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Articles by Derek Lumbard in JoVE
JoVE Neuroscience
Nucleofection 및 배아 마우스 Hippocampal과 두피 뉴런의 주요 문화
Department of Anatomy, University of Wisconsin-Madison
이 프로토콜은 electroporation과 문화 마우스 hippocampal 및 대뇌 피질의 뉴런을 통해 transfect, 해부하다하는 데 필요한 단계를 설명합니다. 장기 문화가 synaptogenesis 및 돌기 척추 분석 연구에 사용할 수 있지만 단기 문화는 축삭의 파생물과지도의 연구에 사용할 수 있습니다.
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수지상 쪽이 PSD 95 BDNF 유발 증가 동적 Microtubule 침략 필요합니다
Microtubules (MTs) 동적 중 합을 통해 성숙한 hippocampal 신경 세포의 수지상 쪽이 입력 할 수 있습니다. 이러한 마운트 침략은 직접 관련 된 신경 활동, 그들의 기능은 알 수 없는 남아 있습니다. 여기 우리 쪽이로 마운트 항목 두뇌 파생 한 neurotrophic 요인 (BDNF) 치료 후 postsynaptic 밀도-95 (PSD-95) 단백질의 증가 조절 마우스 hippocampal 뉴런에서 보여줍니다. 이 총 내부 반사율 형광 현미경 검사 법을 사용 하 여, 우리 BDNF 쪽이 평균 산 유지 시간을 연장 하 고이 효과 TrkB 수용 체 활성화에 의존을 보여줍니다. 추가 검사 산 중 합 쪽이로 신속한 PSD 95 증가 척추 머리에 대응을 밝혔다. 시간이 지나면서, 쪽이 BDNF 신청 후 Mts의 대상만 하지 전에, PSD-95에 강력한 증가 보였다. 반대로, 쪽이 완전히 결여 된 MT 침략 PSD-95의 수준에 상당한 변화가 보였다. 산 역학의 약리 저해 폐지 PSD 95 BDNF 유발 증가. 함께, 이러한 결과 BDNF 치료 후 쪽이 내의 PSD-95에서 잘 알려진 증가 MT 수지상 쪽이 침략에 따라 가설을 지원 합니다. 따라서, 우리의 연구 동적 Mts와 postsynaptic 구조 사이의 직접 링크와 MT 수지상 쪽이 침공에 대 한 기능적 역할을 제공 합니다.
동적 Microtubules 시냅틱 NMDA 수용 체에 종속적인 척추 확대 추진
뇌의 흥분 성의 대부분의 시 냅 스 터미널 수지상 쪽이에 범 하다. 우리와 다른 동적 microtubules (MTs) 수지상 축에서 등뼈를 입력 표시 최근에 있다. 그러나, 오랫동안 척추 소성에 Mts에 대 한 직접 역할은 아직 증명 해야 하 고 MT 척추 침략은 직접 시 냅 스 활동에 의해 영향을 여부 불분명 남아. 척추 형태 및 시 냅 스 강도에서 지속적인 변화 시 냅 스 NMDA 수용 체 (NMDARs)의 활성화에 의해 트리거될 수와 학습 및 메모리 프로세스와 관련 된. MTs NMDAR 종속 척추 소성에 참여 여부를 결정 하려면 우리 시 냅 스 Nmdars의 급성 활성화 전후 산 역학 및 척추 형태 라이브 마우스 hippocampal 피라미드 뉴런에서 몇 군데. 시 냅 스 NMDAR 활성화 MT 척추 침략 및 지속적인 증가 척추 크기에 침공된 쪽이 훨씬 더 빨리 전시 및 비 침공 쪽이 보다 더 많은 성장을 승진. 개별 MT 침략 척추 크기 긴 다음 NMDAR 활성화를 유지 하는 급속 한 증가 발생 합니다. NMDARs 또는 동적 Mts의 저해 NMDAR 종속 척추 성장을 차단 합니다. 함께 이러한 결과 MT 척추 침략 긍정적으로 시 냅 스 Nmdars를 통해 신호에 의해 통제 된다 처음으로 입증 하 고 타겟된 쪽이에 지속적인 구조적 변화에 기여.
