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Articles by Cindy A. Morris in JoVE
JoVE Bioengineering
Rotazione Cultura sistemi cellulari per colture cellulari umane: cellule del trofoblasto umano come modello
1Department of Microbiology and Immunology, Tulane University Medical School, 2Physician/Scientist Program, Tulane University Medical School, 3Department of Molecular and Cellular Biology, Baylor College of Medicine
Tradizionale, bidimensionale tecniche di coltura cellulare spesso sfociano in caratteristiche alterate rispetto ai marcatori di differenziazione, citochine e fattori di crescita. Tridimensionale di coltura cellulare nel sistema delle cellule di rotazione cultura (CCR) ristabilisce l'espressione di molti di questi fattori, come illustrato qui con una linea di cellule extravilloso trofoblasto.
Other articles by Cindy A. Morris on PubMed
Induzione Dell'attivazione P53-dipendente Il Gene Di Antigene Nucleare Delle Cellule Proliferanti Umana Nella Cromatina Da Radiazioni Ionizzanti
Una linea cellulare dei fibroblasti umani con espressione condizionale p53 visualizzato un aumento di p53-dipendente nei livelli di proteina e del mRNA di antigene nucleare di proliferazione cellulare (PCNA) dopo esposizione a radiazioni ionizzanti (IR). La combinazione dell'induzione di p53 e IR hanno collaborato per attivare un gene di promotore-reporter PCNA umano transitoriamente espresso mediante un elemento di p53-sensibli a reagire. Immunoprecipitazione della cromatina dosaggi con anticorpi specifici per p53 o p300/CREB-binding protein rivelato specifico arricchimento di p53-dipendente delle sequenze promotore PCNA in immunoprecipitates della cromatina tranciata preparata da cellule irradiate. Associazione massimo e specifico di acetilata dell'istone H4 con il promotore PCNA dipendeva anche induzione di p53 e l'esposizione a IR. Questi dati dimostrano p53 associazione a un sito di destinazione nel promotore PCNA, reclutamento di p300/CREB-binding protein e localizzata acetilazione dell'istone H4 in maniera IR-dipendente. Questi eventi molecolari sono suscettibili di svolgere un ruolo nel mediare l'attivazione dell'espressione del gene PCNA da p53 durante la risposta cellulare al danno al DNA. Le analisi indicano che la combinazione dell'induzione di p53 e IR attivare il gene PCNA attraverso meccanismi simili a quello di p21/selvaggio-tipo p53-attivato fattore ma in misura minore. Questo regolamento differenziale di PCNA e p21/selvaggio-tipo p53-attivato fattore può stabilire il corretto rapporto tra le due proteine a coordinare la riparazione del DNA con arresto del ciclo cellulare.
Infezione Da Citomegalovirus Umano Permissivo Di Una Prima Linea Di Cellule Cytotrophoblast Extravillous Trimestre
Citomegalovirus umano (HCMV) è la principale causa di infezione virale congenita negli Stati Uniti e in Europa. Nonostante la significativa morbidità associata a infezione prenatale da HCMV, poco è conosciuto circa come il virus infetta il feto durante la gravidanza. Ad oggi, cytotrophoblasts umano primario (CTBs) sono state utilizzate per studiare placentare HCMV infezione e replica; Tuttavia, il minimo potenziale mitotico di queste cellule limita la sperimentazione per un paio di giorni, che può essere problematico per gli Studi meccanicistici del virus lento di replica. Lo scopo di questo studio era di determinare se l'essere umano primo trimestre CTB cella linea SGHPL-4 era permissivo per l'infezione di HCMV e pertanto potrebbe superare tali limiti. HCMV immediato inizio (IE) espressione della proteina di è stato rilevato più presto post-infection 3 ore di SGHPL-4 celle e progressivamente aumentato in funzione del tempo. Saggi di crescita di HCMV ha rivelato la presenza di virus infettivo in entrambi lisati cellulari e supernatanti di cultura, che indica che la replica virale e il rilascio del virus della progenie si è verificato. Rispetto ai fibroblasti umani, replicazione virale è stato ritardato in CTBs, coerente con gli studi precedenti reporting ritardato cinetica virale in HCMV infezione primaria CTBs. Questi risultati indicano che le cellule SGHPL-4 sono completamente permissive per il ciclo completo di HCMV replicativa. I nostri risultati suggeriscono che queste cellule possono servire come strumenti utili per futuri studi meccanicistici della patogenesi HCMV durante la gravidanza iniziale.
Proteina Di Membrana Latente EBV-1 Protegge Le Cellule B Dal Apoptosis Tramite Inibizione Di BAX
Proteina latente di membrana (LMP-1) 1 del virus di Epstein - Barr (EBV) promuove la tumorigenesi inibendo l'apoptosi. Mostriamo che un'attività importante antiapoptotici LMP-1 è l'inibizione di Bcl2-associated protein X (Bax), una proteina Miselli potente. Espressione di BAX è stato regolamentato da LMP-1 attivazione del fattore nucleare kappaB (NF-kappaB) attraverso la regione di attivazione di C-terminale 1 (CTAR-1) e CTAR-2. È interessante notare, p65/p50 inibito, mentre p50/p50 aumentata, attività di promotore BAX come dimostrato dalla sovraespressione e inibizione selettiva di queste isoforme di NF-kappaB. Mobilità elettroforetica MAIUSC analisi hanno rivelato che LMP-1 attiva 2 dei 3 NF-kappaB associazione siti (kappaB1-kappaB3) il promotore BAX. LMP-1 indotta da associazione l'eterodimero NF-kappaB p65/p50 al sito kappaB2 e l'omodimero p50/p50 al sito kappaB3. Analisi di mutazione del promotore ha rivelato che il sito kappaB2 è necessario per l'inibizione dell'attività di promotore BAX e il sito kappaB3, per la sua attivazione. Tuttavia, l'attivazione del promotore BAX da LMP-1 è stata osservata solo in presenza di inibitori specifici di p65/p50. In tutti gli altri casi, LMP-1 inibito attività promotore BAX. Soprattutto, l'attività antiapoptotici LMP-1 è stato notevolmente diminuito le cellule carenti per BAX. Questi risultati indicano che l'inibizione di Bax può essere un'attività importante antiapoptotici LMP-1.
Inibizione Sinergica Di Replica Citomegalovirus Umano Da Interferone-alfa/beta E L'interferone-gamma
Recenti studi hanno dimostrato che l'interferone gamma (IFN-gamma) superando con l'IFN innata (IFN-alfa e IFN-beta) per inibire l'herpes simplex virus di tipo 1 (HSV-1) replica in vitro. Per determinare se questo fenomeno è condivisa da altri Herpesvirus, abbiamo studiato gli effetti dell'IFN sulla replica citomegalovirus umano (HCMV).
Prova Del HIV Seroreactivity Esposizione E Transitori Archiviati HIV-negativi Gravi Sieri Emofiliaci
Circa il 25% di emofiliaci che spesso sono stati esposti a coagulazione concentrati di fattore (CFC) contaminati con il virus dell'immunodeficienza umana (HIV) sono attualmente HIV sieronegativi. In questo studio, abbiamo cercato di determinare se alcuni di questi individui erano in qualsiasi momento transitoriamente HIV sieropositivi. Nei primi anni ottanta la maggioranza dei pazienti emofilia grave sono stati esposti a CFC contaminati da HIV. Anche se molti di questi emofiliaci divennero HIV-positivi, una piccola percentuale non infettata. Per determinare che se alcuni di questi individui con successo all'infezione virale, abbiamo tentato di documentare la presenza di transitori HIV anticorpi reattivi in campioni di plasma archiviati (1980-1992) da attualmente HIV-negativi gravi emofiliaci che avevano un'alta probabilità di esposizione ripetuta a HIV contaminati CFC. Archiviati al plasma a posteriori sono stati campioni testati utilizzando che un FDA ha approvato l'HIV-1Ab HIV-1/HIV-2 (rDNA) immunoenzimatico (EIA) e un dosaggio di macchia occidentale di HIV-1 (Wb), nessuno dei quali erano commercialmente disponibili fino alla fine del 1980, che fu dopo molti di questi campioni erano stati attirati.
Chinasi Ciclina-dipendente 9 è Necessaria Per L'espressione Di Tumor Necrosis Factor-alpha-stimolato Matrix Metalloproteinase-9 in Cellule Di Adenocarcinoma Del Polmone Umano
Citochine proinfiammatorie (TNF-alfa) fattore di necrosi tumorale-alfa favorisce la progressione del tumore attraverso l'attivazione di attività di matrix metalloproteinase (MMP). MMP-9 è un gelatinasi secernuti da cellule tumorali e cellule stromale circostanti, e contribuisce alla metastasi ed invasione tumorale TNF-alfa-stimolata. Chinasi ciclina-dipendente 9 (CDK9), la componente catalitica di fattore di allungamento positivo trascrizione-b, fosforila residui serina 2 nel dominio C-terminale della RNA polimerasi II per allungamento della trascrizione produttiva ed è up-regolato su esposizione a varie sollecitazioni. Questo studio ha studiato ruoli di CDK9 nell'espressione di TNF-alfa-stimolato MMP-9 in cellule di adenocarcinoma del polmone umano. Cdk9 attività era inibito utilizzando tre diverse strategie, tra cui l'inibitore farmacologico CDK9 5,6-dichloro-1-beta-D-ribofuranosylbenzimidazole (DRB), un CDK9 dominante-negativo e un specifico CDK9 piccolo RNA interferente. Tutti i tre approcci ridotto accumulo TNF-alpha-mediata di MMP-9 in media condizionata come dimostrato dalla gelatina zimogramma. Al contrario, trasformando il fattore di crescita-beta1-indotta accumulo di MMP-2 è stato influenzato da DRB. Espressione del gene della MMP-9 è stato esaminato utilizzando la trascrizione d'inversione PCR in tempo reale e un dosaggio di trasfezione transiente per valutare l'attività di promotore di MMP-9. DRB ridotto l'aumento nei livelli di mRNA di MMP-9 indotta da TNF-alfa, ma non ha senso trasformare l'espressione di MMP-2 mRNA-fattore di crescita-beta1-indotta. Costantemente DRB e dominante-negativo CDK9 completamente abrogata del TNF-alfa-stimolato MMP-9 promotore attività umana. TNF-alfa non ha fatto regolare espressione o localizzazione di CDK9 o dei suoi partner regolamentazione ciclina T. Tuttavia, TNF-alfa stimolato CDK9 associazione Cyclin T e occupazione gene MMP-9 da sia CDK9 e la serina fosforilata 2 forma della RNA polimerasi II. I nostri risultati indicano che CDK9 da intermediario trascrizione indotta da TNF-alpha MMP-9. Interruzione del TNF-alfa segnalazione utilizzando inibitori CDK9 potrebbe servire come una potenziale strategia terapeutica contro l'invasione del tumore e metastasi.
Attivazione Di ProMMP-2 E Src Da HHV8 VGPCR in Cellule Endothelial Arteriose Polmonare Umane
Ipertensione arteriosa polmonare idiopatica (iPAH) è associato con herpesvirus umano 8 (HHV8) infezione e dimostra l'angiogenesi patologica simile a quello osservato con un'altra malattia legata HHV8, vale a dire Sarcoma Kaposi (KS). Soprattutto, HHV8 codificati virale G-protein-coupled receptor (vGPCR) induce lesioni KS in un modello murino. Indagare l'impatto dell'espressione vGPCR sull'attività angiogenica di cellule endothelial arteriose polmonare umane (HPAEC) può produrre spaccato British di disturbi vascolari associati HHV8, particolarmente PAH. HPAECs coltivate erano transduced con vettori retrovirali portando a controllo o vGPCR regioni di codificazione. vGPCR espressione selettivamente attivati matrix metalloproteinase (MMP) -2, una fondamentale matrice modulante enzima durante l'angiogenesi. Un anticorpo neutralizzante membrana tipo 1 di MMP (MT1-MMP) e l'inibitore del tessuto delle metalloproteinasi-2 (TIMP-2) bloccato indipendentemente attivazione di MMP-2 vGPCR-indotta. vGPCR espressione concordemente promosso attivazione di MMP-2 aumentando espressione MT1-MMP diminuendo espressione TIMP-2. vGPCR attivata chinasi Src come dimostrato dalla fosforilazione di Src e la chinasi di adesione focale del substrato (FAK). vGPCR promosso l'angiogenesi di HPAECs come dimostrato da un sostanziale aumento del tubulogenesis in vitro. Gli inibitori di Src PP2 e SU6656 significativamente diminuirono attivazione di MMP-2 indotta da vGPCR e tubulogenesis. I nostri risultati indicano che vGPCR induce attivazione di MMP-2 in HPAECs attraverso la regolazione dell'espressione MT1-MMP e TIMP-2. vGPCR attiva Src e inibizione di tale attivazione abroga l'attivazione proMMP-2 e l'angiogenesi in vitro indotta da vGCPR. L'attuale studio implica vGPCR come agente eziologico in iPAH e identifica Src e MMP-2 come potenziali bersagli terapeutici in HHV8 associato KS e iPAH.
Sarcoma Di Kaposi Associato Herpesvirus G-protein Coupled Receptor Attivazione Di Cyclooxygenase-2 Nelle Cellule Endoteliali Vascolari
Herpesvirus sarcoma di Kaposi associato (KSHV) è l'agente eziologico del sarcoma di Kaposi (KS), una neoplasia altamente vascolarizzato, caratterizzata da cellule endoteliali derivati spindle-shaped tumorali. Cellule endoteliali Microvascolari infettate KSHV dimostrano maggiore espressione di cicloossigenasi-2 (COX-2) e lesioni KS hanno alti livelli di prostaglandina E2 (PGE2), un breve eicosanoid dipende cyclooxygenase attività che è stata collegata a patogenesi di altre neoplasie. Per determinare se l'aumentata espressione di COX-2 e PGE2 produzione è mediata dall'angiogenesi e tumorigeno KSHV-codificato G-protein coupled receptor (vGPCR), abbiamo sviluppato un retrovirus ricombinante di vGPCR espressa in umano ombelicale Vascular Endothelial cellule (HUVEC).
Tumori Ovarici Iperesprimono La Proteina Antimicrobica HCAP-18 E Suoi Derivati LL-37 Aumenta L'invasione E La Proliferazione Delle Cellule Di Cancro Ovarico
Il ruolo del peptide pro-infiammatorio, LL-37 e sua pro-form, umana antimicrobica proteina cationica 18 (hCAP-18), nello sviluppo del cancro e la progressione è scarsamente compreso. Nel tessuto danneggiato e infiammato, LL-37 funziona come un fattore chemoattractant, mitogeno e pro-angiogenico, suggerendo che il peptide può potenziare la progressione del tumore. Lo scopo di questo studio era di caratterizzare la distribuzione dell'hCAP-18/LL-37 nel tessuto ovarico normale e cancerose e di esaminare gli effetti di LL-37 su cellule di carcinoma ovarico. Espressione dell'hCAP-18/LL-37 era localizzata alle cellule immunitario e granulosa del normale tessuto ovarico. Al contrario, tumori ovarici visualizzato livelli significativamente più elevati di hCAP-18/LL-37 dove espressione è stata osservata nel tumore e cellule stromali. Espressione della proteina è stata statisticamente rispetto al grado di densità di infiltrazione e microvessel cellula immunitaria nei tumori ovarici epiteliali derivate e per entrambi è stata osservata una correlazione significativa. È stato dimostrato che il tumore ovarico tessuto lisati e linee di cellule di carcinoma ovarico express hCAP-18/LL-37. Trattamento delle linee di cellule di carcinoma ovarico con ricombinante LL-37 stimolata la proliferazione, la chemiotassi, invasione e matrix metalloproteinase espressione. Questi dati dimostrano per la prima volta che hCAP-18/LL-37 è significativamente overexpressed in tumori ovarici e suggerire LL-37 può contribuire alla tumorigenesi ovariche attraverso la stimolazione diretta delle cellule tumorali, iniziazione dell'angiogenesi e il reclutamento di cellule del sistema immunitario. Questi dati forniscono ulteriori prove del rapporto esistente tra molecole pro-infiammatorie e progressione del cancro ovarico.
Epidermal Growth Factor-stimolato Extravillous Cytotrophoblast Motilità è Mediata Dall'attivazione Della PI3-K, Akt E Chinasi Di Proteina Mitogene-attivata P38 Sia P42/44
Invasione del trofoblasto è uno schema temporalmente e spazialmente regolamentato di eventi che possono dettare l'esito della gravidanza. L'evidenza suggerisce che il potente mitogeno epidermal growth factor (EGF) regola la differenziazione cytotrophoblast (CTB) e l'invasione durante la gravidanza iniziale.
Inibizione Del Peptide Dell'infezione Da Citomegalovirus Umano
Citomegalovirus umano (HCMV) è la più diffusa infezione virale congenita negli Stati Uniti e in Europa causando significativa morbidità e mortalità per la madre e il bambino. HCMV è anche un agente patogeno opportunistico in individui immunocompromessi, compresi virus dell'immunodeficienza umana (HIV)-infettato i pazienti con AIDS e organi solidi e i destinatari di trapianto di cellule staminali allogeniche. Gli attuali trattamenti per malattie associate di HCMV sono insufficienti a causa la comparsa di resistenza indotta da farmaci e citotossicità, necessitando di nuovi approcci per limitare l'infezione di HCMV. Lo scopo di questo studio era quello di sviluppare peptidi terapeutici targeting glicoproteina B (gB), una glicoproteina principale di HCMV che è altamente conservata in tutta la famiglia Herpesviridae, che inibiscono specificamente fusione della busta virale con la membrana della cellula ospite prevenendo infezioni e voce di HCMV.
