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Articles by Chun-Chun Chen in JoVE
JoVE General
放射性その場でハイブリダイゼーション
1Howard Hughes Medical Institute, Department of Neurobiology, Duke University, 2Department of Biological Sciences, Hokkaido University
このプロトコルが正常に定量的な脊椎動物種間で複数の組織の種類のレベルとmRNA発現の空間パターンを検出するために使用されています。メソッドは、低濃度の転写物を検出すると同時にスライドの何百もの処理を可能にすることができます。我々は、例として、鳥類の胚の脳形成の発現プロファイリングを使用して、このプロトコルを提示します。
Other articles by Chun-Chun Chen on PubMed
シクリッド魚の 2 つの性腺刺激ホルモン放出ホルモン受容体の種類の分布は機能分化を示唆しています。
性腺刺激ホルモン放出ホルモン 1 (GnRH1) の脳から GnRH 固有受容下垂体を介して脊椎動物の生殖制御;ただし、このペプチドの家族のための追加の役割を示唆して、すべての種に GnRH の他の形態が見られます。GnRH アクション批判的に同種の脳内受容体の場所によって異なります。GnRH の追加フォームの潜在的な役割を理解するには、2 つの既知の GnRH 受容体型シクリッド魚、Astatotilapia burtoni、GnRH1 を規制して社会的にローカライズ。そのままの交配を使用して、これら GnRH 受容体 (GnRH R) サブタイプ ニューロン GnRH の生産に関して具体的には、脳の中の mRNA 発現パターンについて説明します。我々 のデータはその次の遺伝子重複、受容体は、異なる機能を提供する進化している 2 つの GnRH をお勧めします。タイプ 1 受容体 (GnRH R1) 2 型受容体 (GnRH R2) より少なく広く表されます。具体的には、GnRH R1 終脳, 視索前野, 腹側視床下部、視床、および下垂体のニューロンのグループで表されます。対照的に、GnRH R2、嗅球、終脳、視索前野、視床下部、視床、中脳、視蓋、小脳、菱脳, と下垂体を含む多くの脳分野で、表されます。GnRH R2 の特定の配布 GnRH リガンド A. burtoni の動作に影響するこの受容体を介した行動するかもしれないことを示唆しています。また、のみ GnRH R2 mRNA GnRH 含有ニューロンの 3 つの既知のグループの任意の直接的なフィードバック規制自体によって GnRH のこの受容体タイプを通じて行動する必要があることを示唆して結果です。一緒に取られて、これらのデータは GnRH 受容体の 2 種類が異なる機能的役割 A. burtoni で役立つことをお勧めします。
表現や構造、機能、性腺刺激ホルモン放出ホルモン (GnRH) 受容体 GnRH R1SHS と GnRH R2PEY のメダカの Astatotilapia Burtoni の進化
複数の GnRH 受容体 nonmammalian の種内に存在する知られているが、受容体タイプを制御する視床下部-下垂体-性腺軸を介して複製不明であります。魚類 Astatotilapia burtoni 領土男性のみ再現ので繁殖を担当 GnRH の受容体を識別するために役立ちます。A. burtoni、GnRH-R1(SHS) の GnRH の受容体が 2 番目のクローンを作成している （SHS はペプチド モチーフ細胞外ループ 3）、アップレギュ領土男性の前葉であります。我々 は、GnRH-R1(SHS) 多くのティッシュで表されます、具体的で下垂体 LH とを colocalizes ことを示しています。A. burtoni の脳に mRNA のレベルの GnRH-R1(SHS) と以前に識別された受容体、GnRH-R2(PEY)、すべての 3 つの GnRH リガンドの mRNA のレベルと相関が。にもかかわらずその可能性が高い役割再生では、GnRH-R1(SHS) 最高アフィニティ in vitro 試験および低感度 GnRH2 用の GnRH1 を持っていることを発見しました。当社の系統解析では、GnRH-R1(SHS) が GnRH-R2(PEY) よりも少ない密接に哺乳類の生殖の GnRH の受容体に関連しているを示しています。我々 は、脊椎動物の GnRH 受容体のアミノ酸配列の多くの種の受容体機能と組織分布と相関し、GnRH 受容体シーケンス リガンドの応答性がない共局在パラクリンを予測することが見つかりました。シーケンス分析、組織内局在と生理応答に基づく GnRH-R1(SHS) 受容体 A. burtoni を含む硬骨魚の複製を制御することを提案する.相関するリガンドの選択性が生殖制御遺伝子シーケンスに基づく GnRH 受容体分類を提案する.異なる脊椎動物系統における再現を規制する異なる重複 GnRH 受容体遺伝子が選択されていることが示唆されました。
シーケンス、発現パターンおよびコルチコトロピン放出因子システムでは硬骨魚の規制。
コルチコトロピン放出因子 （CRF） グルココルチコイドのリリースを制御することにより脊椎動物種のストレス応答を調節その役割で知られています。CRF はまた他の生理的プロセスを介して 2 つの異なる CRF 受容体 （CRF-Rs） に影響を与えるし、CRF 結合タンパク質 (CRFBP) を co-regulated しました。CRF 最初に哺乳類で発見されたが、ストレス応答、モーターの動作、およびすべての脊椎動物の食欲の調節のために重要です。しかし、それ CRF, CRF Rs と CRFBP の行動が調整されますどのように明確ではないです。この問題にアプローチするには、我々 のクローン作成および識別の CRF、CRF-Rs、および CRFBP では硬骨魚魚のモデル システム、Astatotilapia burtoni、彼らは身体と脳の発現パターン マップします。我々 は CRF のシステムが生存に重要な役割を果たしていることを示唆して、脊椎動物では CRF、CRFBP、および CRF Rs の遺伝子シーケンスを保存性が高いことが見つかりました。CRF のシステムのメンバーは広く脳サービス、網膜、ギル、脾臓, 筋肉, と腎臓、それによってそれらのビジョン、呼吸、消化、運動などの身体機能の様々 な implicating 表されます。また CRFBP 下垂体の恒常性のメカニズムを介して増加に対し次の長期的な社会的ストレス、脳における CRF と CRF の mRNA 発現 1 下垂体の減少型受容体が. します。
異種核リボ核蛋白質 A/B および G ゴナドトロピン放出ホルモン 1 の転写を抑制します。
ゴナドトロピン放出ホルモン 1 (GnRH1) の性腺刺激ホルモンのリリースから下垂体制御再現するが発生します。ここでは 2 つの異種原子力 ribonucleoproteins （hnRNP-A/B と hnRNP G） に GnRH をバインド報告-私はシクリッド魚 Astatotilapia burtoni で上流のプロモーター領域。質量分析法によるペプチド マッピングの新開発のホモロジーに基づいてメソッドを使用これら結合蛋白質を識別されます。HnRNP-A/B と hnRNP G GnRH1 脳の視床下部の pre-optic 地区と co-localize を示します。我々 はまたこれらの ribonucleoproteins 類似結合能を in vivo で示すことを両方 GnRH1 転写制御のリプレッサーとして行動することを示唆をどこ hnRNP-A/B または hnRNP G の過剰発現大幅に下降 GT1 7 細胞における GnRH1 mRNA レベル調節不死化マウス GT1 7 細胞を使用して証明しました。
視覚情報だけでは、行動・生理シクリッド魚 (Astatotilapia Burtoni) における社会的相互作用の中に変更します。
社会行動生理学的システム劇的に影響を与えることができますまだ責任の感覚的手がかりがよく理解されていません。男性アフリカのシクリッド魚、その自然の生息地の Astatotilapia burtoni の動作は、他個体から視覚的な手掛かりが大幅に社会行動の調節に寄与こと示唆しています。新たなパラダイムを使用して、我々 は視覚的な手掛かりから大きい同種の男性だけで行動、生殖生理および小さい男性の生理的ストレス応答影響を及ぼしうるかどうか尋ねた。ここで我々 だけ大きく見て、明確なバリアを介しての男性を脅かす小さな男性の支配的な動作 7 日まで抑制することが表示します。「視覚的に明確な障壁を大きく支配的な男性によってまた攻撃されて」小さいの支配的な男性生殖とストレス関連遺伝子発現レベルのアップ規制などが 3 日のため、生理学的変化示したし、プラズマ 11 ketotestesterone 濃度制御動物に比べてを下げた。小さい男性は大きく男性に露出されたとき非支配的な男性の一致するようにその外観を変更が、彼らは生理的形質の支配的な男性と同様に維持します。7 日後と生殖-ストレス-関連の遺伝子発現、ホルモン レベルおよび生殖腺のサイズより小さい男性に視覚的な侵入者に慣れること示唆して制御グループから差は認められなかった小さい男性で循環します。ただし、小さい男性は、部下の行動を表示を続け、彼の支配的な男性の生理にもかかわらず、完全な週の部下の男性の外観を想定します。これらのデータは、大きな男性だけで見て小さい男性の行動を調節できるが、継続的な生殖阻害追加感覚的手がかりに依存することをお勧めします。おそらく、visual 社会的ストレッサーを体験しながら、小さい男性は日和見戦略使用部下の男性のような支配的な男性の生理学を維持しながら演技します。
