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Articles by Daniel Anacker in JoVE
JoVE Immunology and Infection
初代ヒトケラチノサイトからカドヘリン文化の生成
1Department of Microbiology & Immunology, University of North Carolina-Chapel Hill, 2Lineberger Cancer Center, University of North Carolina-Chapel Hill
不定冠詞
Other articles by Daniel Anacker on PubMed
小さなキャプシド蛋白質 PORF65 はカポジ肉腫関連ヘルペス ウイルスのカプシドのアセンブリのために不可欠です。
カポジ肉腫関連ヘルペス ウイルス （KSHV） は KS 腫瘍、多中心性キャッスルマン病、およびプライマリ胸水リンパ腫の病因のエージェントです。その他ヘルペス ウイルスのカプシドのような KSHV キャプシド六つのタンパク質の構成されて、20 面体構造です。キャプシド シェル主要カプシド蛋白、2 つのトリプレックス蛋白質および小さいキャプシド蛋白質の成っています。足場蛋白質とのプロテアーゼは、内部のスペースを占有します。KSHV キャプシドのアセンブリは、単純ヘルペス ウイルスのタイプ 1 （HSV-1） を決定する同様の方法で発生すると考えられます。私たちの目標はバキュロ ウイルス発現ベクター系を用いた昆虫細胞 KSHV キャプシドを組み立てることでした。6 KSHV キャプシド開いたリーディング ・ フレームされたクローンと Sf9 細胞で発現した蛋白質: pORF25 （主要カプシド蛋白） pORF62 （三重 1) pORF26 (トリプレックス 2) pORF17 (プロテアーゼ） pORF17.5 （足場タンパク質） と pORF65 （小さなキャプシド蛋白質）。昆虫細胞これらバキュロに重感染したときに、内部コア構造体に含まれている角度のキャプシドは容易に感染細胞の従来の電子顕微鏡によって観察されました。カプシドも感染細胞からレート速度沈降を使用して容易に分離されました。免疫電子顕微鏡検査の方法でこれらのカプシドこれらキャプシドの pORF65 の正しい立体構造を示す KSHV 陽性ひと血清中に関して同様の pORF65 に対する抗血清に反応すること見られました。トリプレックス蛋白質を表現するどちらかウイルス重感染から省略されたときは、キャプシドを組み立てるかできない;HSV-1 感染細胞で作ら観察に似ています。足場蛋白質を表現するウイルスが除外された場合は、20 面体構造は達成できませんでした大きなオープンのシェルは感染細胞の核に見られました。この蛋白質は欠席した場合カプシドを形成しなかったいないこと pORF65 の存在はキャプシドのアセンブリを必要だった感染細胞と速度速度沈降実験の微細構造解析による両方によって判断されるよう。したがって、この研究の結果を新規 KSHV、小さなキャプシドタンパク主要キャプシドとトリプレックス蛋白質のようなキャプシド シェル アセンブリに対して不可欠であることを見つけることです。
特異的保存されたブドウ球菌 SH3b_5 細胞壁結合ドメイン増加 Staphylolytic と Streptolytic の活動溶連菌ファージ エンドリシン ドメインに協議します。
ブドウ球菌のペプチドグリカン加水分解酵素は、抗菌薬の潜在的な新しいソースです。大きなサブセット C ターミナル SH3b_5 細胞壁結合ドメインを隠し持っています。これらの C 末端ドメインは細胞壁の正確な認識といくつかの endolysins の後続 staphylolytic 活動のため必要があると示されています。ブドウ球菌性の 50 以上の蛋白質または蛋白質の 5 つの反復性の高いグループを降伏を含む SH3b ドメインが整列されたファージの起源。代表 C テルミニからこれら 5 つのグループとの同族体特定されていない、六つのブドウ球菌性タンパク質が整列された特異的保存残基が重複する 2 つの異なる SH3b_5 サブグループを明らかにします。この研究の背後にある前提は、特に異種蛋白質融合コンストラクトの anti-staphylococcal の有効性を高めるために悪用これらのブドウ球菌性ドメインによって授与プロパティ バインディング ユニークな細胞壁がある可能性がありますです。2 つのサブグループの機能の違いを識別するには、ネイティブの Cpl 7 細胞壁結合ドメイン レンサ球菌の LambdaSa2 エンドリシンのブドウ球菌の SH3b ドメインの両方のサブグループからに置き換えられました。SH3b ドメイン lysostaphin (バクテリオシン) または LysK (バクテリオファージ エンドリシン) から約 5 倍のレンサ球菌エンドペプチダーゼ ドメイン上を授与 staphylolytic 活動と驚くほどブドウ球菌 SH3b ドメインは、常にブドウ球菌性固有ではない重要な streptolytic 活性を維持これら同じの融合で増加します。溶菌活性の違いの比較 LambdaSa2 エンドペプチダーゼ ドメインによってどちらか LysK を授与または lysostaphin SH3b ドメイン以上、2 つの要因によって異なっていた。ペプチドグリカン加水分解酵素の系列のコレクションを通して、3 新しい推定イントロンを含んでいるバクテリオファージ エンドリシン遺伝子公共のデータ セットのファージ G1、X 2、85 で識別されました。
