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Articles by Dor Salomon in JoVE
JoVE General
细菌III型效应，在酵母中的表达诱导的生长抑制的表型鉴定
Department of Plant Sciences, Tel Aviv University
在这个视频中，我们描述酵母效应引起的生长抑制表型鉴定的细菌Ⅲ型效应的表达程序。这种表型，随后可利用澄清效应功能和目标。
Other articles by Dor Salomon on PubMed
绕过番茄小分子配体取力器耐药蛋白激酶活性。
番茄 (白毛 lycopersicum) 蛋白激酶取力器赋予野火抗性光伏。番茄细菌表达效应蛋白 AvrPto 和 AvrPtoB。取力器具体触发激活免疫应答的直接物理交互确认这两个产生影响的手段。在这里，我们用化学遗传的办法，使取力器认识到 PP1，ATP 竞争性的小分子抑制剂的类似物。通过使用 PP1 类似物致敏取力器结合 （Pto(as))，我们审查了取力器激酶活性效应识别和信号转导中的作用。引人注目的是，虽然 PP1 类似物有效地抑制激酶活性的体外的 Pto(as)，他们增强 Pto(as) 与 AvrPto 和 AvrPtoB 的互动在酵母双杂交系统中。此外，PP1 类似物，Pto(as) 绕过突变在取力器 AvrPto 相互作用的关键自磷酸化站点或催化基本残留物及与这两个产生影响的手段进行了交流。此外，当着 PP1 模拟 3 MB-PP1，Pto(as) 激酶缺陷形式触发 AvrPto 依赖于植物体内的过敏反应。这些研究结果表明，而不是本身，构象变化可能引发的自磷酸化在取力器和模仿的配体结合中 Pto(as) 的磷酸化是识别细菌产生影响的手段的前提条件。之后承认，激酶活性似乎是可有可无的动力输出信号在足底。此处用于制定具体的小分子抑制剂取力器的化学基因策略表示体内其他植物蛋白激酶的生物学功能研究的宝贵工具。
功能分析植物蛋白激酶的化学遗传方法。
植物基因编码的蛋白激酶的数百名，但只为一小部分人的确切职能和磷酸化的目标已经确定。最近，我们应用化学遗传的办法，提高认识番茄丝氨酸/苏氨酸激酶取力器到类似物 PP1，ATP 竞争和细胞渗透性小分子抑制剂。取力器激酶通过激活免疫应答的细菌产生的特定的识别后赋予 Pst 细菌的抗药性。通过模拟敏感取力器结合使用 PP1 类似物，我们新揭示取力器激酶活性效应识别和信号转导中的作用。在这里我们扩大这种向另一个与国防有关的植物蛋白激酶，MAP 激酶 LeMPK3 的化学遗传方法的使用。此外，我们表明模拟敏感但不是野生型激酶是能够使用非自然 N (6)-可用于标记的感兴趣的激酶直接磷酸化目标开发的 phosphodonors 作为修改三磷酸腺苷类似物。因此的激酶小分子抑制剂的 PP1 类似物对宣传和 ATP 可以是有效的工具，用于细胞功能的发现和磷酸化底物植物蛋白激酶。
Ssz1 还原由植 Cdc48 表示有缺陷的 Cdc48-ufd1-npl4 复杂的细胞内质网相关蛋白降解。
内质网 (ER)-相关的蛋白降解 (读书) 途径消除了从急诊室的异常蛋白质。Cdc48p-Ufd1p-Npl4p 的主要作用表示通过受损读书在酿酒酵母菌在这复杂的任何突变的基因。我们发现 SSZ1 cdc48-10 抑制器为遗传屏幕中并显示，它通过多效性药物抵抗 (PDR) 网络 Cdc48p 上调。PSSZ1 质粒恢复受损读书-M 6myc-Hmg2 cdc48 10、 ufd1-2 和 npl4-1 中的 SSZ1 删除虽然没有影响。Ssz1p 激活 Pdr1p，PDR 主调节器。事实上，PDR1 或 RPN4 及其目标基因的质粒 cdc48-10 p 水平升高，并且恢复读书-M cdc48-10。Rpn4p 调节转录的蛋白酶体亚基和 CDC48、 RPN4 删除废除了读书。然而，Deltarpn4 的减少蛋白酶体水平足以降解游离基底，而受损的读书-M 是减少了 Cdc48p 的结果，并恢复了 pCDC48 的表达。已更正的读书 M Cdc48 合作伙伴 ufd1-2 和 npl4-1 pCDC48 质粒，hypomorphic 株和 pcdc48-10 粒，cdc48-10 细胞结合发现 pSSZ1 和 pcdc48-10 都不恢复读书-L CPY *-医管局，支持我们 Ssz1p 抑制效果植 Cdc48p 所带来的结论。
溃疡病的表达 Pv。vesicatoria 型三效应器在酵母中的影响细胞的生长和生存能力。
革兰阴性细菌溃疡病光伏。vesicatoria 是在番茄和辣椒黑斑病的因果代理。十、 白菜型油菜 pv。vesicatoria 致病性取决于进入宿主细胞传递效应蛋白的类型三、 分泌系统。我们假设一些十、 白菜型油菜光伏。vesicatoria 效应器目标保守真核细胞的过程和审查表型诱导他们在酵母中的表达。从测试 21 效应器，14 抑制酵母生长在普通或应力条件。活力分析显示，XopB 和 XopF2 的减毒的细胞增殖、 AvrRxo1、 XopX 和 XopE1 虽然细胞毒。酵母细胞的 DNA 含量和形态特征的检查指出造成的 XopX 和 AvrRxo1 的细胞毒性与细胞周期逮捕在 G0/1 相关联。有趣的是，XopB、 XopE1、 XopF2、 XopX、 抑制生长在酵母中的 AvrRxo1 也曾引起表型，如黄化和细胞死亡、 表示在主机或非寄主植物。最后，导致表型酵母和植物中的几种效应能力是依赖于其指认催化残留或本地化图案。这项研究支持功能分析十、 白菜型油菜光伏利用酵母作为外源系统。vesicatoria 键入三产生影响的手段，并设置其真核分子目标识别和行动模式的阶段。
ATP 竞争分子促使植物蛋白激酶对特定的抑制作用。
蛋白激酶催化域的高保守的性质和低渗透性植物细胞膜挑战目标个人的蛋白激酶体内的特定抑制剂的发展。在这里，我们将介绍化学遗传的办法，特别是提高认识个别植物细胞渗透性小分子，不会妨碍野生型激酶激酶。在此方法中，在启用 ATP 竞争分子的特异性结合的酶的 ATP 结合网站中介绍了单个的氨基酸替代。细胞渗透性分子然后可以用于专门针对转基因拟南芥南芥植物不表示激酶的野生型形式的致敏的等位基因。这一战略提供了一个有用的工具功能特性的蛋白激酶的足底和他们是所涉及的信号传导通路夹层。
一个简单的基于酵母的策略以确定宿主细胞过程细菌效应蛋白的目标。
细菌效应蛋白，其中被递送到宿主细胞通过三分泌系统类型，通过调节各种主机细胞过程，有利于病原致病性革兰氏阴性菌中发挥关键作用。若要识别细胞的过程，有针对性的由细菌产生影响的手段，我们开发一个简单的策略，使用数组删除酵母菌装进单一的 96 井板。数组是唯一的因为它优化计算，尽管删除菌株的小数目，但它涵盖了大多数基因的酵母合成致命交互网络。数组中的删除菌株筛选为表达的兴趣细菌效应对过敏。高敏删除株然后分析其合成的致命交互，确定细菌的效应的潜在目标。我们描述识别，使用这种方法，有针对性的白叶枯病的细胞过程的白菜型油菜键入三效应器 XopE2。有趣的是，我们发现 XopE2 会影响酵母细胞壁和内质网应激反应。更一般地说，96 井的单个印版的使用使得甄别程序可以访问任何实验室和便利在短时间内大量细菌产生影响的手段的分析。因此，它提供了有前途的平台功能和细胞目标细菌产生影响的手段和其他毒蛋白的研究。
