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Articles by Eric Mossel in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Système Alphavirus Transducing: des outils de visualisation des infections dans les moustiques vecteurs
Microbiology, Immunology, and Pathology, Colorado State University
Méthodes d'utilisation des systèmes de transduction alphavirus pour exprimer des reporters fluorescents in vitro et chez les moustiques adultes sont décrits. Cette technique peut être adaptée pour exprimer toute protéine d'intérêt en remplacement ou en complément à un journaliste.
Other articles by Eric Mossel on PubMed
Rotavirus Génome Segment 7 (NSP3) Est Un Facteur Déterminant De Propagation Extra-intestinales Chez La Souris Néonatale
Nous avons utilisé le modèle de souris nouveau-nées des infections à rotavirus pour étudier la propagation extra-intestinal suite à l'inoculation par voie orale. Les ratons de cinq jours ont été inoculés avec SA11-Cl3, Cl4-SA11, SA11-4F, RRV ou B223. À l'aide de détection de virus dans le foie comme une détermination de proxy pour propagation extra-intestinal, souches de rotavirus capables de propagation extra-intestinale à haute fréquence (rotavirus rhésus [RRV]) et à très basse fréquence (SA11-Cl4) ont été identifiés. Les deux souches infectées productive du tractus gastro-intestinal. L'inoculation par voie orale de souris avec RRV / virus réassortis SA11-Cl4 et détermination des concentrations de virus dans le tube digestif et le foie ont révélé que le phénotype de propagation extra-intestinal séparés avec segment de génome RRV 7 à un haut niveau de signification (P = 10(-3)). Segment RRV 7 séparés aussi avec la croissance du virus dans le tube digestif (P = 10(-5)). Bien que l'infection de l'intestin est clairement nécessaire à tropisme pour le foie, il y n'avait aucun corrélation entre les concentrations de virus dans le tube digestif et de détection de virus dans le foie. Cinq jours après l'administration intrapéritonéale de contourner la barrière intestinale au virus de se propager, RRV et SA11-Cl4 tous les deux ont été retrouvés dans le foie. Cependant, seulement (RRV) a été trouvé dans la foie après l'inoculation sous-cutanée, ce qui suggère que ce site périphérique présente un obstacle similaire au virus de se propager dans le tube digestif. Analyse de la séquence du segment 7 de RRV parental et SA11-Cl4 et réassortis sélectionnés a montré que les différences de (i) les acides aminés ont été répartis dans les régions codantes et non concentre, dans n'importe quel motif fonctionnel particulier et (ii) parental a été préservée dans les virus réassortis. Ces données supportent l'hypothèse que NSP3, codée par segment du génome 7, joue un rôle important dans la croissance virale dans l'intestin et la propagation de sites périphériques. Le mécanisme du tropisme médiée par NSP3 est sous investigation.
Un Mécanisme Lymphatique Du Rotavirus Extra-intestinal Répandre Chez La Souris Néonatale
Nous avons utilisé le modèle des souris nouveau-nées des souches de virus et l'infection rotavirus SA11-clone 4 (SA11-Cl4) et le rotavirus rhésus (RRV) pour examiner le mécanisme de propagation extra-intestinale de virus suite à l'inoculation par voie orale. Les virus propagation compétentes, RRV et réassortis R7, a montré une progression temporelle de l'intestin, de l'iléon terminal, aux ganglions lymphatiques mésentériques (MLN) et dans les tissus périphériques. SA11-Cl4 n'a pas été trouvée à l'extérieur de l'intestin. Virus réassorti S7, qui n'a pas pu atteindre le foie lors d'études antérieures (Mossel C. E. et R. F. Ramig, J. Virol. 76:6502-6509, 2002), a été retrouvée dans 60 % de la MLN, suggérant qu'il y a plusieurs déterminants de la propagation du virus de l'intestin à la GLM. Ségrégation phénotypique analyse identifié RRV génome segment 6 (VP6) comme un déterminant secondaire de la propagation du virus à la MLN (P = 0,02) dans les virus réassortis contenant le segment 7 héritées du parent de propagation-incompétents. Ces résultats suggèrent que chez la souris nouveau-nés infectée par voie orale, la propagation extra-intestinal du rotavirus se produit via une voie lymphatique, et le phénotype de propagation est principalement déterminé par NSP3 et peut être modifié par VP6.
L'interféron-bêta Et L'interféron-gamma En Synergie Inhibent La Réplication Du Sévère Aiguë Coronavirus De Liées Au Syndrome Respiratoire (SRAS)
Des études récentes ont montré que l'interféron-gamma (IFN-gamma) synergie avec IFN-alpha/bêta pour inhiber la réplication du virus ARN et l'ADN. Nous avons étudié les effets des interférons sur la reproduction de deux souches de sévère aiguë coronavirus de liées au syndrome respiratoire (SRAS). Alors que le traitement de Vero E6 cellules 100 U/ml d'IFN-bêta ou de réplication virale IFN-gamma légèrement réduit, le traitement par IFN-bêta et IFN-gamma a inhibé la formation de plaque de SRAS par 30 fois et réplication de 3 à 24 h et de > 1 x 5-Pliez à 48 et 72 h après l'infection. Ces études suggèrent que la combinaison traitement IFN justifie une enquête plus poussée comme traitement contre le SRAS.
Protéine De 3 a Pour Le Coronavirus Du Syndrome Respiratoire Aigu Sévère Est Une Protéine Structurale Virale
La présente étude a montré l'association d'un coronavirus du syndrome respiratoire aigu sévère (SCoV) protéine accessoire, 3 a, avec la membrane plasmique et les particules SCoV intracellulaires dans les cellules infectées. 3 a protéine semble subir des modifications post-traductionnelles dans les cellules infectées et fut incorporé en particules SCoV, établissant que la protéine de la 3 a est une protéine structurale SCoV.
L'expression ACE2 Exogène Permet à Des Lignées De Cellules Réfractaires à L'appui De La Réplication De Coronavirus Du Syndrome Respiratoire Aigu Sévère
De cellule 30 lignes et cellules primaires examinés, productive severe acute respiratory syndrome coronavirus (souche Urbani) (SARS-CoV) infection après inoculation de basse-multiplicité a été détectée dans seulement six : trois lignées de cellules épithéliales de la rein de singe vert africain (Vero Vero E6 et MA104), une lignée humaine d'épithéliales du colon (CaCo-2), une ligne épithéliales de rein de porc [PK(15)] et des cellules épithéliales pulmonaires vison (Mv 1 Lu). SARS-CoV produit une infection lytique dans MA104 cellules Vero et Vero E6, mais il n'y n'avait aucun effet cytopathique visible dans les cellules Caco-2, Lu 1 Mv ou PK(15). Cinétique de croissance multipas étaient identiques dans les cellules Vero E6 et MA104, avec titre maximal atteint 24 h après l'inoculation (hpi). Concentration en virus était maximale hpi 96 dans les cellules CaCo-2 et virus était continuellement à partir des cellules CaCo-2 infectées pendant au moins 6 semaines après l'infection. CaCo-2 était le type de cellules humaines seulement de 13 testé pris en charge la réplication efficace de SRAS. Expression du récepteur SARS-CoV, enzyme de conversion de l'angiotensine 2 (ECA2), a abouti à réplication SARS-CoV dans toutes les lignées cellulaires réfractaires examinés. Les titres obtenus sont variables et dépendent de la méthode d'expression ECA2.
Inhibition D'infectiosité Sévère Aiguë Respiratoire Associée à Syndrome De Coronavirus (CoV-SRAS) Par Les Peptides Analogues à La Protéine Virale Spike
Sévère aiguë respiratoire associée à syndrome de coronavirus (CoV-SRAS) est la cause d'une pneumonie atypique qui a touché l'Asie, l'Amérique du Nord et en Europe en 2002-2003. La glycoprotéine virale épi (S) est responsable de la médiation de liaison aux récepteurs et la fusion membranaire. Des études récentes ont proposé que la portion terminale du carboxyle (sous-unité S2) de la protéine S est une classe j'ai virale la protéine de fusion. L'échelle d'hydrophobicité interfaciale Wimley et blanc a été utilisé pour identifier les régions au sein de la sous-unité de CoV S2 qui peuvent associer préférentiellement des membranes lipidiques avec la prémisse que les peptides analogues à ces régions peuvent fonctionner en tant qu'inhibiteurs de l'infectivité virale. Cinq régions de grande hydrophobicité interfaciale couvrant toute la longueur de la sous-unité de S2 de SRAS et le virus de l'hépatite murine (MHV) ont été identifiées. Peptides analogues aux régions de l'extrémité N-terminale ou le domaine pre-transmembrane de la sous-unité S2 inhibent la formation de plaque SARS-CoV de 40 à 70 % à des concentrations de 15-30 microM. Fait intéressant, les peptides analogues à la région de la boucle-SRAS ou MHV inhibent la formation de plaque virale par > 80 % à des concentrations similaires. Les effets observés sont dose-dépendante (valeurs d'IC50 de microM 2-4) et non le résultat d'une cytotoxicité cellulaire induite par le peptide. L'activité antivirale des peptides CoV testé fournit une base attrayante pour le développement de nouveaux inhibiteurs de peptide de fusion correspondant aux régions situées en dehors des régions de répétition des Heptade protéine de fusion.
SARS-CoV Réplique Dans Les Cultures De Cellules Primaires Humaines Alvéolaires De Type II, Mais Pas Dans Les Cellules De Type I-like
Syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS) est une maladie caractérisée par des lésions alvéolaires diffuses. Nous avons isolé des cellules alvéolaires humaines de type II et eux maintenus dans un état très différencié. Cultures de cellules de type II pris en charge la réplication SARS-CoV comme en témoigne la RT-PCR detection of subgénomique viral RNA et une augmentation de la concentration en virus. Titres de virus ont été maximales après 24 h et a atteint environ 10 5 UFP/mL. Deux types de cellules dans les cultures ont été infectés. Un type de cellule a des cellules de type II, qui se sont révélés positifs pour le SP-A, SP-C, cytokératine, un anticorps monoclonal de type II spécifique des cellules et Ep-CAM. L'autre type de cellule était composée de cellules fusiformes qui se sont révélés positifs pour la vimentine et collagène III et susceptibles de fibroblastes. La réplication virale n'a pas été détectée dans les cellules de type I-like ou les macrophages. Donc, les cellules alvéolaires de type humain adulte différenciée II ont été sujette mais les cellules alvéolaires de type I-like et les macrophages alvéolaires n'appuyaient pas l'infection productive.
Identification Des Moustiques De Triseriatus Aedes Super-infected Recueillis Comme Des œufs Du Champ Et Caractérisation Partielle Des Virus Infectant La Crosse
Le virus de la Crosse (LACV) est un arbovirus pathogènes est transmise par les moustiques du genre Aedes triseriatus et hiverne dans les oeufs de la diapause. Cependant, les modèles précédents prédisaient transmission transovarienne (TOT) sont insuffisantes pour maintenir LACV dans la nature.
Le Traitement Par Liposomes Cationiques ADN Complexes (CLDCs) Protège Les Souris De L'Ouest Virus Mortel Encéphalite équine (VEEO) Défi
Ayant récemment caractérisé un modèle de souris CD-1 consanguine de la pathogenèse du virus de l'encéphalite équine de l'Ouest, nous avons examiné les effets possibles de protection de cationiques liposome-ADN (CLDCs) contre l'infection à arbovirus encéphalitique. Dans cette enquête, les souris ont été pré-traité, co-traitée, ou post-traité avec CLDC a ensuite contesté avec une dose sous-cutanée ou en aérosol de la très virulente souche VEEO-McMillan, létales chez la souris 4-5 jours après l'inoculation. Pré-traitement avec CLDCs fourni un effet protecteur significatif chez la souris, qui a été reflété dans les taux de survie significativement augmenté. En outre, dans certains cas un effet thérapeutique de l'administration CLDC jusqu'à 12h après l'épreuve VEEO a été observée. Les souris traitées avec CLDC avait augmenté de façon significative le sérum d'IFN-gamma, TNF-alpha et IL-12, ce qui suggère une forte Th1-biaisée activation antivirale du système immunitaire inné. En infectées par le virus animaux, d'importantes augmentations dans la production d'IFN-gamma, TNF-alpha, MCP-1, IL-12 et IL-10 dans le cerveau ont été observés par 72h après l'infection, compatible avec neuroinvasion et la réplication virale dans le SNC . Ces résultats indiquent que la forte activation non spécifique de l'immunité innée avec une thérapeutique immunitaire comme le CLDC est capable d'induire une immunité protectrice significative contre une souche rapidement mortelle de VEEO et de proposer une option possible prophylactique pour les personnes exposées.
