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Articles by Danilo S. Boskovic in JoVE
JoVE Clinical and Translational Medicine
Misure biochimiche di ipossia neonatale
1Division of Biochemistry, Department of Basic Sciences, Loma Linda University, 2Division of Physiology, Department of Basic Sciences, Loma Linda University
Un metodo รจ descritto per misurare i marcatori biochimici di ischemia-ipossia neonatale. L'approccio utilizza cromatografia liquida ad alta pressione (HPLC) e gas cromatografia spettrometria di massa (GC / MS).
Other articles by Danilo S. Boskovic on PubMed
Riconoscimento Indipendente Dal Sito Attivo Di Substrati E Prodotto Da Dipendente16 Bovina: Un'energia Di Risonanza Di Fluorescenza Trasferimento Studio
La conversione della protrombina in trombina è catalizzata da dipendente16, un enzima complesso composto il serin proteinasi fattore Xa e una proteina cofattore, fattore Va, assemblati su membrane. Studi cinetici indicano che le interazioni con i siti di riconoscimento esteso macromolecolare (exosites), piuttosto che il sito attivo della dipendente16 sono i principali determinanti di affinità per il substrato o il prodotto di associazione. Forniamo ora una valutazione indipendente dal modello di tali idee da studi fisici di interazione del substrato derivati e prodotto con dipendente16. Il complesso enzimatico è stato assemblato utilizzando Xa modificato con un fluorescente peptidilica clorometil chetone a occludere irreversibilmente il sito attivo. Associazione è stato derivato da prethrombin 2-dipendente perturbazioni nella fluorescenza di Oregon Green(488) presso il sito attivo della dipendente16. Associazione indipendente dal sito attivo è stato stabilito anche inequivocabilmente dalla fluorescenza resonance energy transfer tra 2,6-dansyl legato al sito attivo della Xa ed eosina legato ai siti attivi di trombina o meizothrombin des frammento 1. Paragonabile interprobe distanze ottenute da queste misurazioni suggeriscono che substrato e prodotto equivalentemente interagire con l'enzima. Concorso stabilito la capacità di una gamma di substrato o prodotti derivati da associare in modo reciprocamente esclusivo a dipendente16. Costanti di dissociazione di equilibrio ottenuti per l'associazione indipendente dal sito attivo della protrombina, prethrombin 2, meizothrombin des frammento 1 e trombina a dipendente16 erano paragonabili con loro affinità dedotte da studi cinetici utilizzando l'enzima attivo. I nostri risultati direttamente stabilire che associazione affinità è determinato principalmente dall'interazione mediata exosite della sia il substrato, sia possibile intermedi, o prodotto con dipendente16. Un unico tipo di interazione associazione exosite unità evidentemente affinità e vincolante specificità attraverso la graduale reazioni necessarie per le reazioni di scissione in due della protrombina attivazione e rilascio del prodotto.
Fluorescenza Di Campioni Commerciali Pluronic F127: Micellizzazione Temperatura-dipendente
Vi presentiamo un nuovo approccio di utilizzo il Butilidrossitoluene (BHT) antiossidante trovato in campioni Pluronic F127 commerciali come un marcatore di aggregazione del polimero. Il marcatore BHT è stato confrontato con i metodi di dispersione della luce statica e colorante pirene come un modo per misurare la concentrazione micellare critica (CMC) e la temperatura critica micellare (CMT). Le transizioni di n→π(∗) di BHT sono sensibili per il microambiente come dimostrato riportando le intensità frazionale della sua eccitazione (≈280nm) e picchi di emissione (≈325nm). Il BHT è più sensibile alle variazioni di temperatura di concentrazione. Il coefficiente aumenta ≈40-piega pirene rispetto a ≈2-piega per BHT quando la temperatura è aumentata da 25 a 37 ° C. Valori CMT determinati usando la fluorescenza BHT diminuiscono con l'aumento della concentrazione di F127. I nostri risultati mostrano che il BHT può essere utilizzato come un indicatore affidabile dei cambiamenti nel microambiente del Pluronic F127.
Enterocolite Necrotizzante è Associato Con Lesioni Intestinali Neonatali
Abbiamo ipotizzato che un sottoinsieme dei neonati prematuri ha compromesso della mucosa intestinale, subclinica che predispone allo sviluppo di necrotizzante (NEC) enterocolite giorni o settimane più tardi.
Un Modello Animale Per Misurare L'effetto Di Procedure Comuni Di NICU Sul Metabolismo ATP
Neonati esposti a procedure comuni unità di terapia intensiva neonatale (NICU) mostrano alterazioni nella frequenza cardiaca, pressione arteriosa e saturazione di ossigeno. Tuttavia, non è chiaro se questi cambiamenti fisiologici aumentano l'utilizzo di adenosina trifosfato (ATP), aumentando potenzialmente il rischio di ipossia tissutale nei neonati medicamente fragili. Acido urico al plasma è un indicatore comunemente usato di maggiore utilizzazione di ATP perché i livelli di acido urico aumentano quando è migliorato il consumo di ATP. Per esaminare l'effetto di una procedura comune di NICU sulle concentrazioni plasmatiche di acido urico, abbiamo sviluppato un modello che consente di monitorare acuta di questo marcatore biochimico nel plasma in conigli 7 - a 9 giorni di età. Nel nostro studio pilota, siamo esposti neonatale conigli a una lancia singolo tacco 2,5 hr dopo il posizionamento del catetere. Abbiamo misurato la concentrazione di acido urico prima e 30 min dopo la lancia tallone e rispetto risultati a livelli negli animali di controllo non esposti a lancia il tallone. I nostri dati pilota mostrano una differenza significativa nella concentrazione di acido urico nel tempo tra i gruppi di controllo e tallone lance (46.2 ± 7.1 μM vs 54,7 ± 5,8 μM, rispettivamente, p =.027 dentellatura Calcolo della variazione percentuale dal basale mostrava acido urico aumentando la concentrazione nei conigli esposti a lance tallone e diminuendo in conigli di controllo (1,5 ± 4,7% vs-16.1 ± 4,2%, rispettivamente, p = 03 dentellatura Questi dati suggeriscono che questo modello animale può essere utilizzato con successo per esaminare l'effetto biochimico di procedure comuni di NICU, come lance tallone, sui marcatori del metabolismo di ripartizione e Purina ATP.
Cambiamenti Nell'espressione Del MRNA Dei Recettori Dell'adenosina Nella Parodontite Cronica Umana
Obiettivo: Per chiarire l'eziologia della parodontite, questo studio si è concentrato sui recettori dell'adenosina (AR) profili di espressione (A1AR, A2AAR, A2BAR e A3AR) in tessuti malati parodontali. Metodi: Livelli di espressione del gene del recettore dell'adenosina nella gengiva umana da 15 pazienti con tessuti gengivali sani (gruppo di controllo) e 15 pazienti che hanno esposto la parodontite cronica grave (gruppo test) sono stati misurati utilizzando quantitativi reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). Risultati: Il modello di espressione del mRNA cambiato in parodontite cronica umana: il A1AR sono diminuiti del 20%, A2AAR 2.5-fold aumentato, A2BAR aumentato 3.7-fold e A3AR sono diminuiti del 70% rispetto a quello della gengiva sana. Conclusione: Infiammazione del tessuto gengivale è associato (1) un'espressione immutata A1AR, (2) un'aumentata espressione di A2AAR e A2BAR e (3) una diminuita espressione di A3AR. Analisi di regressione logistica ha indicato che il cambiamento nei modelli di espressione può essere utilizzato per diagnosticare/predire parodontite. Questo risultato indica che il profilo di espressione dei recettori dell'adenosina è cambiato in parodontite con il potenziale per la futura applicazione clinica.
