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Articles by Daniel Anacker in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Generación de las Culturas Raft organotípicos de queratinocitos humanos primarios
1Department of Microbiology & Immunology, University of North Carolina-Chapel Hill, 2Lineberger Cancer Center, University of North Carolina-Chapel Hill
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Other articles by Daniel Anacker on PubMed
Cápside Pequeña Proteína PORF65 Es Esencial Para El Montaje De La Cápsida De Herpesvirus Asociado Sarcoma De Kaposi
Herpesvirus asociado sarcoma de Kaposi (KSHV) es el agente etiológico para tumores de KS, enfermedad de Castleman multicéntrico y linfomas primario de la efusión. Como otro herpesvirus icosahédrica, la cápside KSHV es una estructura icosaédrica compuesta por seis proteínas. La cáscara de la cápside está compuesta por la proteína de la cápside principales, dos proteínas triples y la proteína de la cápside pequeño. La proteína y la proteasa ocupan el espacio interno. La Asamblea de la cápsida KSHV se piensa para ocurrir en forma similar a la que se determinó para el virus de herpes simple tipo 1 (HSV-1). Nuestro objetivo era montar icosahédrica KSHV en células de los insectos utilizando el sistema de vector de expresión de baculovirus. Seis cápside KSHV se clonaron marcos de lectura abierta y las proteínas expresadas en células Sf9: pORF25 (importante proteína de la cápside), pORF62 (1 triple), pORF26 (2 triples), pORF17 (proteasa), pORF17.5 (proteína) y también pORF65 (proteína de la cápside pequeño). Cuando las células de los insectos estaban coinfectadas por estos baculovirus, cápsida angular que contenían estructuras internas principales fácilmente fueron observada por microscopía convencional de las células infectadas. También fueron aislado fácilmente cápsida de células infectadas mediante el uso de sedimentación de velocidad de tasa. Con métodos de microscopía de electrones inmuno, estos icosahédrica parecían reactiva a antisueros a pORF65 así como suero humano KSHV-positivo, indicando la conformación correcta de pORF65 en estos icosahédrica. Cuando cualquiera de los dos virus que expresa las proteínas triples fue omitido de la coinfección, no montar cápsida; similar a las observaciones en células infectadas con HSV-1. Si el virus que expresa la proteína fue excluido, grandes conchas abiertas que no logró estructura icosaédrica fueron vistos en los núcleos de las células infectadas. La presencia de pORF65 era necesaria para el montaje de la cápside, en eso icosahédrica no formó si esta proteína era ausente según lo juzgado por tanto por análisis ultraestructural de las células infectadas y velocidad velocidad sedimentación experimentos. Así, un resultado novedoso de este estudio es la conclusión que la cápside pequeño de KSHV, como los principal cápside y triples proteínas, es esencial para la Asamblea de cáscara de cápside.
Dominios Conservados Diferencialmente Estafilococos SH3b_5 Pared Celular Vinculantes Confieren Mayor Staphylolytic Y Actividad Streptolytic a Un Dominio De Endolysin Prophage Estreptocócica
Peptidoglicano estafilocócica hidrolasas son una nueva fuente potencial de agentes antimicrobianos. Un gran subconjunto alberga c-terminal SH3b_5 dominios de unión de pared celular. Estos dominios c-terminal han demostrado ser necesarios para el reconocimiento exacto de pared celular y actividad posterior staphylolytic de algunos endolysins. Más de cincuenta proteínas de estafilococos u origen del fago fueron alineados con los dominios SH3b, cediendo cinco grupos altamente repetitivos de proteínas. Representante C-termini de estos grupos de cinco y seis proteínas estafilocócicas que no homólogos han sido identificados, fueron alineadas, revelando dos subgrupos distintos de SH3b_5 con solapadas pero residuos conservados diferencialmente. Una premisa detrás de esta investigación es que pueden existir única pared celular vinculante propiedades atribuidas por estos dominios estafilocócicas que podrían ser aprovechados para mejorar la eficacia anti-staphylococcal en construcciones de fusión de proteínas heterólogas específicamente. Para identificar las diferencias funcionales entre los dos subgrupos, los nativos dominios de unión de pared celular de Cpl-7 de los estreptococos endolysin LambdaSa2 fueron reemplazados por estafilococos SH3b dominios de ambos subgrupos. Dominios de SH3b de lysostaphin (bacteriocinas) o LysK (fago endolysin) resultaron en un aumento de aproximadamente 5 x en staphylolytic actividad conferidos en el dominio de la endopeptidasa estreptocócica y sorprendentemente estas fusiones mismas mantenidas actividad streptolytic significativa, sugiriendo que los estafilococos dominios SH3b no son siempre específicos de estafilococos. Una comparación de las diferencias en la actividad lítica conferidos en el dominio de LambdaSa2 endopeptidasa por cualquier LysK o lysostaphin SH3b dominio diferenció por no más de un factor de dos. A través de la colección de secuencias de peptidoglicano hidrolasa, se identificaron tres supuestos que contienen intrón Fago endolysin genes nuevos en conjuntos de datos públicos para los phages G1, X 2 y 85.
