The Journal of Visualized Experiments (JoVE) is a peer reviewed, PubMed-indexed video journal. Our mission is to increase the productivity of scientific research.

Recommend to Librarian

In JoVE (1)

Other Publications (6)

Automatic Translation

This translation into Spanish was automatically generated.
English Version | Other Languages

Articles by Chun-Chun Chen in JoVE

 JoVE General

Radioactivo In situ La hibridación para la detección de diversos patrones de expresión génica en el tejido


JoVE 3764 4/27/2012

1Howard Hughes Medical Institute, Department of Neurobiology, Duke University, 2Department of Biological Sciences, Hokkaido University

Este protocolo se utiliza con éxito para detectar cuantitativamente los niveles y los patrones espaciales de la expresión del ARNm de múltiples tipos de tejidos a través de las especies de vertebrados. El método puede detectar transcripciones baja abundancia y permite el tratamiento de cientos de diapositivas simultáneamente. Se presenta el protocolo de uso de perfiles de expresión de la formación del cerebro del embrión aviar como ejemplo.

Other articles by Chun-Chun Chen on PubMed

Las Distribuciones De Dos Tipos De Receptores De La Hormona Liberadora De Gonadotropina En Un Pez Cíclido Sugieren Especialización Funcional

Hormona liberadora de gonadotropina 1 (GnRH1) del cerebro controla la reproducción en vertebrados mediante un receptor de GnRH-específica en la glándula pituitaria; sin embargo, otras formas de GnRH se encuentran en todas las especies, sugiriendo funciones adicionales para esta familia de péptidos. Acción de la GnRH depende críticamente de la ubicación de sus cognados receptores en el cerebro. Para entender el papel potencial de formas adicionales de GnRH, que localizado dos tipos conocidos del receptor de GnRH en un pez cíclido, Astatotilapia burtoni, en el que socialmente se regula GnRH1. Mediante hibridación in situ, describimos el patrón de expresión de mRNA de estos subtipos de receptores (GnRH-R) de GnRH en el cerebro, específicamente con respecto a las neuronas productoras de GnRH. Nuestros datos sugieren que, tras una duplicación de genes, la dos GnRH receptores han evolucionado para servir a diferentes funciones. El receptor tipo 1 (GnRH-R1) se expresa menos ampliamente que el receptor tipo 2 (GnRH-R2). Específicamente, la GnRH-R1 se expresa en grupos de neuronas en el telencéfalo, área preóptica, hipotálamo ventral, tálamo y la pituitaria. Por el contrario, GnRH-R2 se expresa en muchas más áreas del cerebro, incluyendo el bulbo olfatorio, telencéfalo, área preóptica, hipotálamo, tálamo, mesencéfalo, tectum óptico, cerebelo, cerebelo y pituitaria. La distribución específica de GnRH-R2 sugiere que los ligandos de GnRH pueden actuar a través de este receptor para influir en el comportamiento en a. burtoni. Por otra parte, sólo GnRH-R2 mRNA es colocalized en los tres grupos conocidos de las neuronas que contienen GnRH, sugiriendo que cualquier regulación de retroalimentación directa de GnRH por sí mismo debe actuar a través de este tipo de receptor. Tomados en conjunto, estos datos sugieren que los dos tipos de receptores de GnRH servir diferentes roles funcionales en a. burtoni.

Expresión, Estructura, Función Y Evolución De Los Receptores De La Hormona Liberadora De Gonadotropina (GnRH) GnRH-R1SHS Y GnRH-R2PEY En Los Teleósteos, Astatotilapia Burtoni

Múltiples receptores de GnRH se saben que existen en las especies nonmammalian, pero no está claro qué tipo de receptor regula la reproducción vía el eje hipotalámico-pituitario-gonadal. Los peces teleósteos, Astatotilapia burtoni, es útil para identificar los receptores de GnRH responsable para la reproducción, porque los machos sólo territoriales reproducen. Hemos clonado un segundo receptor de GnRH en a. burtoni, GnRH-R1(SHS) (SHS es un péptido motivo en lazo extracelular 3), que está regulado para arriba en pituitaries de machos territoriales. Hemos demostrado que la GnRH-R1(SHS) se expresa en muchos tejidos y específicamente colocalizes con LH en la hipófisis. En a. burtoni cerebro, los niveles de mRNA de GnRH-R1(SHS) y un receptor previamente identificado, GnRH-R2(PEY), están altamente correlacionados con los niveles de mRNA de todos tres ligandos de GnRH. A pesar de su probable papel en la reproducción, se encontró que el GnRH-R1(SHS) tiene la afinidad más alta para GnRH2 en vitro y baja respuesta a GnRH1. Nuestro análisis filogenético muestran que el GnRH-R1(SHS) es menos estrechamente vinculado a los receptores de GnRH reproductivos mamíferos que GnRH-R2(PEY). Somos vertebradas secuencias de aminoácidos de receptores de GnRH se correlacionó con la distribución de tejido y la función del receptor en muchas especies y encontró que las secuencias del receptor de GnRH predicen respuesta ligando pero no colocalización con gonadotropes pituitario. Basado en el análisis de la secuencia, localización de tejido y respuesta fisiológica proponemos que el receptor GnRH-R1(SHS) controles de reproducción en teleósteos, incluyendo a. burtoni. Proponemos una clasificación de receptores de GnRH basada en la secuencia del gen que se correlaciona con la selectividad del ligando pero no con control reproductivo. Nuestros resultados sugieren que diferentes genes de receptores de GnRH duplicados han sido seleccionados para regular la reproducción en diversos linajes vertebrados.

Expresión Diurnos Y Localización De La Melanopsina Opsina Antiguo Vertebrado Y Péptido Activador De Adenilato Ciclasa Pituitaria MRNA En Una Retina Teleósteos

Secuencias, Patrones De Expresión Y Regulación Del Sistema Factor Liberador De Corticotropina En Un Teleósteos

Factor liberador de corticotropina (CRF) es conocida por su papel en la regulación de la respuesta de estrés en especies de vertebrados controlando la liberación de los glucocorticoides. CRF también influye en otros procesos fisiológicos mediante dos receptores distintos de CRF (CRF-Rs) y es corregulado por una proteína de unión de CRF (CRFBP). Aunque CRF fue descubierto en los mamíferos, es importante para la regulación de la respuesta de estrés, conducta motora y apetito en todos los vertebrados. Sin embargo, no está claro cómo se coordinan las acciones de CRF CRF-Rs y CRFBP. Para abordar este problema, hemos clonado e identificados CRF CRF-Rs y CRFBP en un teleósteos sistema modelo, Astatotilapia burtoni de pescado y asignan sus patrones de expresión en el cuerpo y el cerebro. Encontramos que CRF, CRFBP y CRF-Rs secuencias de genes están muy conservadas en vertebrados, sugiriendo que el sistema CRF juega un papel esencial en la supervivencia. Miembros del sistema CRF expresan ampliamente en el cerebro, retina, gill, bazo, músculo y riñón, lo que implica en una variedad de funciones corporales, incluyendo la visión, respiración, digestión y movimiento. También encontramos que siguientes estrés social a largo plazo, la expresión del mRNA de la CRF en el cerebro y CRF receptor tipo 1 en la disminución de la pituitaria CRFBP en la pituitaria aumenta mediante un mecanismo homeostático.

Ribonucleoproteína Nuclear Heterogéneo A / B Y G Inhibe La Transcripción De La Gonadotropina-lanzar-hormona 1

Hormona liberadora de gonadotropina 1 (GnRH1) provoca la liberación de gonadotropinas de la hipófisis para la reproducción de control. Aquí divulgamos que dos ribonucleoproteínas nucleares heterogéneas (hnRNP-A/B y hnRNP-G) se unen al GnRH-I región del promotor aguas arriba en un pez cíclido Astatotilapia burtoni. Identificamos estas proteinas utilizando un método desarrollado recientemente homología basado de mapeo peptídico espectrometría de masa. Mostramos que tanto hnRNP-A/B y hnRNP-G Co-localizan con GnRH1 en el área pre-optic del hipotálamo en el cerebro. También demostramos que estas ribonucleoproteínas exhiben similar capacidad in vivo, utilizando células de ratón inmortalizadas GT1-7 donde la sobreexpresión de hnRNP-A/B o hnRNP-G significativamente abajo-regula los niveles de mRNA de GnRH1 en células GT1-7, sugiriendo que ambos actúan como represores en la regulación transcripcional de GnRH1.

Información Visual Solo Cambia El Comportamiento Y La Fisiología Durante Las Interacciones Sociales En Un Pez Cíclido (Astatotilapia Burtoni)

Comportamiento social puede influir considerablemente en sistemas fisiológicos, sin embargo, las señales sensoriales responsables no son bien entendidas. Comportamiento de los peces cíclidos africanos masculinos, Astatotilapia burtoni, en su hábitat natural sugiere que las señales visuales de sus congéneres contribuyen significativamente a la regulación del comportamiento social. Usando un paradigma nuevo, preguntamos si señales visuales solamente de un hombre mayor de conespecíficos podrían influir en comportamiento, fisiología reproductiva y la respuesta de estrés fisiológico de un hombre más pequeño. Aquí mostramos que simplemente ver un más grande, peligrosa para el hombre a través de una barrera clara puede suprimir comportamiento dominante de un hombre más pequeño hasta 7 días. Los machos dominantes más pequeños "atacados" visualmente por los machos dominantes más grandes a través de una barrera clara también mostraron cambios fisiológicos durante 3 días, incluyendo la para arriba-regulación de los niveles de expresión de genes reproductivos y tensionar-relacionadas y redujo las concentraciones plasmáticas de 11-ketotestesterone en comparación con los animales de control. Los machos más pequeños modificación su apariencia para que coincida con la de los machos no dominantes cuando se expone a un hombre mayor pero mantuvieron un fenotipo fisiológico similar a la de un macho dominante. Después de 7 días, reproductiva y estrés - relacionadas con la expresión génica, circulando los niveles hormonales y el tamaño de la gónada en los machos más pequeños no mostraron ninguna diferencia desde el grupo de control sugiriendo que el más pequeño hombre habituado al intruso visual. Sin embargo, el hombre más pequeño continuó mostrar comportamientos subordinados y supone la aparición de un hombre subordinado durante una semana entera a pesar de su fisiología masculina dominante. Estos datos sugieren que el ver a un hombre mayor solo puede regular el comportamiento de un hombre más pequeño pero que continua inhibición reproductiva depende de señales sensoriales adicionales. Tal vez, mientras se experimentan los estresores sociales visuales, el hombre más pequeño utiliza una estrategia oportunista, actuando como un hombre subordinado manteniendo la fisiología de un macho dominante.

Waiting
simple hit counter