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Articles by David A. Knecht in JoVE
JoVE General
Mesure de la chimiotaxie cellulaire avec ECIS / Taxis
1Molecular and Cell Biology, University of Connecticut, 2University of Connecticut
Le système ECIS / Taxis est un système automatisé, en temps réel test qui mesure la chimiotaxie cellulaire. Dans cet essai, les cellules se déplacent sous une couche d'agarose pour arriver à une électrode cible. Mouvement cellulaire est mesurée par l'apparition de la résistance en courant alternatif courant 0.
Other articles by David A. Knecht on PubMed
Cinétique De La Liaison, L'absorption Et La Dégradation De Vivre Des Bactéries (DsRed) Fluorescentes De Dictyostelium Discoideum
La cinétique de la liaison, l'absorption et la dégradation des bactéries par végétative Dictyostelium amoeba en utilisant Escherichia coli exprimant la protéine fluorescente recombinante DsRed ont été caractérisés. Il y a des avantages significatifs à l'utilisation de bactéries exprimant DsRed pour des dosages de la phagocytose. Expression stable de la protéine fluorescente, DsRed, fournit les bactéries vivantes avec un signal fluorescent interne lumineux qui est dégradable dans la voie de phagolysosomal. Contrairement aux essais avec bactéries chimiquement étiquetées ou de billes de latex, les bactéries sont vivants et possèdent une surface externe naturelle et inchangée pour l'interaction de récepteur. Cellules de Dictyostelium rapidement lient et phagocytent les bactéries DsRed. Expériences montrent que le signal provenant de DsRed est dégradé avec une demi-vie d'environ 45 min. Pour distinguer les bactéries intériorisées de ceux liés à la surface, un test a été développé dans lequel sodium azide a été utilisée pour libérer les particules liée à la surface. Étonnamment, libération de particules de surface semble être indépendante de la fonction de la myosine II. À l'aide de ce test, il a été démontré que l'absorption de bactéries dans les cellules est extrêmement rapide. Après une incubation de 1 minute, 20 % du signal est dérivé de bactéries intériorisées. La proportion du signal provenant de bactéries intériorisées augmente progressivement et atteint 50 % à l'état stable. Ce test sera utile dans les études de la machinerie moléculaire de la phagocytose et du trafic de vésicules post-internalization.
Visualisation De La Dynamique De L'actine Durant La Macropinocytose Et L'exocytose
Macropinocytose du nouvellement formé réside et exocytose de post-lysosomes ont été visualisées à l'aide d'une sonde de protéine verte fluorescente qui se lie spécifiquement aux filaments d'actine-F. Association de l'actine F avec macropinocytose commence comme un v. invagination de la membrane. Élargissement de la vésicule s'effectue par un mouvement vers l'intérieur du point proximal du V, mais aussi une saillie vers l'extérieur à la pointe du V pour former une invagination allongée. Finalement, la saillie ferme à sa marge distale pour devenir une vésicule et est déplacée de façon centripète tout en récupérant sa forme circulaire. La vésicule perd son manteau d'actine moins d'une minute après internalisation. Une heure plus tard, post-lysosomal des vésicules est devenu faiblement entourés d'actine tandis que toujours cytoplasmique. Certains de ces vésicules vers la membrane plasmique, ancré et puis expulsé de leur contenu. Un peu avant la vésicule contenu ont commencé à disparaître, en liaison de l'actine F avec la vésicule a observé une augmentation. Elle a été suivie rapide contraction de la vésicule et puis la disparition du signal de l'actine une fois que le contenu a été publié. Ces résultats montrent que des changements dynamiques associées à la membrane vésiculaire filaments actine accompagnent endocytose et exocytose.
Rho-kinase Et La Myosine II Contrôle Coupe Phagocytaires Formation Au Cours De La CR, Mais Pas FcgammaR, La Phagocytose
La phagocytose par les récepteurs Fcgamma (FcgammaR) ou des récepteurs du complément 3 (CR) exige la polymérisation de l'actine induite par le complexe Arp2/3, bien que chaque récepteur utilise une voie de signalisation distincte. RAC et Cdc42 sont requis pour l'actine et recrutement de complexe Arp2/3 au cours de la FcgammaR la phagocytose, tandis que Rho contrôle Assemblée d'actine dans les phagosomes CR. Pour mieux comprendre le rôle de Rho dans la phagocytose CR, nous avons testé l'idée qu'une cible connue de Rho, Rho-kinase (République de Corée), pourrait contrôler phagocytaires coupe formation et/ou immersion dans les flammes de particules. Inhibiteurs de la République de Corée (République de Corée dominant négatif et Y-27632) et de la cible en aval de la République de Corée, la myosine-II (ML7, BDM et négatif dominant la myosine-II), ont été utilisés pour tester cette idée. Nous avons trouvé que l'inhibition de la Rho--> ROK--> voie de myosine-II a provoqué une accumulation réduite de Arp2/3 complexes et F-actine autour des particules liées, qui a conduit à une réduction de CR par l'intermédiaire d'une durée de phagocytaire. La phagocytose médiée par les FcgammaR, en revanche, était indépendante de l'activité de Rho ou ROK et dépendait uniquement de la myosine-II d'internalisation de la particule, pas pour la formation de coupe de l'actine. Alors que les myosines ont été précédemment impliqués dans la phagocytose de FcgammaR, à notre connaissance, c'est la première démonstration d'un rôle pour la myosine-II dans la phagocytose CR.
RacB Régule La Fonction Du Cytosquelette Chez Dictyostelium Spp
Jusqu'à présent, 14 homologues des mammifères Rac protéines ont été identifiées dans Dictyostelium. On ignore si chacun de ces gènes a une fonction unique ou dans quelle mesure ils jouent un rôle superflu dans l'organisation du cytosquelette d'actine. Afin d'étudier la fonction spécifique du RacB, nous avons exprimé sous condition sauvage (WT-RacB), dominant négatif (N17-RacB) et constitutivement activée (V12-RacB) versions de la protéine. Sur l'induction, les cellules exprimant V12-RacB cessé de croître, détachent de la surface et forment de nombreuses protubérances de surfaces sphériques en cellules que surexprimant WT-RacB est devenu aplatie sur la surface. En revanche, cellules surexprimant N17-RacB ne montrent aucune anomalie morphologique significative. Les protubérances de surfaces observés dans les cellules V12-RacB semblent être axée sur l'actine protubérances parce qu'ils ont été enrichis en F-actine et être inhibée par de cytochalasine un traitement. Les saillies dans les cellules de V12-RacB n'exigeaient pas l'activité de la myosine II, qui les distingue des bulles formées par les cellules de type sauvage sous contrainte. Enfin, nous avons examiné les conséquences fonctionnelles de l'expression de type sauvage et le mutant RacB. La phagocytose, endocytose et taux d'efflux de phase fluide ont été réduits dans toutes les lignées de cellules exprimant des protéines de la RacB, mais la plus forte baisse a été observée chez les cellules exprimant V12-RacB. D'après ces résultats, nous concluons que comme d'autres membres de la Rho famille, RacB induit la polymérisation de l'actine, mais les conséquences de l'activation semblent être différent des autres protéines de Dictyostelium Rac étudiées jusqu'à présent, entraînant des modifications morphologiques et fonctionnelles différentes dans les cellules.
Réticulation Des Filaments D'actine Et De Myosine II Est Un Contributeur Majeur à L'intégrité Corticale Et La Motilité Cellulaire Dans Les Environnements Restrictifs
Les cellules doivent souvent déménager dans un environnement local qui limite physiquement locomotion, comme lors de l'extravasation ou invasion métastatique. Pour modéliser ces événements, nous avons développé un essai dans lequel les amibes Dictyostelium végétatives subissent chimiotactisme sous une couche de gel d'agarose vers une source d'acide folique [Laevsky, G. et Knecht, D. A. (2001). Biotechniques 31, 1140-1149]. Comme la concentration d'agarose est passée de 0,5 % à 3 % les cellules sont plus inhibés dans leur capacité à se déplacer dans le cadre de l'agarose. La contribution de II de la myosine et l'actine réticulation des protéines à la circulation des cellules dans cet environnement restrictif a maintenant été examinée. Cellules dépourvues de chaîne lourde de myosine II (mhcA-) sont incapables de migrer dans le cadre de superpositions d'agarose supérieure à 0,5 %, et même à cette concentration, ils passent à proximité de la fosse. Alors qu'il tentait de se déplacer, les cellules deviennent étirés et fragmentés en raison de leur incapacité à se rétracter leurs uropodes. À des concentrations plus élevées d'agarose, les cellules mhcA saillent pseudopodes sous l'agarose, mais sont incapables de tirer le corps cellulaire sous. Compatible avec un rôle pour la myosine II en général stabilité corticale, GFP-myosine dynamiquement localise vers le cortex latéral et postérieur des cellules se déplaçant dans le cadre d'agarose. Manque l'essentielle chaîne légère de la myosine II (mlcE-), les cellules n'ont aucune activité motrice de la myosine mesurables II, était encore capables de se déplacer normalement dans le cadre de toutes les concentrations d'agarose. Mutants dépourvus d'ABP-120 ou alpha-actinine pouvaient aussi se déplacer sous l'agarose à des taux semblables aux cellules de type sauvage. Nous émettons l'hypothèse que la myosine stabilise le cortex de l'actine par le biais de son activité d'édition absolue, et non sa motricité et cette activité est nécessaire et suffisant pour le maintien de l'intégrité corticale des cellules en mouvement dans un environnement contraignant. L'actine Linking alpha-actinine et ABP-120 ne semblent pas jouer comme les grands un rôle comme la myosine II en fournissant cette intégrité corticale.
L'apoptose Induite Par La Silice Dans Les Macrophages Alvéolaires De Souris Est Initiée Par L'activité De L'enzyme Lysosomale
Des études antérieures dans notre laboratoire ont montré que la silice (-quartz) exposition de particules d'une lignée de cellules de macrophages alvéolaires de souris (MH-S) provoque une dépolarisation mitochondrique et activation de la caspase 3 et 9, qui contribuent à l'apoptose. Cependant, voies cellulaires menant à ces résultats n'ont pas largement étudiés. Les premières études ont révélé qu'exposition à la silice suscite la perméabilité après 1 h, comme en témoignent la fuite de dextran conjugué FITC et l'acridine orange. Ensuite, nous avons évalué un rôle pour le compartiment acide lysosomal dans l'apoptose. Cellules prétraitement avec le lysosomotropiques faible base d'ammonium chlorure, augmenter le pH lysosomal, ont montré une diminution de caspase activation et fragmentation de l'ADN apoptotique. MH-S cellules prétraitées avec pepstatine A, un inhibiteur de la cathepsine D, ont montré une diminution de caspase 9 et 3 activation ainsi que diminution pourcentage de cellules qui sont devenus apoptotique. Fragmentation de l'ADN et l'activation de la caspase 9 et 3 diminuent également dans les cellules prétraitées avec despiramine, un inhibiteur de la sphingomyélinase acide lysosomale. Silice prétraité avec de l'aluminium lactate (pour des sites actifs surfaces arrondies) réduit caspase activation et l'apoptose. Bien qu'aluminium lactate imprégnées silice induit toujours perméabilité lysosomale (par une fuite de la FITC-dextran), une mesure de l'intégrité des lysosomes et fonction a proposé une réduction de la mesure et/ou la nature des blessures lysosomale (par la rétention de l'acridine orange). Un rôle pour les espèces réactives de l'oxygène (ROS) a été étudié afin d'explorer une autre voie pour l'apoptose induite par la silice en plus des enzymes lysosomales ; Toutefois, aucun rôle pour ROS n'était évident. Ainsi, après exposition à la silice, blessure lysosomal précède l'apoptose et l'apoptose, voie de signalisation comprend la cathepsine D et sphingomyélinase acide.
Phosphatidylinositol-4, 5-bisphosphate Hydrolyse Redirige Actine Remodelage Au Cours De La Phagocytose
Les GTPases Rho jouent un rôle critique à initier la polymérisation de l'actine au cours de la phagocytose. En revanche, les facteurs diriger le démontage de l'actine F nécessaire pour la fission de la vacuole phagocytaire sont mal définis. Nous avons utilisé des protéines chimériques fluorescentes pour surveiller la dynamique de la liaison de l'actine et active Cdc42 et Rac1 avec le phagosome formant. Actine n'a été trouvée à disparaître de la base de la formation phagosome avant scellement était complète, Rac1/Cdc42 activité persistante, ce qui suggère que la cessation d'activité GTPase n'est pas le déterminant principal du démontage de l'actine. En outre, entièrement internalisé phagosomes conçus pour associer constitutivement actif Rac1 ont montré peu associée à F-actine. La disparition du phosphatidylinositol-4, 5-bisphosphate (PI(4,5)P(2)) de la membrane du phagosome étroitement parallèle au cours du démontage de l'actine. De plus, l'inhibition de l'hydrolyse PI(4,5)P(2) ou de PI(4,5)P(2) une production accrue de la surexpression de la phosphatidylinositol kinase de phosphate j'ai empêché le démontage de l'actine nécessaire à l'achèvement de la phagocytose. Ces observations suggèrent que l'hydrolyse du PI(4,5)P(2) dicte le remodelage de l'actine nécessaire à l'achèvement de la phagocytose.
Médiatise Métallothionéine Leucocytes Chimiotactisme
Métallothionéine (MT) est un riche en cystéine, métal-protéine de liaison qui peut être induite par une variété d'agents. Modulation des taux de MT a également été montré de modification des fonctions spécifiques du système immunitaire. Nous avons remarqué que les gènes MT cartographier à proximité des chimiokines CCL17 et CX3CL1. Motifs cystéine qui caractérisent ces chimiokines sont également trouvé dans la séquence MT ce qui suggère que MT peut également agir comme un facteur chimiotactique.
Sous-agarose Chimiotactisme De Dictyostelium Discoideum
Dans l'état végétatif, Dictyostelium amibes sont chimiotactiques vers ptérines libérés par des bactéries, alors que durant le développement multicellulaire, ils deviennent chimiotactiques pour endogène produit cAMP. Une variété de tests ont été utilisés pour visualiser et quantifier le mouvement chimiotactique. Sous-agarose chimiotactisme fournit un test simple et flexible qui permet l'imagerie à haute résolution et quantification du comportement motilité des cellules individuelles et des populations par lumière transmise et la microscopie de fluorescence. Le test nécessite des cellules à déformer une matrice solide mais souple ; par conséquent, il fournit également un moyen de mesurer les défauts dans la capacité des cellules mutantes à se déplacer dans ces conditions restrictives.
Automatisés En Temps Réel Mesures De La Chimiotaxie Des Leucocytes
Nous avons précédemment décrit un système automatisé (ECIS / taxis) pour mesurer le déplacement chimiotactique de Dictyostelium amibes dans un gradient de l'acide folique [Hadjout, N., Laïevski, G., Knecht, DA et Lynes, MA, 2001. Automatisé en temps réel la mesure de la motilité cellulaire chimiotactique. Biotechniques 31, 1130-1138.]. Dans le système ECIS / taxis, les cellules migrer dans un environnement sous-agarose, et leur position est contrôlée par détermination de la variation d'impédance causées par des cellules rampants sur la surface d'une électrode. Dans ce rapport, nous montrons que la chimiotaxie des leucocytes primaires et immortalisées en réponse à compléter (C5a) pourrait être mesurée en utilisant l'ECIS / système de taxis. Plusieurs modifications apportées à la conception de l'électrode cible ont été testés, et une perpendiculaire électrode linéaire à la direction du mouvement a été trouvé pour augmenter la sensibilité et la fiabilité du test. Utilisation des ECIS optimisés / test des taxis, la dose-réponse des neutrophiles et des globules blancs 265-9C cellules a été établie et comparée à l'essai la chambre de Boyden. Le système de dosage ECIS / taxis peuvent être utilisés pour comparer le mouvement des différents types de cellules, afin d'évaluer l'effet des gradients chimiotactiques complexes, ou pour déterminer les effets des produits pharmaceutiques sur la motilité chimiotactique.
Microscopie De Force De Traction De Dictyostelium Révèle Les Rôles Distincts Pour Moteur II De Myosine Et Actine-réticulation Activité En Mouvement Cellulaire Polarisée
Mouvement cellulaire continu nécessite la coordination des forces protrusive sur le bord d'attaque avec les forces contractiles à l'arrière de la cellule. La myosine II est requise pour générer la force contractile nécessaire pour faciliter la rétraction ; Cependant, des cellules de Dictyostelium qui manquent de la myosine II (mhcA-) sont toujours mobiles. Pour enquêter directement sur le rôle de la myosine II de contractilité, nous avons utilisé un test de force de traction de gélatine pour mesurer l'ampleur et la redistribution dynamique des contraintes de traction générées en déplaçant au hasard sauvage, II essentielle chaîne légère de myosine nulle (mlcE-) et mhcA-cellules. Nos résultats montrent que pour chaque type de cellule, périodes de rapide, réalisé mouvement cellulaire se produisent quand une répartition asymétrique de la contrainte de traction est présente, dans les contraintes de traction à l'arrière sont nettement plus élevés que ceux à l'avant. Nous avons constaté que les principaux déterminants de la vitesse de la cellule sont le taux et la fréquence à laquelle traction contrainte asymétrie développe, pas la magnitude absolue de la contrainte de traction. Nous concluons que cette asymétrie de contrainte de traction est important pour le mouvement cellulaire rapide, polarisée car les contraintes de traction élevée à l'arrière encouragent la rétraction, tandis que le faible traction à l'avant permet de saillie. Nous proposons que les activité motrice de la myosine II augmente le taux et la fréquence à laquelle traction asymétrie de stress se développe, tandis que l'activité de réticulation de l'actine est importante pour stabilisant.
Domaines De Liaison De L'actine Directement Des Protéines De Liaison De L'actine à Différents Endroits Du Cytosquelette
Filamine (FLN) et non musculaires alpha-actinine sont membres d'une famille de protéines de réticulation F-actine qui utilisent des domaines d'homologie de la calponine (CH-domaine) pour la liaison de l'actine. Bien que ces deux protéines ont été largement caractérisés, on en sait peu sur ce qui régit leur liaison aux filaments d'actine-F dans la cellule.
Niveaux Quaternaire Structure Et Expression De Protéines Contribuent Pour Importer Des Peroxysomes Peroxisomal-ciblage-séquence 1-induite De Humaine Soluble D'époxyde Hydrolase
La séquence de ciblage peroxisomal 1 (PTS1) est un tripeptide consensus 1 (S/C/A)(K/R/H)(L/M) qui se trouve à l'extrémité C-terminale de protéines plus peroxysomes. Cependant, la seule protéiques connues de mammifères contenant une méthionine terminale PTS1 (SKM), humaine soluble d'époxyde hydrolase (hsEH), montre les localisations des peroxysomes et cytosoliques in vivo. Mécanismes de régulation de la localisation subcellulaire des hsEH donc restent floues. Ici, nous avons utilisé des constructions de fusion vert fluorescent protein-hsEH afin d'étudier le ciblage peroxisomal de hsEH cellules ovariennes de hamster chinois transfectées transitoirement et stablement. Nos résultats suggèrent que l'importation de peroxysomes de hsEH est régulée par trois facteurs. Tout d'abord, nous montrons que SKM est nécessaire, mais non suffisante, pour l'importation de peroxysomes. Deuxièmement, en manipulant les niveaux d'expression de protéine, nous montrons que SKM médie peroxisomal importation de type sauvage hsEH seulement lorsque les niveaux d'expression sont élevés. Troisièmement, nous montrons que les modifications d'acides aminés qui diminuent l'oligomérisation de sous-unité et probablement améliorent l'accessibilité du motif SKM conférant ciblant les peroxysomes même à des niveaux d'expression des protéines de faible. Nous concluons que, dans hsEH, SKM est un PTS1 nécessaire mais inefficaces et dépend du contexte. Importation peroxysomes se produit lorsque les niveaux d'expression sont élevés ou le motif SKM est accessible. Ces résultats fournissent une base mécanique pour comprendre la localisation spécifique des cellules et tissu-spécifique de hsEH in vivo.
La Phagocytose De Particules De Silice Cristalline Par Des Macrophages
La silicose est une affection pulmonaire chronique induite par l'inhalation de silice cristalline. Exposition des macrophages cultivés à la silice cristalline conduit à la mort cellulaire ; Toutefois, le mécanisme de l'interaction cellule-particule, le sort des particules et la cause du décès est inconnue. Time-Lapse imagerie montre que les macrophages de souris lient avidement les particules qui se déposent sur la surface de la cellule et que les cellules s'étendent également saillies pour capturer les particules lointains. À l'aide de sectionnement optique confocal, particules de silice se sont avérées être présentes dans le volume cytoplasmique des cellules vivantes. En outre, la microscopie électronique et l'analyse élémentaire a montré silice dans les sections cellulaires internes. Pour examiner davantage le processus de phagocytose, la cinétique d'absorption de particules a été quantifiée à l'aide d'un essai dans lequel les cellules sont exposées à l'ovalbumine (OVA)-particules enrobées et un anticorps anti-OVA a été utilisée pour distinguer les surface-bondissent des particules intériorisées. FC médiée par les récepteurs de l'absorption de particules de silice revêtus d'anticorps était pratiquement terminée dans les 5 minutes. En revanche, aucune particules recouvertes d'ovules ont été intériorisés en ce moment. Après 30 minutes, 30 % de silice liée a été intériorisé et absorption continue lentement par la suite. Billes de latex OVA-enduit, quelle que soit la charge de surface, ont été intériorisés à un rythme lent de la même façon. Ces résultats démontrent que les macrophages internalisent silice et cette phagocytose nonopsonized se produit par un temporellement et éventuellement de façon mécaniste, voie distincte de Fc receptor-mediated phagocytose. Quatre-vingt pour cent des macrophages meurent dans les 12 heures d'exposition à la silice. Ni ovules revêtement ni tétraméthylrhodamine isothiocyanate d'étiquetage n'a aucun effet sur la mort cellulaire. Fait intéressant, revêtement anticorps réduit considérablement la toxicité de la silice. Nous émettons l'hypothèse que la voie d'entrée de particules et le trafic du phagosome ultérieur influe sur la toxicité des particules intériorisées.
Tsunami, L'homologue De Dictyostelium De La Kinase Fondue, Est Nécessaire Pour La Polarisation Et De Chimiotactisme
Dans un dépistage génétique vers l'avant pour des mutants de la chimiotaxie chez Dictyostelium discoideum, nous avons identifié une mutation perte de fonction, désignée tsunami, codant un homologue de la kinase fondue. Cellules dépourvues de tsuA fonction ne pourraient pas remplir efficacement chimiotactisme et n'ont pas pas se polarisent ou orienter correctement les pseudopodes dans des gradients chimiotactiques. Tandis que les cellules tsuA(-) ont pu occupation des récepteurs couple phosphatidylinositol (3,4,5) trisphosphate (PIP3) production et de la polymérisation de l'actine, la réponse PIP3 se prolongeait et basale F-actine sont augmentés. Fait intéressant, TsuA se localise au réseau de microtubules et examen trouve principalement à la périphérie de la cellule. L'analyse du gène découvert un roman domaine C-terminal que nous avons désigné le domaine d'homologie de Tsunami (TH). Aussi bien le domaine kinase et le TH sont nécessaires pour sauver les défauts phénotypiques des cellules tsuA(-). Alors que l'activité de la kinase n'est pas requise pour la localisation aux microtubules, le domaine de la TH est essentiel. Ainsi, la localisation de l'activité de la kinase de microtubules est critique pour la fonction TsuA. Nous proposons que les fonctions en liaison avec le réseau de microtubules pourraient expliquer les rôles divergents des protéines kinase fondue dans différents organismes.
Incorporation D'albumine Sérique Bovine Biomimétique Revêtements Sur Le Titane Avec Efficacité De Charge élevée Et Son Comportement De Libération
Albumine sérique bovine (BSA) a été employé comme protéine modèle pour étudier l'efficacité de son chargement dans un revêtement de phosphate de calcium (PAC) sur des substrats de titane. Il est constaté que la protéine efficacité de chargement peut être ajustée en faisant varier les configurations spécifiques du système de revêtement tels que volume simulée fluide corporel (SBF), sélection de hauteur et conteneur de solutions pour la SBF. Un BSA chargement efficacité atteignant 90 % a été atteint quand le ratio du substrat surface habitable à mis à jour le SBF (m-SBF) volume a atteint 0,072. La libération de BSA par les revêtements biomimétique a également étudiée in vitro. Une libération prolongée a été atteint, même si une grande quantité de BSA était toujours pris au piège dans l'enduit après 15 jours d'immersion dans une solution tampon de phosphate. Taux de rejet est beaucoup plus rapide devrait lorsque le revêtement est implanté in vivo en raison de la participation active des cellules ostéoclastiques et enzymes.
Contribution Des Filopodes De Migration Cellulaire : Un Lien Mécanique Entre La Saillie Et La Contraction
Nombreuses structures contenant de l'actine F sont impliqués dans la régulation de protrusion des membranes à la fine pointe des cellules mobiles. Nous avons étudié la structure et la dynamique des filopodes qui se rapportent à des événements à la fine pointe et la fonction des réseaux actine fin. Nous avons constaté que bien que les filopodes contiennent des faisceaux parallèles d'actine, ils contiennent une distribution spatiale et temporelle étonnamment non uniforme des protéines de liaison de l'actine. Le long des filaments d'actine dans un filopodium unique, la partie plus distale contient principalement T-plastin, tandis que la partie proximale est principalement liée par l'alpha-actinine et la CORONINE. Certains filopodes sont fixes, mais filopodes latérales se déplacent par rapport à la fine pointe. Ils semblent former une liaison mécanique entre le réseau d'actine polymérisation à l'avant de la cellule et l'activité motrice de la myosine dans le corps cellulaire. La direction du mouvement latéral filopodes est associée à la direction de la migration cellulaire. Quand filopodes latéral initier d'et aller vers un seul côté d'une cellule, la cellule devient l'opposé du sens d'écoulement des filopodes. Par conséquent, ce système II filopodes-myosine permet de polymérisation de l'actine piloté par les forces de protrusion et de la myosine II médiée par la force contractile être mécaniquement coordonnée.
Cucurbitacine I Inhibe La Motilité Cellulaire En Indirectement Interférant Avec La Dynamique De L'actine
Les cucurbitacines sont des produits naturels végétaux qui inhibent l'activation de la Janus kinase 2 (JAK2) / signal transducteur et activateur de la transcription 3 (STAT3) voie par un mécanisme inconnu. Ils sont également connus pour provoquer des changements dans l'organisation du cytosquelette d'actine.
La Phagocytose Et La Toxicité De La Silice Amorphe
L'inhalation de silice cristalline est connue pour provoquer une réaction inflammatoire et l'exposition chronique aboutit à une fibrose pulmonaire et peut progresser dans la maladie, la silicose. Les macrophages lient les particules de silice cristalline, phagocytent les et subissent rapidement apoptotiques et nécrotique mort. On ne sait pas le mécanisme par lequel les particules sont liés et intériorisés et les particules de raison sont toxiques. Silice amorphe a été considérée comme un inférieur forme toxique, mais ce point de vue est controversée. Nous avons comparé l'absorption et la toxicité de la silice amorphe à la silice cristalline.
