten korreliert den Block der reverse Transkription mit der Fähigkeit der TRIM5α ungestrichen beschleunigen. Diesen Ergebnissen zufolge gemeinsam TRIM5α(rh) Blöcke HIV-1 Transkription durch induzierende vorzeitige virale ungestrichen in Zielzellen umzukehren.