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Articles by Christopher Pohlmeyer in JoVE
JoVE Bioengineering
Espacio-Temporal de manipulación de la actividad GTPasa pequeña en el nivel subcelular y en escala de tiempo de segundos en las células vivas
1Department of Cell Biology, Center for Cell Dynamics, Johns Hopkins University, 2Graduate School of Pharmaceutical Sciences, University of Tokyo, 3Biomedical Engineering, Johns Hopkins University
Un método para el control espacio-temporal de la actividad GTPasa pequeña luz se describe. Este método se basa en la rapamicina inducida FKBP-FRB heterodimerización y sistemas de enjaulamiento foto-. Optimización de la luz de la irradiación permite la activación espacio-temporalmente controlada de las pequeñas GTPasas a nivel subcelular.
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Un Conjugado De Rapamicina Photocleavable Para El Control De Espacio-temporal De La Actividad GTPasa Pequeña
Hemos desarrollado un nuevo método para controlar la actividad espaciotemporalmente de moléculas de señalización. Un derivado de la rapamicina photocaged nueva síntesis inducida dimerización rápida de FKBP (FK-506 de unión a proteínas) y el FRB (FKBP-rapamicina unión a proteínas) a la radiación UV. Con este sistema, y la irradiación UV espacialmente confinados, logramos subcellularly activación localizada de Rac, un miembro de las pequeñas GTPasas. Nuestra técnica ofrece un poderoso enfoque a los estudios dinámicos de eventos de señalización intracelular.
Disparo De Cometas De Actina Versus Membrana Volantes: Efectos Distintivos De Fosfoinosítidos De Reorganización De La Actina
Un conjunto limitado de lípidos de la membrana phosphoinositide regulan diversas funciones celulares como la proliferación, diferenciación y migración. Hemos desarrollado dos técnicas basadas en la dimerización de la proteína inducida por la rapamicina para cambiar rápidamente la concentración de la membrana plasmática fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato [PI (4,5) P (2)]. En primer lugar, utilizando una membrana de forma reclutable de PI (4) P 5-quinasa, que aumentaron PI (4,5) P (2) la síntesis de la fosfatidilinositol 4-fosfato [PI (4) P] y se encontró que el COS-7, HeLa y células embrionarias humanas de riñón 293 forman haces de filamentos de actina móviles conocidos como cometas de actina. En contraste, una segunda técnica que el aumento de la concentración de PI (4,5) P (2) sin consumir PI membrana (4) P inducida volantes. Estos fenotipos distintos fueron mediadas por el tráfico vesicular dynamin y mediada por interferencia mutuamente inhibitorias entre las pequeñas guanosina trifosfatasas Rac y RhoA. Nuestros resultados indican que el efecto de PI (4,5) P (2) sobre la reorganización de actina depende de la abundancia de fosfoinositósidos otros, como PI (4) p Así, la regulación de las concentraciones de combinatoria phosphoinositide puede contribuir a la diversidad de funciones fosfoinosítidos.
