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Articles by Diana Pauly in JoVE
JoVE Immunology and Infection
IgY-Technologie: Extraction of Chicken Antikörper aus Eidotter durch Polyethylenglykol (PEG) Niederschlag
1Center for Biological Security, Robert Koch-Institute, 2CICVyA - INTA Castelar, Instituto de Virología, 3Center of Molecular Immunology, Ciudad de la Habana, Cuba, 4Department of Biology, Chemistry, Pharmacy, Institute of Biology-Neurobiology, Free University of Berlin, 5Institut of Pharmacology, Charité-University Medicine of Berlin
Dieses Protokoll beschreibt insbesondere die Extraktion der Gesamt-IgY aus Eigelb mittels Polyethylenglykol Niederschlag und gibt allgemeine Informationen über IgY-Technologie.
Other articles by Diana Pauly on PubMed
Gleichzeitige Quantifizierung Der Fünf Bakterien- Und Pflanze Giftstoffe Aus Komplexen Matrizen Mit Einem Multiplex Fluoreszierende Magnetischer Aufhängung-Assay
Proteotoxins wie Ricin, Abrin, Botulinumneurotoxine Typ A und B (BoNT/A, BoNT/B) und Staphylokokken Enterotoxin B (SEB) gelten als potentielle biologische Kampfstoffe die Bioterrorismus Attacken auf die Nahrungskette verwendet werden könnten. In dieser Studie verwendeten wir eine neuartige Immunisierung-Strategie zum Generieren von hoher Affinität monoklonale und polyklonale Antikörper gegen native Rizin, BoNT/A und BoNT/B. Die Antikörper wurden zusammen mit Antikörpern gegen SEB und Abrin verwendet eine hochsensible magnetische und fluoreszierende multiplex Perlen-Array mit ausgezeichneten Empfindlichkeiten zwischen 2 ng/L und 546 ng/L aus einem minimalen Probenvolumen von 50 MicroL. Assays wurde mit 20 verschiedene verwandte Analyten validiert und die Assay-Präzision wurde bestimmt. Voran die bestehende Perlen-Array-Technologie, die neuartige Magnet- und fluoreszierende Microbeads erwies sich als Parallelisierung auf Anreicherung Verfahren, indem die weiter zunehmende Empfindlichkeit gegenüber 0,3-85 ng/L, beginnend mit einem Probenvolumen von 500 MicroL. Darüber hinaus wurde die Methode für die gleichzeitige Ermittlung der Ziel-Toxine Pfennigabsatz in komplexe Lebensmittelmatrizes wie Joghurt, Milch und Babynahrung erfolgreich angewendet. Ausgehend von unseren Ergebnissen scheint der Assay ein gutes Werkzeug für großangelegte Screening von Proben aus der Lebensmittelkette.
Multiplex-Nachweis Von Mikroorganismen Und Pflanzen Giftstoffe Durch Immunoaffinity Bereicherung Und Matrix-unterstützte Laser-Desorption/Ionisation-Massenspektrometrie
Pflanze und mikrobielle Toxine wie Ricin, Staphylokokken Enterotoxin B (SEB) und die Botulinumneurotoxine (BoNT) gelten als potentielle biologische Kampfstoffe. Spezifische Screening-Methoden sind deshalb erforderlich, die eindeutige und sensible Identifizierung von diesen betroffen, besonders für das Auftreten der Toxine in komplexe Matrizen ermöglichen. Die vorliegende Studie beschreibt eine Kombination eines Multiplex-Immunoaffinity Reinigung Ansatzes, gefolgt von Matrix assisted Laser Desorption/Ionisation (MALDI)-basierte Erkennung für die gleichzeitige Ermittlung Rizin, SEB, BoNT/A und BoNT/B. Die Methode umfasst einen Affinität Bereicherung Schritt, mit spezifischen monoklonalen Antikörpern für die vier Toxine, die aus einem Pool von Antikörpern ausgewählt wurden. Die markierten Antikörper können für spezifische und gleichzeitige Erfassung von Rizin, SEB, BoNT/A, BoNT/B und der entsprechenden BoNT-komplexe. Diese wurden später durch MALDI Time-of-Flight (TOF) Massenspektrometrie (MS), folgende tryptic Digest gekennzeichnet. Die Empfindlichkeit der Technik war etwa 500 Fmol aller Gifte. Diese Toxine wurden nachweisbar innerhalb von 8 Stunden, auch wenn in komplexe Matrizen wie Milch oder Saft vorhanden. Ferner darf die MALDI-basierte multiplex-Assays für die Diskriminierung von eng verwandten BoNT Sero- und Subtypen, wie einen echten Fall von lebensmittelbedingten Botulismus in Deutschland.
Der Fall Von Botulinumtoxin in Milch: Experimentelle Daten
Botulinumneurotoxin (BoNT) ist die giftigste Substanz, die Mann und den Erreger des Botulismus bekannt. Aufgrund seiner hohen Toxizität und die Verfügbarkeit von den produzierenden Organismus Clostridium Botulinum gilt BoNT als potentielle biologische Kriegsführung-Agent. Wegen des milden Pasteurisierung Prozess, als auch schnelle Produktvertrieb und Verbrauch wurde die Lieferkette Milch lange ein potenzielles Ziel von einen bioterroristischen Anschlag angesehen. Da, nach unserem Wissen keine empirischen Daten über die Inaktivierung von BoNT in der Milch während der Pasteurisierung zu diesem Zeitpunkt vorliegen, untersucht wir die Aktivitäten von BoNT Typ A (BoNT/A) und BoNT/B, sowie ihre jeweiligen komplexe, während einer Labormaßstab Pasteurisierung. Wenn wir Milch Aktivität der alkalischen Phosphatase,, welche ein branchenweit akzeptierte Parameter der erfolgreich abgeschlossenen Pasteurisierung ist überwacht, bewiesen unsere Methode vergleichbar mit der industriellen Prozess. Nachdem Spike mit einer gewissen BoNT/A-Heizung Rohmilch oder BoNT/B oder eins von ihren jeweiligen komplexen, die strukturelle Integrität des Toxins wurde durch Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) und seine funktionelle Aktivität durch Maus-Bioassay bestimmt. Wir bewiesen, dass Norm Pasteurisieren bei 72 Grad C für 15 s inaktiviert mindestens 99,99 % von BoNT/A und BoNT/B und mindestens 99,5 % ihrer jeweiligen komplexe. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass wenn BoNT oder ihre komplexe absichtlich in die Milch-Supply-Chain freigesetzt wurden, Norm Pasteurisierung Bedingungen ihrer Tätigkeit viel dramatischer, als ursprünglich erwartet und würde somit Gefahr des viel diskutierten "BoNT in Milch" Szenarios niedrigere.
Pentaplexed Quantitative Echtzeit-PCR Assay Für Die Simultane Detektion Und Quantifizierung Von Botulinum Neurotoxin-produzierenden Clostridien in Lebensmitteln Und Klinischen Proben
Botulinumneurotoxine werden durch das anaerobe Bakterium Clostridium Botulinum produziert und gliedern sich in sieben verschiedene Serotypen (A bis G) zu Botulismus bei Tieren und Menschen führen kann. In dieser Studie ein Multiplexer quantitativer Echtzeit-PCR-assay für die simultane Detektion der menschlichen pathogenen C. Botulinum Serotypen A, B, E und F entwickelt wurde. Auf der Grundlage der TaqMan-Chemie, verwendeten wir fünf einzelne Grundierung-Probe-Sets innerhalb einer PCR, kombinieren beide minor Groove Binder - und Nukleinsäure-haltigen Sonden gesperrt. Jede Hydrolyse-Sonde wurde individuell beschriftet mit unterscheidbar Fluorochrom, wodurch Diskriminierung zwischen der Serotypen A, B, E und F. Zur Vermeidung falsch-Negative Ergebnisse, gestalteten wir eine interne Amplifikationskontrolle, die gleichzeitig mit den vier Zielgene verstärkt wurde, woraus sich somit einen Pentaplexed-PCR-Ansatz mit 95 % Erkennungsrate Wahrscheinlichkeiten zwischen 7 und 287 Genom-Äquivalente pro PCR. Darüber hinaus entwickelten wir sechs einzelne Singleplex Echtzeit-PCR-Assays basierend auf die TaqMan-Chemie zum Nachweis von C. Botulinum-Serotypen A, B, C, D, E und F. Bei der Analyse von 42 C. Botulinum und 57 nicht-C. Botulinum-Stämme, die Singleplex und multiplex-PCR-Assays zeigte eine ausgezeichnete Spezifität. Mit Pfennigabsatz Lebensmittelproben waren wir zwischen 10 Absätze 3 und 10 Absatz 5 KBE/ml, bzw. zu erkennen. Darüber hinaus konnten wir C. Botulinum in Proben aus mehrere Fälle von Botulismus in Deutschland zu erkennen. Insgesamt Pentaplexed Assays zeigten hohe Sensitivität und Spezifität und erlaubt die gleichzeitige Screening und Differenzierung von Exemplaren für C. Botulinum A, B, E und F.
Ricinus Communis Vergiftungen in Der Menschlichen Und Veterinary Medicine-A Zusammenfassung Der Reale Fälle
Versehentliche oder beabsichtigte Ricinus Communis Vergiftungen bei Mensch und Tier sind seit Jahrhunderten bekannt, aber der Erreger blieb schwer bis 1888 als Stillmark die Toxizität für die Lektin-Rizin zurückzuführen. Ricinus Communis wird großtechnisch zur Herstellung von Rizinusöl weltweit angebaut. Als Nebenprodukt bei Rizinusöl Herstellung ist Rizin Masse über 1 Million Tonnen pro Jahr produziert. Auf der Grundlage seiner Verfügbarkeit, Toxizität, einfache Zubereitung und der derzeitige Mangel an medizinischen Gegenmaßnahmen hat Rizin als potentielle biologische Kriegsführung-Agent Aufmerksamkeit gewonnen. Die Samen enthalten auch die weniger giftig, aber hochgradig homologe Ricinus Communis Agglutinin und das Alkaloid Ricinine, und insbesondere Letzteres einsetzbar, Vergiftungen zu verfolgen. Nach der Ölförderung und Entgiftung dient der entfetteten Presse-Kuchen als organischer Dünger und als geringwertige Feed. In diesem Zusammenhang gab es sporadische Berichte aus verschiedenen Ländern beschreiben Tiere Vergiftungen nach Aufnahme von offensichtlich unzureichend entgiftete Dünger. Beobachtungen in Deutschland über mehrere Jahre, jedoch haben uns veranlasst, spekulieren, dass der Entgiftungsprozess ist nicht immer gründlich durchgeführt und kontrolliert, fordert internationale Regelungen, die in Dünger eine Rizin-Schwelle deutlich. In diesem Bericht fassen wir wissen über beabsichtigte und unbeabsichtigte Vergiftung mit Rizin oder Kastor Samen sowohl bei Mensch und Tier, mit einem besonderen Schwerpunkt auf Vergiftungen durch unsachgemäß entgiftete Castor Bean Mahlzeit und forensische Analysen.
