Estrategias De Desarrollo De Producto De Alimentos En La Era De La Biotecnología Molecular

Antonie Van Leeuwenhoek. Aug, 2002  |  Pubmed ID: 12369196

Avances en ciencia y tecnología están acelerando el desarrollo de nuevos productos que afectan nuestros sistemas regulatorios. Genéticamente modificados o variedades de vegetales de Bioingeniería han entrado en el suministro de alimentos a nivel mundial, especialmente en los Estados Unidos La U.S. Food and Drug Administration regula sobre la premisa de "equivalencia sustancial" y ha desarrollado procedimientos de notificación pre-mercado y directrices voluntarias de etiquetado. Ministerio de salud, trabajo y bienestar de Japón controla los productos de la biotecnología y ha impuesto normas de etiquetado de la biotecnología. Sin embargo, la UE sigue siendo en un estancamiento reglamentario entre Estados miembros y tiene propuesta estricta trazabilidad y etiquetadas directrices. Estos requisitos están restringiendo las importaciones de alimentos de Bioingeniería y están creando un debate internacional. En contraste con variedades de plantas de bioingeniería, a nuestro conocimiento, no hay cepas de bacterias lácticas cultivos en el mercado que contienen rDNA. La mayoría de las cepas ha sido mejorada mediante la selección y mutagénesis. Sin embargo, verbal y electroporación han utilizado para la transferencia de plásmidos de resistencia nativa lactococcal Fago a cepas industriales. Además, se han introducido plásmidos para permitir la selección de ciertas características y luego eliminado por el curado. Los beneficios potenciales de Bioingeniería alimentos son de gran alcance y son una de las oportunidades más importantes de este siglo. Sin embargo, bioingeniería alimentos mantienen un debate emocional que está afectando el comercio mundial.

Identificación Del Determinante Anfitrión De Dos Fagos Prolato Cabeza Infectando Lactococcus Lactis

Virology. Apr, 2003  |  Pubmed ID: 12726722

Un gen responsable de la determinación de anfitrión fue identificado en dos cabezas prolato bacteriófagos de las cepas que especies de c2 de Lactococcus lactis. La identificación del gen determinante anfitrión se basó en baja homología de secuencia de ADN en un marco específico de lectura abierta (ORF) entre phages prolato cabezas con rangos de host diferente. Cuando un host que lleva esta ORF de un Fago en un plásmido fue infectado con otro Fago, obtuvimos phages con un rango de hospederos alterada con una frecuencia de 10(-6) a 10(-7). Secuenciación del fago DNA procedentes de 10 placas solas independientes confirmó que había ocurrido una recombinación genética en diferentes posiciones entre el ORF en el plásmido y la infección fago. La adsorción de los fagos recombinantes a sus anfitriones bacterianas también había cambiado para que coincida con el origen del fago del ORF. Por lo tanto, se concluye que este ORF claves para el determinante de la gama de anfitrión.

Desafíos Al Transferir Tecnología De Cepas De Lactococcus Laboratorio a Cepas Industriales

Genetics and Molecular Research : GMR. 2003  |  Pubmed ID: 12917807

Muchas cepas de Lactococcus genéticamente modificadas han sido construidas en los laboratorios de investigación alrededor del mundo. La mayoría de ellas ha originado de las cepas de laboratorio y por lo tanto hay varias barreras para su uso en un entorno industrial. Las cepas de laboratorio son a menudo plásmido libre y, en consecuencia, Lac - y Prt-, lo que no se puede crecer en la leche. Muchas de las técnicas utilizadas han sido optimizados para las cepas de laboratorio y su aplicación a las cepas industriales puede requerir una gran cantidad de esfuerzo. Organismos modificados genéticamente a menudo producidos en el laboratorio no ajustan a la definición publicada de 'alimenticia' (Johansen, 1999, enciclopedia de alimentos Microbiología, Academic Press, London, pp. 917-921) y una gran cantidad de esfuerzo es necesaria para eliminar indeseables secuencias de ADN. Como consecuencia, a menudo es necesario recrear las cepas en orígenes industriales antes de que las innovaciones que se describe en la literatura científica se pueden aplicar a la industria láctea del mundo real.

El Largo Y Sinuoso Camino Del Laboratorio De Investigación Para Aplicaciones Industriales De Bacterias Del ácido Láctico

FEMS Microbiology Reviews. Aug, 2005  |  Pubmed ID: 15935510

Se suceden constantemente las innovaciones de investigación en universidades, instituciones de investigación y laboratorios de investigación industrial. Estos son reportados en la literatura científica y presentados a la comunidad científica en varios congresos y simposios, así como a través de colaboraciones y contactos directos. Conversión de estos resultados de investigación en innovaciones útiles industrialmente, sin embargo, es mucho más complejo que generalmente apreciado. El largo y sinuoso camino del laboratorio de investigación a las aplicaciones industriales se ilustrará con dos ejemplos recientes de Chr. Hansen A/S: la aplicación en escala industrial de una nueva tecnología de producción basado en la respiración de Lactococcus lactis y la introducción al mercado de cepas de lactis L. construidos con tecnología de ADN recombinante.

Caracterización De Quimosina Recombinante De Camella Revela Características Superiores Para La Coagulación De La Leche Bovina Y Camella

Biochemical and Biophysical Research Communications. Apr, 2006  |  Pubmed ID: 16488399

Coagulación enzimática de la leche para la fabricación de queso consiste en la ruptura del vínculo scissile en la kappa caseína por una proteasa de ácido aspártico. Quimosina bovina es la enzima preferida, la combinación de una fuerte actividad de coagulación con una baja actividad proteolítica general. En el presente estudio, divulgamos la expresión y propiedades enzimáticas de quimosina camella recombinante expresadas en Aspergillus niger. Camella quimosina mostró tener diferentes características que la quimosina bovina. Camella quimosina exhibe una 70% mayor actividad de coagulación de leche bovina y tiene sólo el 20% de la actividad de la proteasa inespecíficas de quimosina bovina. Esto resulta en una proporción mayor séptuple de coagulación a general actividad proteolítica. La enzima es más termoestable de quimosina bovina. Análisis cinético demostraron que media saturación se logra con menos del 50% del sustrato necesario para la quimosina bovina y tasas de rotación son menores. Mientras que la leche de camella no puede ser coagulada con quimosina bovina, se encontró una alta actividad de coagulación con quimosina camella.

Conseguir Alta (OD) En Hemo

Nature Reviews. Microbiology. Apr, 2006  |  Pubmed ID: 17058350

Adaptación Y Respuesta De Bifidobacterium Animalis Subsp. Lactis a Bilis: Un Enfoque Fisiológico Y Proteómica

Applied and Environmental Microbiology. Nov, 2007  |  Pubmed ID: 17827318

Las sales biliares son detergentes naturales que facilitan la digestión y absorción de los componentes hidrofóbicos de la dieta. Sin embargo, su naturaleza anfifílicas hace muy inhibitoria para las bacterias e influye fuertemente en la supervivencia bacteriana en el tracto gastrointestinal. Adaptación y tolerancia de la tensión de la bilis, por tanto, es crucial para la persistencia de bacterias en el nicho de colon humano. Bifidobacterium animalis subsp. lactis, una bacteria probiótico con beneficios documentados, se aplica principalmente en productos lácteos fermentados. En este estudio, el efecto de las sales biliares en proteomas de B. animalis subsp. lactis 4549 IPLA y su resistente a la bilis derivados B. analizó animalis subsp. lactis 4549dOx, llevando a la identificación de proteínas que pueden representar los objetivos de la respuesta de sales biliares y adaptación en B. animalis subsp lactis. La comparación de la salvaje y las respuestas de la cepa resistente a la bilis permitió hipótesis sobre los mecanismos de resistencia adquiridos por la cepa resistente derivada sobre la respuesta de sales biliares en B. animalis subsp lactis. Además, en los niveles de productos finales metabólicos del shunt bífido y en el estado redox de las células se detectaron diferencias significativas también, que se correlacionan con algunas diferencias observadas entre los proteomas. Estos resultados indican que la adaptación y respuesta a bilis en B. animalis subsp. lactis implican varios mecanismos fisiológicos que conjuntamente se dedican a reducir el impacto nocivo de la bilis en la fisiología de la célula.

Streptococcus Thermophilus Base Genoma: Estudio De Hibridación Genómica Comparativa De 47 Cepas

Applied and Environmental Microbiology. Aug, 2008  |  Pubmed ID: 18539806

Una plataforma de microarrays de ADN basada en 2.200 genes de secuencias disponibles públicamente fue diseñada para Streptococcus thermophilus. Determinamos polimorfismos de nucleótido cómo en la punta de prueba del oligonucleótido de 65 a 75 mer secuencias afectan las señales de la hibridación. Entonces fueron utilizados los microarrays de hibridación genómica comparativa (CGH) de 47 lácteos cepas thermophilus de S.. Un análisis de los genes de exopolisacárido en cada cepa confirmó las conclusiones anteriores que esta clase de genes es de hecho muy variable. Un árbol filogenético basado en los datos CGH mostró distancias similares para la mayoría de las cepas, indicando el frecuente traslado de recombinación o gene dentro de S. thermophilus. Mediante la comparación de tamaños del genoma de los microarrays y la electroforesis en gel de campo pulsado, se estimó la cantidad de ADN desconocido en cada cepa. Se identificó un genoma de base compuesto por 1.271 genes detectados en todas las cepas de 47. Asimismo, se identificó un conjunto de genes de noncore detectados en sólo algunas cepas. Se propone el concepto de un genoma de núcleo industrial. Esto se compone de los genes en el genoma de núcleo más genes que son necesarios en un contexto industrial aplicado.

Especificidad Del Escote De Hemoglobina De Las Proteasas De Cisteína Plasmodium Falciparum Falcipain-2 Y Falcipain-3

PloS One. 2009  |  Pubmed ID: 19357776

Las proteasas de cisteína Plasmodium falciparum falcipain-2 y falcipain-3 degradarán hemoglobina de anfitrión para proporcionar aminoácidos para la síntesis de proteínas del parásito. Hidrólisis de la hemoglobina se ha descrito como un ordenado proceso iniciado por aspártico proteasas, pero inhibidores de la proteasa de cisteína bloquean completamente el proceso, lo que sugiere que las proteasas de cisteína también pueden iniciar la hidrólisis de la hemoglobina. Para caracterizar los roles específicos de falcipains, se utilizaron tres enfoques. En primer lugar, utilizando al azar p - P(4) del aminoácido sustrato bibliotecas, falcipain-2 y falcipain-3 demostraron gran preferencia por los sitios de escote con Leu en la posición de P(2). En segundo lugar, con la superposición de péptidos que abarca globina alfa y beta y proteólisis dependiente (18) O etiquetado, hidrólisis fue visto en muchos sitios de escote. En tercer lugar, con la hemoglobina intacta, se identificaron numerosos productos de escote. Nuestros resultados sugieren que la hemoglobina hidrólisis por parásitos de la malaria no es un proceso muy ordenado, pero más bien procede con escote rápido por falcipains en múltiples sitios. Sin embargo, falcipain-2 y falcipain-3 muestran especificidad fuerte para P(2) Leu en sustratos de péptido pequeño, de acuerdo con la especificidad en inhibidores de la molécula pequeña optimizado que fue identificado previamente. Estos resultados son consistentes con un papel principal de falcipain-2 y falcipain-3 en la hidrólisis de la hemoglobina por p. falciparum y con la posibilidad de desarrollar inhibidores de molécula pequeña con especificidad optimizado como agentes antimaláricos.

7SK SnRNP / P-TEFb Familia Elongación De La Transcripción Con Splicing Alternativo Y Es Esencial Para El Desarrollo De Vertebrados

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. May, 2009  |  Pubmed ID: 19416841

La expresión de genes eucariotas que comúnmente se controla en el nivel de la RNA polimerasa II (RNAPII) pausa posterior a la iniciación de la transcripción. Elongación de la transcripción es estimulada por la elongación positiva del factor de transcripción b (P-TEFb) quinasa, que se suprime en el 7SK ribonucleoproteína pequeña nuclear (7SK snRNP). Sin embargo, el significado funcional de la biogénesis y 7SK snRNP siguen siendo poco conocidos. En este caso, nos informan de que LARP7, BCDIN3, y el no codificante 7SK pequeños ARN nucleares (7SK) son vitales para la formación y estabilidad de una célula de núcleo resistente a la tensión snRNP 7SK. Nuestros estudios funcionales demuestran que snRNP 7SK no sólo es crítica para el control de la transcripción de elongación, pero también para regular el empalme alternativo de pre-ARNm. Utilizando un ensayo de expresión transitoria de empalme, nos encontramos con que la desintegración snRNP 7SK promueve la inclusión de un exón alternativa a través de la ocupación aumentó de P-TEFb, SER2-fosforilado RNAPII (SER2-P), y la SF2/ASF factor de empalme en el minigen. Es importante destacar que el derribo de larp7 o bcdin3 orthologues en embriones de pez cebra desestabiliza 7SK y causa graves defectos en el desarrollo y aberrantes de empalme de las transcripciones analizadas. Estos resultados revelan un papel clave para la P-TEFb en el acoplamiento de la transcripción de elongación con el splicing alternativo, y sugieren que el mantenimiento básico 7SK snRNP es esencial para el desarrollo de los vertebrados.

Multi-sitio De Evaluación De La Precisión Y La Reproducibilidad De Los Múltiples De Reacción a Base De Monitoreo-Las Mediciones De Proteínas En El Plasma

Nature Biotechnology. Jul, 2009  |  Pubmed ID: 19561596

La verificación de biomarcadores candidatos se basa en los ensayos cuantitativos específicos optimizados para la detección selectiva de las proteínas diana, y está cada vez más como un paso crítico en el descubrimiento de nuevas que el descubrimiento de biomarcadores puentes imparcial para la validación preclínica. A pesar de los distintos laboratorios han demostrado que la monitorización de reacción múltiple (MRM) acoplada a espectrometría de masas por dilución isotópica puede cuantificar biomarcadores candidatos de proteínas en el plasma, la reproducibilidad y la transferibilidad de estas pruebas entre los laboratorios no han sido demostrados. Se describe un estudio de varios laboratorios para evaluar la reproducibilidad, la recuperación, rango dinámico lineal y los límites de detección y cuantificación de MRM multiplexadas, a base de ensayos, llevados a cabo por el NCI CPTAC. El uso de materiales comunes y protocolos estandarizados, se demuestra que estos ensayos pueden ser altamente reproducible dentro y fuera de los laboratorios y plataformas de instrumentos, y son sensibles a bajas concentraciones de proteína taza / ml en plasma no fraccionada. Se aportan datos y puntos de referencia contra el cual los distintos laboratorios pueden comparar su desempeño y evaluar nuevas tecnologías para la verificación de biomarcadores en el plasma.

Identificación Del Factor GATA TRPS1 Como Represor De La Promotora De La Osteocalcina

The Journal of Biological Chemistry. Nov, 2009  |  Pubmed ID: 19759027

Un análisis proteómico de proteínas a la osteocalcina OSE2 secuencia del promotor ratón osteocalcina identificaron TRPS1 como regulador de la transcripción de la osteocalcina. Mutaciones en el gene TRPS1 son responsables de síndrome tricho-rhino-phalangien tipo humano, que se caracteriza por anomalías esqueléticas y craneofaciales. TRPS1 ha demostrado para obligar a secuencias reguladoras promotor que contiene sitios de unión de consenso GATA y para reprimir la transcripción de genes implicados en la diferenciación de condrocitos. Aquí mostramos que TRPS1 puede atar directamente el promotor de la osteocalcina en la presencia o ausencia de Runx2. TRPS1 se une a través de una secuencia de unión de la GATA en el promotor proximal del gen de la osteocalcina. El sitio de unión de la GATA se conserva en ratones, los seres humanos y ratas, aunque no son su ubicación y orientación. El ratón o la secuencia de unión de GATA humana abroga vinculante de TRPS1 al promotor de osteocalcina. Mostramos que TRPS1 se expresa en células de osteosarcoma y sobre la inducción de la diferenciación de osteoblastos en células estromales de la médula ósea de ratón primaria y que TRPS1 regula la expresión de la osteocalcina en ambos tipos celulares. La expresión de TRPS1 modula la formación de matriz ósea mineralizada en diferenciar las células osteoblastos. Estos datos sugieren un papel para TRPS1 en la diferenciación de osteoblastos, además su función descrita en condrogénesis.

La Edulcoración De La Mezcla: Adición De Glucosilación De La Ecuación De Descubrimiento De Biomarcadores

Clinical Chemistry. Feb, 2010  |  Pubmed ID: 19959616

El cáncer tiene profundos efectos en la expresión de genes, incluida la maquinaria de glicosilación de una célula. Por lo tanto, los tumores producen glicoproteínas que llevan oligosacáridos con estructuras que son muy diferentes de la misma proteína producida por una célula normal. Una sola proteína puede tener muchos sitios de glicosilación que grandemente amplificar las señales que generan en comparación con espinas dorsales de sus proteínas.

Completar La Secuencia Del Genoma De Bifidobacterium Animalis Subsp. Lactis BB-12, Una Cepa Probiótica Consumidos

Journal of Bacteriology. May, 2010  |  Pubmed ID: 20190051

Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB-12 es una cepa de probiótico disponible comercialmente usada en todo el mundo en una variedad de alimentos funcionales y suplementos dietéticos. Los beneficios de BB-12 se han documentado en varios ensayos clínicos independientes. Determinación de la secuencia completa del genoma revela un solo cromosoma circular de 1.942.198 bp con 1.642 predijo genes de codificación de proteínas, 4 operones de rRNA y 52 genes de tRNA. Conocimiento de esta secuencia llevará a conocer las características específicas que le dan a esta variedad de sus propiedades probióticas.

Utilizando La Ruta De Biosíntesis O Antígeno Lipopolisacárido En Escherichia Coli Para Interrogar a La Especificidad De Sustrato De Genes Exógenos Glicosiltransferasa En Un Enfoque Combinatorio

Glycobiology. Jun, 2010  |  Pubmed ID: 20208062

En trabajos anteriores, nuestro laboratorio generó novela quiméricas lipopolisacáridos (LPS) en Escherichia coli transformadas con un plásmido que contiene genes de síntesis de lipooligosaccharide exógeno (lsg) de Haemophilus influenzae. Análisis de estas quimeras novela oligosacárido-LPS permitió la caracterización de las estructuras de hidratos de carbono generados por varios genes putativos glicosiltransferasa en el locus de lsg. Aquí, adaptamos esta estrategia para construir un enfoque modular para estudiar las propiedades sintéticas de glicosiltransferasas individual expresado solo y en combinaciones. Para ello, un conjunto de expresión vectores con genes de glicosiltransferasa putativos de uno a cuatro desde el locus lsg, lsgC-F, se transformaron en e. coli K12 (XL-1) que es defectuoso en la biosíntesis de LPS O antígeno. Esta estrategia se basó en la inclusión de la H. influenzae gene producto lsgG en cada construcción de plásmido, que rescata parcialmente el defecto de biosíntesis de LPS de E. coli por cebado Uridina difosfato-undecaprenyl en el camino de WecA-dependiente O antígeno sintético con n-acetil-glucosamina (GlcNAc). Este GlcNAc-undecaprenyl luego sirvió como un sustrato aceptor para más extensión de carbohidratos por glicosiltransferasas transformada. Los glicanos quiméricos LPS-ligado resultantes fueron aislados de sus construcciones de e. coli y caracterizan por espectrometría de masas, análisis de metilación y enzyme-linked immunosorbent assays. Estos datos estructurales permitieron la especificidad de varios glicosiltransferasas asignarse inequívocamente a genes individuales. LsgF fue encontrado para transferir una galactosa (Gal) para terminal GlcNAc. LsgE fue encontrado para transferir GlcNAc a Gal-GlcNAc, y tanto LsgF como LsgD se encontraron para transferir Gal GlcNAc-Gal-GlcNAc pero con diferentes especificidades de acoplamiento. Este método puede ser generalizado y fácilmente adaptado para estudiar la especificidad de sustrato de otras glicosiltransferasas putativos o desacostumbrado.

Un Flujo De Trabajo De Afinidad De Lectina Orientación Glycosite Específicos, Relacionados Con El Cáncer Estructuras De Carbohidratos En La Tripsina Digerido Con Plasma Humano

Analytical Biochemistry. Jan, 2011  |  Pubmed ID: 20705048

Los glicanos son las células específicas del tipo de proteína, modificaciones postraduccionales que se modulan en los procesos de desarrollo y de la enfermedad. Como tal, glicoproteínas son candidatos atractivos biomarcadores. A continuación, describimos una espectrometría de masas basado en flujo de trabajo que incorpora la cromatografía de afinidad de lectina para enriquecer las proteínas que transportan determinadas estructuras de glicano. A medida que aumenta en sialilación y fucosilación destacan entre asociados al cáncer modificaciones, nos centramos en Sambucus nigra aglutinina (SNA) y la lectina Aleuria aurantia (AAL), lectinas que se unen con ácido siálico y las estructuras de fucosa que contienen, respectivamente. Glicopéptidos fucosilados y sialilada de lactoferrina humana sirvieron como controles positivos, y alto contenido en manosa estructuras de invertasa de levadura sirvieron como controles negativos. Las normas se disparó en múltiples sistemas de eliminación de afinidad (MARS) de 14 empobrecido, digerido con tripsina plasma humano de donantes sanos. Las muestras se cargaron en columnas de lectina, separados por HPLC en flujo continuo y fracciones enlazados, y tratados con el péptido N-glicosidasa F para eliminar N-glicanos ligados. Las fracciones peptídicas desglicosiladas fueron interrogados por HPLC-MS/MS ESI. Se identificaron un total de 122 glicoproteínas del plasma humano que contienen 247 glycosites únicas. Es importante destacar que varias de las glicoproteínas observados (por ejemplo, cadherina 5 y neutrófilos lipocalina gelatinasa asociada) normalmente circulan en el plasma a baja nanogramos por mililitro niveles. En conjunto, estos resultados proporcionan la espectrometría de masas basada en la evidencia de la utilidad de la incorporación de la separación lectina-plataformas en las tuberías descubrimiento de biomarcadores de cáncer.

Detección De Genes De Resistencia a Los Antimicrobianos Y Factores De Virulencia Por Secuenciación Del Genoma

Applied and Environmental Microbiology. Apr, 2011  |  Pubmed ID: 21335393

Secuenciación del genoma de segunda generación y alineación de la resultante Lee a en genomas de silico que contienen genes antimicrobianos de factor de resistencia y virulencia fueron utilizados para detectar genes indeseables en 28 cepas que podrían ser utilizados en la nutrición humana. No hay genes de factor de virulencia fueron detectados, mientras que varios aislamientos contienen genes de resistencia a los antimicrobianos.

El Complejo Ciclina K/Cdk12 Mantiene La Estabilidad Genómica Través De Regulación De La Expresión De Los Genes De Respuesta Al Daño Del ADN

Genes & Development. Oct, 2011  |  Pubmed ID: 22012619

Varios dependientes de ciclina-quinasa (CDK) complejos se han implicado en la regulación de la transcripción. En este estudio, hemos identificado un 70-kDa de ciclina K (CycK) que se une Cdk12 y Cdk13 para formar dos complejos diferentes CycK/Cdk12 o CycK/Cdk13) en las células humanas. El complejo CycK/Cdk12 regula la fosforilación de SER2 en el dominio C-terminal de la RNA polimerasa II y la expresión de un pequeño subconjunto de los genes humanos, como se revela en microarrays de expresión. El agotamiento de los CycK/Cdk12 resultados en disminución de expresión de los genes predominantemente de largo con un gran número de exones. El grupo más importante de genes regulados son los genes de respuesta a daño en el DNA, incluyendo los reguladores críticos de la estabilidad genómica: BRCA1 (cáncer de mama y de ovario de tipo 1 es la proteína de susceptibilidad 1), ATR (ataxia telangiectasia y Rad3 relacionadas), las FANCI y FANCD2. Se demuestra que CycK/Cdk12, en lugar de CycK/Cdk13, es necesario para su expresión. Nuclear funcionar-en los ensayos y inmunoprecipitaciones cromatina con la ARN polimerasa II en los genes BRCA1 y FANCI sugieren un defecto en la transcripción en ausencia de CycK/Cdk12. De acuerdo con estos hallazgos, las células sin CycK/Cdk12 provoca lesiones del ADN espontánea y son sensibles a una variedad de agentes de daño en el DNA. Se concluye que a través de regulación de la expresión de genes de ADN de respuesta daños, CycK/Cdk12 protege a las células de la inestabilidad genómica. El papel esencial de CycK para los organismos in vivo se ve apoyada por el resultado de que la inactivación genética de CycK en ratones causa letalidad embrionaria temprana.

Un Flujo De Descubrimiento De Lectinas Cromatografía/masa Espectrometría Identifica Posibles Biomarcadores Del Cáncer De Mama Agresivo

Journal of Proteome Research. Feb, 2012  |  Pubmed ID: 22309216

Utilizamos un lectina cromatografía/MS-enfoque basado en pantalla acondicionado medio de un panel de luminal (menos agresivo) y triple negativo (más agresivas) líneas de células de cáncer de mama (n = 5/subtipo). Las muestras fueron fraccionadas utilizando las lectinas Aleuria aurantia (AAL) y Sambucus nigra aglutinina (SNA), que reconocen la fucosa y ácido siálico, respectivamente. Las fracciones consolidadas fueron enzimático N-deglycosylated y analizan por LC-MS/MS. En total, se identificaron 533 glicoproteínas, ~ 90% de los cuales eran los componentes de la célula matriz extracelular o superficial. Observamos 1011 único glycosites, 100 de los cuales fueron detectados únicamente en líneas negativas triple ≥ 3. Análisis estadístico indicaron que varios de estos glycosites fueron triple negativo específico y así potenciales biomarcadores para este subtipo de tumor. Un análisis de datos RNAseq reveló que aproximadamente la mitad de los mRNAs de codificación de los andamios de la proteína que lleva a glycosites de biomarcadores potenciales fueron alza en triple negativo frente a líneas celulares luminal, y que un número de genes que codifican Fucosil - o sialiltransferasas fueron expresado diferencialmente entre los dos subtipos, sugiriendo que alteraciones en la glicosilación pueden conducir también identificación de candidatos. En particular, las glicoproteínas de la que se derivan estos candidatos putativos biomarcador participan en procesos relacionados con el cáncer. Así, pueden representar nuevas dianas terapéuticas para este subtipo de tumor agresivo.