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Articles by Dominika Kulinski in JoVE
JoVE General
Fabricación de los canales de microfluidos termoplástico
Department of Biomedical Engineering, Boston University
Aquí se demuestra cómo fabricar chips de microfluidos con termoplástico estampado en caliente y sellado por calor. Luego se muestra cómo utilizar la luz en la superficie in situ dirigidos injerto y la polimerización a través del chip sellado para formar las columnas compuestas en fase sólida.
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Ejemplo De Módulo De Preparación Para La Lisis Bacteriana Y Aislamiento De ADN a Partir De Orina Humana
Sílice impregnado columnas monolíticas de polímero puede proporcionar un método simple para lisar y extracción de ADN de bacterias dentro de los chips de microfluidos. Aquí se utiliza Escherichia coli como organismo de prueba por un punto de atención termoplástico módulo de microfluidos diseñado para disfrutar de una muestra de orina, se mezcla con solución amortiguadora de lisis, y realizar un producto químico híbrido / lisis mecánica y extracción en fase sólida de los ácidos nucleicos de la muestra. Para demostrar la prueba de concepto, que las muestras de orina humana dopada hematuric con E. coli en concentraciones que van desde 10 (1) 10 (5) unidades formadoras de colonias / ml (UFC / mL) para simular muestras de los pacientes. A continuación realizó en el chip de lisis y extracción de ADN. El ADN bacteriano se amplificó utilizando en tiempo real lisis PCR demostrando y el aislamiento hasta 10 (1) UFC / ml. Los resultados fueron comparables a un equipo comercial en concentraciones más altas y un mejor desempeño en la recuperación de ADN en concentraciones más bajas.
Lisis Celular Y La Extracción De ADN De Las Bacterias Gram-positivas Y Gram-negativas De La Sangre Completa En Un Chip De Microfluidos Desechable
La sepsis causada por bacterias gram positivas y gram-es la causa principal de muerte en UCI no coronarias y la décima causa de muerte en los Estados Unidos. Hemos desarrollado una plataforma de preparación de muestras de microfluidos para una rápida chip de detección de organismos infecciosos para el diagnóstico de los puntos de atención. Los chips de microfluidos están hechas de un material termoplástico sólido y puede ser fácilmente multiplexada para aplicaciones de alto rendimiento. Las bacterias se lisan en el chip a través de productos químicos híbrido / método mecánico. Una vez lisadas, el ADN bacteriano se aísla usando un cordón de sílice microescala / compuesto de polímero sólido de la fase de extracción (SPE) de la columna. Lisis se confirmó a través fuera del chip PCR en tiempo real. Se aislaron y se detecta tanto gram-negativas (Escherichia coli) y gram-positivos (Bacillussubtilis y Enterococcus faecalis) ADN genómico de bacterias de microlitros escala pinchos muestras de sangre humana. El sistema funciona mejor para bacterias gram-negativas que lo hace por bacterias gram-positivas, con los límites de detección en 10 (2) UFC / ml y 10 (3) -10 (4) UFC / ml, respectivamente. Los tiempos totales de extracción son menos de una hora y puede reducir aún más mediante la alteración de la geometría del canal y el bombeo de configuración.
