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Articles by Diane Ramos in JoVE
JoVE General
Nel protocollo in situ per Ali di farfalla pupa Utilizzando Riboprobes
1Department of Biological Sciences, SUNY-University at Buffalo, 2Dept. Ecology and Evolutionary Biology, Yale University
Al fine di esaminare l'espressione genica nel tessuto ala pupa di Bicyclus anynana, presentiamo un protocollo ottimizzato per ibridazioni in situ utilizzando riboprobes. Forniamo anche linee guida per l'ottimizzazione di questo protocollo per l'utilizzo in ali pupa di altre specie di lepidotteri.
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Trasformazione Germinale Della Farfalla Bicyclus Anynana
Teoria ecologica ed evolutiva frequentemente è stata ispirata dalla diversità dei modelli di colore sulle ali delle farfalle. Più recentemente, questi modelli vario sono diventati sistemi modello per studiare l'evoluzione dei meccanismi di sviluppo. Una tecnica che faciliterà la comprensione dello sviluppo di colore-pattern farfalla è la trasformazione di germline. Trasformazione di germline permessi test funzionali dei prodotti genici candidati e delle regioni cis-regolatori e fornisce un mezzo per generare nuovi mutanti colore-pattern di mutagenesi inserzionale. Riportiamo la trasformazione riuscita della farfalla satyrid africana Bicyclus anynana con due vettori diversi elemento trasponibile, Hermes e piggyBac, ogni trasporto sequenze codificanti EGFP guidato dalla 3XP3 sintetica enhancer che spinge l'espressione genica negli occhi. Linee candidato identificati da screening per EGFP negli occhi degli adulti sono stati successivamente confermati dall'amplificazione di PCR di un frammento di EGFP codifica la sequenza del DNA genomico. DNA che circonda gli inserimenti di accompagnamento è stato amplificato dalla PCR inversa e sequenziato. Tassi di trasformazione erano per piggyBac il 5% e 10,2% per Hermes. In definitiva, i nuovi dati generati da queste tecniche possono permettere una comprensione integrata della genetica dello sviluppo della formazione di colore-pattern e dei processi ecologici ed evolutivi in cui questi modelli giocano un ruolo.
Comparative Intuizioni in Domande Di Omologia Modello Ala Lepidotteri
Farfalla e falena ocelli possono condividere un aspetto simile, che coinvolge più anelli concentrici di scaglie colorate, ma che si verificano di solito in posizioni non-omologhe sull'ala. All'interno le farfalle, d'altra parte, macchie che condividono la stessa posizione omologa possono non condividere la struttura di anello concentrico; e, in specie di farfalle che hanno ocelli con anelli concentrici, ocelli ectopiche con una simile struttura ad anello possono essere indotta mediante un semplice epidermico della ferita. Nella misura in cui tutti questi ocelli, naturali o indotte, condividono simili geni e meccanismi dello sviluppo è qui indagata mediante localizzazioni in situ della proteina in specie selezionate di farfalla e falena. Oltre a guardare alcuni dei fattori di trascrizione precedentemente identificati come essere coinvolti nella formazione di eyespot, abbiamo testato anche il coinvolgimento dei geni candidati dalle vie di segnalazione Gabrile e TGF-beta come morfogeni putativo per lo sviluppo di eyespot.
Controllo Temporale E Spaziale Dell'espressione Del Transgene Mediante Induzione Laser Del Promotore Hsp70
Precisa regolazione temporale e spaziale dell'espressione del transgene è uno strumento fondamentale per studiare la funzione del gene nello sviluppo degli organismi. Il più comunemente usato la tecnica per ottenere un controllo stretto dell'espressione del transgene, tuttavia, richiede l'utilizzo di specifici rinforzatori di DNA che sono difficili da caratterizzare in organismi non-modello. Qui, abbiamo cercato di eliminare la necessità di questo tipo di regolazione genica basato su sequenze e per aprire il campo della genetica funzionale a una più ampia gamma di organismi.
Approcci Transgenici Per Studiare Il Colore Ala Sviluppo in Lepidotteri Del Modello
I modelli estremamente diversi lepidotteri ala rendono utili modelli per studiare l'evoluzione di sviluppo e i cambiamenti molecolari che consentono. Fino ad ora, l'implicazione di geni candidati nella differenziazione dei modelli di colore ha si basava principalmente su prove correlational, cioè, modelli di espressione del gene in una mappatura ala sviluppo strettamente al modello colore adulto. L'uso di tecniche transgeniche in lepidotteri, tra cui la manipolazione dell'espressione genica, infine permetterà ai ricercatori di testare ipotesi di funzione del gene a vari livelli della gerarchia patterning, da segnalazione ligandi e fattori di trascrizione per gli enzimi del pigmento. Qui vi presentiamo una panoramica delle tecniche transgeniche impiegate nei sistemi di lepidotteri e aree dove ricerca attuale e futuro fornirà interessanti opportunità per approfondire la nostra comprensione dei meccanismi di evoluzione morfologica.
