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Articles by David A. Knecht in JoVE
JoVE General
Misura della chemiotassi cellulari con ECIS / Taxi
1Molecular and Cell Biology, University of Connecticut, 2University of Connecticut
L'ECIS / Taxi sistema è un sistema automatico, in tempo reale test che misura chemiotassi cellulari. In questo saggio, cellule si muovono sotto uno strato di agarosio per arrivare ad un elettrodo bersaglio. Movimento cellulare è misurata dalla comparsa di resistenza a 0 corrente alternata.
Other articles by David A. Knecht on PubMed
Cinetica Della Associazione, L'assorbimento E Degradazione Di Vivere Fluorescente (DsRed) Batteri Di Dictyostelium Discoideum
La cinetica dell'associazione, l'assorbimento e degradazione dei batteri da vegetativo ameba Dictyostelium utilizzando Escherichia coli che esprimono la proteina fluorescente ricombinante DsRed sono stati caratterizzati. Ci sono notevoli vantaggi nell'utilizzo di batteri DsRed-esprimendo per fagocitosi dosaggi. Stabile espressione della proteina fluorescente, DsRed, fornisce batteri viventi con un segnale fluorescente interno luminoso che è degradabile in via del phagolysosomal. A differenza dei dosaggi con batteri chimicamente etichettati o granuli di lattice, i batteri sono vivi e possiedono una superficie esterna naturale, inalterata per l'interazione del recettore. Dictyostelium cellule rapidamente bind e fagocitare batteri DsRed. Pulse-chase esperimenti mostrano che il segnale derivato da DsRed è degradato con un'emivita di circa 45 min. Per distinguere i batteri interiorizzati da quelli legati alla superficie, è stato sviluppato un test in cui sodio azide è stato utilizzato per rilasciare particelle di superficie associato. Sorprendentemente, rilascio di superficie della particella sembra essere indipendente dalla funzione di miosina II. Usando questo test è stato dimostrato che l'assorbimento di batteri nelle celle è estremamente rapido. Dopo un'incubazione di 1 min, 20% del segnale è derivato da batteri interiorizzate. La percentuale del segnale da batteri interiorizzate aumenta gradualmente e raggiunge il 50% ad uno stato costante. Questo dosaggio sarà utile nelle indagini di macchine molecolari della fagocitosi e della vescicola post-internalization traffico.
Visualizzazione Delle Dinamiche Di Actina Durante La Macropinocitosi Ed Esocitosi
Macropinocitosi della neonata risiede ed esocitosi di post-lysosomes sono stati visualizzati utilizzando una sonda di proteina verde fluorescente che si lega specificamente ai filamenti di F-actina. Associazione di F-actina con Macropinocitosi inizia come una forma di V infolding della membrana. L'allargamento della vescicola avviene attraverso un movimento verso l'interno del punto prossimale del V così come una sporgenza verso l'esterno la punta della V per formare un'invaginazione allungata. La sporgenza alla fine chiude al suo margine distale per diventare una vescicola e viene spostata centripetally mentre il recupero della sua forma circolare. La vescicola perde il suo mantello di actina entro 1 min dopo interiorizzazione. Un'ora più tardi, post-lysosomal vescicole divennero debolmente circondate da actina mentre ancora citoplasmatica. Alcune di queste vescicole si trasferì a membrana del plasma, ancorata e quindi espulso il loro contenuto. Leggermente prima la vescicola contenuto cominciarono a scomparire, osservato un aumento nell'associazione di F-actina con la vescicola è stato. Questa fu seguita da rapida contrazione della vescicola e poi scomparsa del segnale actina una volta che è stato rilasciato il contenuto interno. Questi risultati mostrano che i cambiamenti dinamici nella associazione di filamenti di actina con la membrana della vescicola accompagnano sia endocitosi ed esocitosi.
Rho-chinasi E Miosina II Controllo Coppa Fagocitaria Formazione Durante La Fagocitosi, CR, Ma Non FcgammaR
Fagocitosi attraverso il recettore Fcgamma (FcgammaR) o recettore del complemento 3 (CR) richiede polimerizzazione actina mediata dal complesso Arp2/3, anche se ogni recettore utilizza una distinta via di segnalazione. RAC e Cdc42 sono necessari per actina e reclutamento complesso Arp2/3 durante FcgammaR fagocitosi, mentre Rho controlla l'assemblaggio dell'actina a phagosomes CR. Per comprendere meglio il ruolo di Rho nella fagocitosi CR, abbiamo testato l'idea che un obiettivo conosciuto di Rho, Rho-chinasi (ROK), potrebbe controllare Coppa fagocitaria formazione e/o engulfment di particelle. Inibitori di ROK (ROK dominante-negativo e Y-27632) e della destinazione a valle del ROK, miosina-II (ML7, BDM e dominante-negativo miosina-II), sono stati utilizzati per testare questa idea. Abbiamo trovato che l'inibizione di Rho--> ROK--> miosina II percorso ha causato un accumulo di diminuzione del complesso Arp2/3 e F-actina intorno a particelle associate, che ha portato ad una riduzione di engulfment fagocitaria CR-mediata. Fagocitosi mediata da FcgammaR, al contrario, erano indipendente dall'attività Rho o ROK e dipendeva solo di miosina-II per internalizzazione di particelle, non per la formazione di Coppa di actina. Mentre myosins sono stati implicati in precedenza nella fagocitosi di FcgammaR, a nostra conoscenza, questa è la prima dimostrazione di un ruolo per la miosina II nella fagocitosi CR.
RacB Regola La Funzione Del Citoscheletro Nel Dictyostelium Spp
Finora, 14 cromosomi omologhi dei mammiferi Rac proteine sono stati identificati in Dictyostelium. Non è chiaro se ognuno di questi geni ha una funzione unica o in che misura essi svolgono ruoli ridondanti nell'organizzazione del citoscheletro di actina. Per indagare la funzione specifica del RacB, abbiamo espresso in modo condizionale wild-type (WT-RacB), dominante negativo (N17-RacB) e costitutivamente attivato (V12-RacB) versioni della proteina. Sull'induzione, le cellule che esprimono V12-RacB smesso di crescere, staccata dalla superficie e formano numerose sporgenze superficie sferiche mentre all WT-RacB divenne appiattite sulla superficie delle cellule. Al contrario, le cellule con sovraesprimono relativa N17-RacB non hanno mostrato significative anomalie morfologiche. Le sporgenze superficie vista nelle RacB V12 cellule sembrano essere sporgenze actina-driven perché sono stati arricchiti in F-actina e furono inhibitable da citocalasina un trattamento. Le sporgenze nelle RacB V12 cellule non richiede attività di miosina II, che li distingue da squamosi formate da cellule wild-type sotto stress. Infine, abbiamo esaminato le conseguenze funzionali dell'espressione di wild-type e mutanti RacB. Fagocitosi, endocitosi e tassi di efflusso di fluido fase sono state ridotte in tutte le linee cellulari che esprimono proteine RacB ma il calo maggiore è stato osservato per le cellule che esprimono V12-RacB. Da questi risultati, concludiamo che come gli altri membri del Rho famiglia, RacB induce la polimerizzazione dell'actina ma le conseguenze dell'attivazione sembrano essere differenti da altre proteine Dictyostelium Rac finora indagati, con conseguente diversi cambiamenti morfologici e funzionali nelle cellule.
Cross-linking Dei Filamenti Di Actina Di Miosina II è Un Importante Contributo All'integrità Corticale E Motilità Cellulare in Ambienti Restrittivi
Le cellule sono frequentemente richiesti a muoversi in un ambiente locale che limita fisicamente la locomozione, come durante stravaso o invasione metastatica. Per modellare questi eventi, abbiamo sviluppato un saggio in cui vegetativi Dictyostelium amebe subiscono chemiotassi sotto uno strato di agarosio verso una fonte di acido folico [Laevsky, G. e Knecht, d. A. (2001). Biotecnologie 31, 1140-1149]. Come la concentrazione di agarosio è aumentata da 0,5% al 3% le cellule sono sempre più inibite nella loro capacità di muoversi sotto l'agarosio. Ora è stato esaminato il contributo della miosina II e actina cross-linking delle proteine il movimento delle cellule in questo ambiente restrittivo. Cellule privo di catena pesante di miosina II (mhcA-) sono in grado di migrare sotto sovrapposizioni dell'agarosi superiore al 0,5%, e anche a questa concentrazione si muovono solo a breve distanza dalla depressione. Durante il tentativo di spostare, le cellule diventano allungate e frammentate a causa della loro incapacità di ritrarre loro uropods. A concentrazioni più elevate dell'agarosi, le cellule mhcA sporgono pseudopodi sotto l'agarosio, ma sono in grado di tirare il corpo cellulare di sotto. Coerente con un ruolo per la miosina II in generale stabilità corticale, GFP-miosina dinamicamente localizza alla corteccia laterale e posteriore delle cellule in movimento sotto dell'agarosi. Cellule manca l'essenziale catena leggera della miosina II (mlcE-), non hanno alcuna misurabili miosina II motore attività, erano ancora in grado di muoversi normalmente sotto tutte le concentrazioni di agarosio. Mutanti carente o ABP-120 o alfa-actinina erano anche in grado di muoversi nell'ambito dell'agarosi a tariffe simili alle cellule wild-type. Ipotizziamo che miosina stabilizza la corteccia di actina attraverso la sua attività di cross-linking, piuttosto che la sua funzione di motore e questa attività è necessario e sufficiente per il mantenimento dell'integrità corticale di cellule in fase di movimento in un ambiente restrittivo. L'actina cross-linkers alfa-actinina e ABP-120 non sembrano giocare un ruolo come miosina II le principali nel fornire questa integrità corticale.
Apoptosi Indotta Da Silice Nei Macrofagi Alveolari Del Mouse Viene Avviato Tramite L'attività Dell'enzima Lisosomiale
Ultimi studi nel nostro laboratorio hanno dimostrato che silice (-quarzo) esposizione della particella di una linea cellulare di macrofagi alveolari mouse (MH-S) suscita depolarizzazione mitocondriale e l'attivazione di caspase-3 e 9, contribuendo all'apoptosi. Tuttavia, vie cellulari che portano a questi risultati non sono state ampiamente studiate. Gli studi iniziali hanno rivelato che esposizione alla silice suscita lisosomiale permeabilità dopo 1 h, come evidenziato dalla fuoriuscita di destrano coniugato con FITC e arancio di acridina. Abbiamo quindi valutato un ruolo per il vano acidulo lisosomiale in apoptosi. Cellule pretrattato con il lysosomotropic debole base cloruro di ammonio, per aumentare il pH lisosomiale, ha mostrato l'attivazione di caspase diminuito e frammentazione del DNA apoptotico. MH-S cellule pretrattate con pepstatin A, un inibitore della catepsina lisosomiale D, ha mostrato attivazione diminuito caspasi 9 e 3, nonché una diminuzione percentuale delle cellule che è diventato apoptotic. Frammentazione del DNA e attivazione di caspase 9 e 3 sono anche diminuiti nelle cellule pretrattate con despiramine, un inibitore della sfingomielinasi acida lisosomiale. Silice pretrattate con alluminio lattato (a blunt superfici siti attivi) ridotta attivazione di caspase e apoptosi. Anche se in alluminio lattato-trattati silice ancora indotta permeabilità lisosomiale (da perdite di FITC-Destrano), una misura di lysosome integrità e funzione ha suggerito una riduzione della misura e/o la natura delle lesioni lisosomiali (da ritenzione di arancio di acridina). Un ruolo per le specie reattive dell'ossigeno (ROS) è stato studiato per esplorare un altro percorso per apoptosi indotta da silice oltre gli enzimi lisosomiali; Tuttavia, nessun ruolo per ROS era evidente. Pertanto, a seguito di esposizione alla silice, lesioni lisosomiali precede il apoptosis e apoptotic signaling pathway comprende catepsina D e sfingomielinasi acida.
Idrolisi Fosfatidilinositolo 4,5-bisfosfato Dirige Actina Rimodellamento Durante La Fagocitosi
Il Rho GTPases gioca un ruolo fondamentale nell'avvio di polimerizzazione dell'actina durante la fagocitosi. Al contrario, i fattori di dirigere lo smontaggio di F-actina necessaria per fissione del vacuolo fagocitaria sono malati definiti. Abbiamo usato le proteine chimeric fluorescenti per monitorare le dinamiche di associazione di actina attivo Rac1 e Cdc42 con il Fagosoma forma. Sebbene actina è stato trovato a scomparire dalla base della formazione Fagosoma prima tenuta era completa, Rac1/Cdc42 attività persistente, suggerendo che la cessazione dell'attività di GTPase non è il principale determinante di smontaggio dell'actina. Inoltre, completamente interiorizzato phagosomes progettato per associare costitutivamente attivo Rac1 ha mostrato poco associato F-actina. La scomparsa di fosfatidilinositolo-4,5-bisfosfato (PI(4,5)P(2)) dalla membrana phagosomal strettamente parallelo corso di smontaggio dell'actina. Inoltre, l'inibizione della idrolisi PI(4,5)P(2) o aumentato PI(4,5)P(2) generazione di sovraespressione della chinasi di fosfatidilinositolo fosfati ha impedito lo smontaggio di actina necessario per il completamento della fagocitosi. Queste osservazioni suggeriscono che idrolisi del PI(4,5)P(2) determina il rimodellamento di actina necessario per il completamento della fagocitosi.
Metallotioneina Media Chemiotassi Leucocitaria
Metallotioneina (MT) è una proteina ricca di cisteina, metal-binding che può essere indotta da una varietà di agenti. Modulazione dei livelli di MT ha anche dimostrata di alterare le funzioni immunitarie specifiche. Abbiamo notato che i geni di MT mappa vicino le chemiochine Ccl17 e motivi Cx3cl1. cisteina che caratterizzano queste chemochine si trovano anche in sequenza MT, suggerendo che MT potrebbe anche agire come un fattore chemiotattico.
Sotto-agarose Chemiotassi Di Dictyostelium Discoideum
In stato vegetativo, Dictyostelium amebe sono chemiotattiche verso pterine rilasciato da batteri, mentre durante lo sviluppo pluricellulare, diventano chemiotattiche per via endogena prodotta cAMP. Una varietà di analisi sono stati utilizzati per visualizzare e quantificare il movimento chemiotattico. Sotto-agarose chemiotassi fornisce un dosaggio semplice e flessibile che permette di imaging ad alta risoluzione e quantificazione del comportamento motilità delle singole celle e popolazioni da luce trasmessa e microscopia di fluorescenza. Il saggio richiede cellule per deformare una matrice solida ma flessibile; Pertanto, essa fornisce anche un modo per misurare i difetti nella capacità delle cellule mutanti di muoversi in queste condizioni restrittive.
Misurazioni in Tempo Reale Automatizzate Della Chemiotassi Leucocitaria
In precedenza abbiamo descritto un sistema automatizzato (ECI/taxi) per misurare il movimento chemiotattico di Dictyostelium amebe in una sfumatura di acido folico [Hadjout, N., Laevsky, G., Knecht, D.A. e Lynes, M.A., 2001. Misura in tempo reale automatizzato della motilità cellulare chemiotattica. Biotecnologie 31, 1130-1138.]. Nel sistema di ECIS/taxi, le cellule migrano in un ambiente sotto-agarosio e loro posizione è monitorato da determinare la variazione di impedenza causata dalle cellule strisciando sulla superficie di un elettrodo. In questa relazione, mostriamo che chemiotassi dei primari e dei leucociti immortalati in risposta a complemento (C5a) potrebbero essere misurati utilizzando il sistema di ECIS/taxi. Diverse modifiche al design dell'elettrodo bersaglio sono state testate, e un elettrodo lineare perpendicolare alla direzione del movimento è stato trovato per aumentare la sensibilità e l'affidabilità del dosaggio. Usando l'ottimizzazione ECI/taxi dosaggio, la dose risposta dei neutrofili e WBC C 265-9 celle è stato stabilito e rispetto per il dosaggio di camera di Boyden. Il sistema di dosaggio ECI/taxi può essere utilizzato per confrontare il movimento di diversi tipi di cellule, di valutare l'effetto del complessi gradienti chemiotattici, o per determinare gli effetti dei farmaci sulla motilità chemiotattica.
Microscopia a Forza Trazione in Dictyostelium Rivela Ruoli Distinti Per Motore II Miosina E Actina-reticolazione Attività Nel Movimento Delle Cellule Polarizzate
Cella continuo movimento richiede il coordinamento delle forze di protrusione all'avanguardia con le forze contrattili nella parte posteriore della cella. Miosina II è richiesta per generare la necessaria forza contrattile per facilitare la retrazione; Tuttavia, le cellule di Dictyostelium che difettano di miosina II (mhcA-) sono ancora motili. Per studiare direttamente il ruolo di miosina II in contrattilità abbiamo utilizzato un dosaggio di forza di trazione di gelatina per misurare l'entità e la dinamica ridistribuzione delle sollecitazioni di trazione generate spostando casualmente wild-type, miosina II essenziale catena leggera null (mlcE-) e mhcA-cellule. I nostri dati mostrano che per ogni tipo di cellula, periodi di rapido, diretto il movimento delle cellule si verificano quando una distribuzione asimmetrica dello sforzo di trazione è presente, in cui sollecitazioni di trazione posteriore sono significativamente superiori a quelli nella parte anteriore. Abbiamo trovato che le principali determinanti della velocità delle cellule sono il tasso e la frequenza alla quale trazione asimmetria dello stress si sviluppa, non la magnitudine assoluta di sollecitazione di trazione. Possiamo concludere che tale asimmetria di sollecitazione di trazione è importante per il movimento rapido, polarizzati cella perché sottolinea alta trazione posteriore promozione retrazione, mentre bassa trazione anteriore permette di protrusione. Proponiamo che attività motoria miosina II aumenta la frequenza e la frequenza alla quale trazione asimmetria dello stress si sviluppa, mentre attività di reticolazione di actina è importante per la stabilizzazione si.
Domini Di Legame Dell'actina Diretto Actina-binding Proteins in Diverse Posizioni Del Citoscheletro
Filamina (FLN) e non muscolo alfa-actinina sono membri di una famiglia di proteine cross-linking di F-actina che utilizzano domini Calponin omologia (CH-dominio) per l'associazione actina. Anche se queste due proteine sono state caratterizzate estensivamente, poco è noto circa che cosa regola la loro associazione ai filamenti di F-actina nella cellula.
Quaternari Livelli Struttura Ed Espressione Di Proteine Contribuiscono All'importazione Perossisomiale Perossisomiale-targeting-sequenza-1-mediata Di Umana Solubile Epossido Idrolasi
La sequenza bersaglio perossisomiale 1 (PTS1) è un tripeptide consenso 1 (S/C/A)(K/R/H)(L/M) che si trova presso il C-terminale delle proteine più perossisomiale. Tuttavia, la proteina dei mammiferi nota sola contenente un terminale metionina PTS1 (SKM), umana solubile epossido idrolasi (hsEH), Mostra perossisomiali e citosolici localizzazioni in vivo. Meccanismi che regolano la localizzazione sottocellulare di hsEH così rimangono poco chiari. Qui abbiamo utilizzato la green fluorescent protein-hsEH fusion costrutti per studiare il peroxisomal targeting di hsEH nelle cellule di ovaio di transitoriamente e stabile transfected criceto cinese. I nostri risultati suggeriscono che l'importazione perossisomiale di hsEH è regolato da tre fattori. In primo luogo, vi mostriamo che SKM è necessaria ma non sufficiente, per l'importazione dei perossisomi. In secondo luogo, manipolando i livelli di espressione della proteina, mostriamo che SKM da intermediario perossisomiale importazione del selvaggio-tipo hsEH solo quando i livelli di espressione sono elevati. In terzo luogo, ci mostra che le modifiche dell'amminoacido che diminuiscono oligomerizzazione subunità e presumibilmente migliorano l'accessibilità del motivo SKM conferiscono peroxisomal targeting anche a livelli di espressione di proteine di basso. Possiamo concludere che, in hsEH, SKM è un PTS1 necessarie ma inefficiente e dipendente dal contesto. Importazione dei perossisomi si verifica quando i livelli di espressione sono alti o quando il motivo SKM è accessibile. Questi risultati forniscono una base meccanicistica per comprendere la localizzazione di tessuto-specifiche e cella di hsEH in vivo.
La Fagocitosi Delle Particelle Di Silice Cristallina Dai Macrofagi
Silicosi sono una malattia cronica polmonare indotta dall'inalazione di silice cristallina. L'esposizione dei macrofagi colte alla silice cristallina conduce alla morte delle cellule; Tuttavia, il meccanismo di interazione cellula-particella, il destino delle particelle e la causa di morte sono sconosciuti. Time-lapse imaging Mostra che macrofagi di topo si legano avidamente particelle che si depositano sulla superficie delle cellule e che le cellule si estendono anche sporgenze per catturare particelle distanti. Mediante sezionamento ottico confocale, particelle di silice sono stati indicati per essere presenti all'interno del volume citoplasmatico delle cellule vive. Inoltre, analisi elementale e la microscopia elettronica ha mostrato silice nelle sezioni cellulare interne. Per esaminare ulteriormente il processo di fagocitosi, la cinetica di assorbimento delle particelle è stata quantificata utilizzando un test in cui le cellule sono stati esposti a ovoalbumina (OAV)-particelle rivestiti e un anticorpo anti-OVA è stato usato per distinguere associato a superficie da particelle interiorizzate. FC mediata dal recettore assorbimento di particelle di silice rivestite con anticorpo era quasi completa entro 5 minuti. In contrasto, senza particelle rivestite con ovuli sono stati interiorizzati in questo momento. Dopo 30 minuti, 30% di silice associato è stato interiorizzato e assorbimento continuò lentamente successivamente. Granuli di lattice rivestite con ovuli, indipendentemente dalla carica superficiale, sono state interiorizzate a un ritmo lento allo stesso modo. Questi risultati dimostrano che macrofagi interiorizzano silice e che nonopsonized fagocitosi si verifica da un temporaneamente e possibilmente meccanicistico, pathway distinti da Fc recettore-mediata fagocitosi. L'ottanta per cento dei macrofagi muoiono entro 12 ore di esposizione alla silice. Né OVA rivestimento né tetrametilrodamina isotiocianato etichettatura ha alcun effetto sulla morte delle cellule. È interessante notare, rivestimento anticorpo riduce drasticamente la tossicità di silice. Ipotizziamo che il percorso di ingresso delle particelle e successiva Fagosoma traffico colpisce la tossicità delle particelle interiorizzate.
Lo Tsunami, L'omologo Di Dictyostelium Della Chinasi Fusa, è Necessario Per La Polarizzazione E La Chemiotassi
In uno schermo avanti genetico di mutanti di chemiotassi in Dictyostelium discoideum, abbiamo identificato una mutazione di perdita di funzione, designata tsunami, codifica un omologo della chinasi fuso di. Cellule carente funzione tsuA Impossibile eseguire efficacemente la chemiotassi e furono in grado di diventare polarizzate o orientare correttamente pseudopodi in gradienti chemiotattici. Mentre le cellule tsuA(-) sono stati in grado di occupazione del recettore paio di fosfatidilinositolo (3, 4,5) trifosfato (PIP3) produzione e polimerizzazione dell'actina, la risposta di PIP3 è stata prolungata e sono stati aumentati livelli basali di F-actina. È interessante notare che, TsuA si localizza alla rete dei microtubuli e puncta pricipalmente trovato alla periferia delle cellule. Analisi del gene scoperto un romanzo dominio C-terminale che abbiamo indicato il dominio di omologia di Tsunami (TH). Sia il dominio della chinasi e il dominio del TH sono tenuti a salvare i difetti fenotipici delle cellule tsuA(-). Mentre l'attività della chinasi non è richiesto per la localizzazione di microtubuli, il dominio di TH è essenziale. Così, la localizzazione delle attività della chinasi di microtubuli è critica per la funzione TsuA. Proponiamo che le funzioni in associazione con la rete dei microtubuli possono sottostanno i ruoli divergenti delle proteine chinasi fuso in diversi organismi.
Incorporazione Di Albumina Di Siero Bovino in Rivestimenti Biomimetici Su Titanio Con Caricamento Ad Alta Efficacia E Il Comportamento Di Rilascio
Albumina di siero bovino (BSA) è stato impiegato come una proteina modello per studiare l'efficienza di caricamento in un rivestimento di fosfato di calcio (CaP) su substrati di titanio. Si è trovato che la proteina efficienza di carico può essere regolata variando le configurazioni specifiche del sistema di rivestimento come il volume di fluido corporeo simulato (SBF), selezione di altezza e contenitore di soluzione per il SBF. Un BSA caricamento efficienza così elevato come il 90% è stato raggiunto quando il rapporto tra il substrato superficie modificata SBF (m-SBF) volume era alto come 0.072. Il rilascio di BSA da rivestimenti biomimetici è stato anche studiato in vitro. A rilascio prolungato è stato raggiunto anche se una grande quantità di BSA era ancora intrappolata nel rivestimento dopo 15 giorni di immersione in una soluzione tampone fosfato. Un tasso molto più veloce di rilascio dovrebbe quando il rivestimento viene impiantato in vivo a causa del coinvolgimento attivo delle cellule degli osteoclasti e degli enzimi.
Contributo Di Filopodia Alla Migrazione Delle Cellule: Un Collegamento Meccanico Tra La Sporgenza E Contrazione
Numerose strutture contenenti F-Actina sono coinvolti nella regolazione della protrusione della membrana all'avanguardia delle cellule motili. Abbiamo studiato la struttura e la dinamica di filopodia come si riferiscono a eventi presso la leading edge e la funzione delle reti finali di actina. Abbiamo trovato che anche se filopodia contengono fasci paralleli di actina, contengono una sorprendentemente non uniforme distribuzione spaziale e temporale delle proteine leganti actina. Lungo la lunghezza dei filamenti di actina in un unico filopodium, la parte più distale contiene principalmente T-plastin, mentre la porzione prossimale è associata principalmente da alfa-actinina e coronin. Alcuni filopodia sono stazionari, ma spostare filopodia laterale rispetto al bordo principale. Essi sembrano formare un collegamento meccanico tra la rete di polimerizzazione dell'actina nella parte anteriore della cella e l'attività motoria di miosina nel corpo cellulare. La direzione del movimento laterale filopodial è associata con la direzione della migrazione cellulare. Quando filopodia laterale avviare da e muoversi verso un solo lato di una cella, la cella si trasformerà opposta alla direzione del flusso di filopodial. Pertanto, questo sistema di filopodia-miosina II permette polimerizzazione dell'actina, guidata da forze di protrusione e miosina II mediata forza contrattile sia meccanicamente coordinata.
Cucurbitacina Inibisce La Motilità Cellulare Indirettamente Interferendo Con Le Dinamiche Dell'actina
Cucurbitacins sono prodotti naturali vegetali che inibiscono l'attivazione della chinasi Janus 2 (JAK2) di segnale trasduttore e attivatore della trascrizione 3 (STAT3) percorso da un meccanismo sconosciuto. Essi sono anche noti per causare cambiamenti nell'organizzazione del citoscheletro di actina.
La Fagocitosi E La Tossicità Di Silice Amorfa
Inalazione di silice cristallina è noto per provocare una reazione infiammatoria e cronica esposizione conduce alla fibrosi polmonare e può progredire nella malattia, la silicosi. Colte macrofagi legano le particelle di silice cristallina, fagocitare li e rapidamente subiscono apoptosi e morte necrotica. Non è chiaro il meccanismo mediante il quale particelle sono vincolati e interiorizzati e le particelle di motivo sono tossiche. Silice amorfa sono stata considerata essere un minore forma tossica, ma questa visione è controversa. Abbiamo confrontato l'assorbimento e la tossicità di silice amorfa di silice cristallina.
