Ursachen Und Lösungen Für Die Polymerase-Kettenreaktion Abstrich Problem in Genotypisierung

Analytical Biochemistry. Jun, 2006  |  Pubmed ID: 16626617

Kokain-Belohnung Bei Mäusen Mit Einem Kokain-unempfindliche Dopamin-Transporter Abgeschafft

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. Jun, 2006  |  Pubmed ID: 16754872

Es gibt drei bekannte hoher Affinität Zielvorgaben für Kokain: der Dopamin-Transporter (DAT), den Serotonin-Transporter (SERT) und die Noradrenalin-Transporter (NET). Jahrzehntelange Studien unterstützen die (DA)-Dopaminhypothese, dass die Blockade der DAT und der anschließende Anstieg der extrazellulären DA in erster Linie Kokain Belohnung und Stärkung vermitteln. Entgegen den Erwartungen DAT ko (DAT-KO) Mäuse und SERT oder NET Knock-out-Mäuse noch Selbstverwaltung Kokain und/oder anzeigen konditionierten Ort Präferenz (CPP) mit Kokain, führte zu die Neubewertung der DA-Hypothese und den Vorschlag von redundanten Belohnung Bahnen. Um die Rolle der DAT in Kokain-Belohnung zu studieren, haben wir eine knockin Maus-Linie, die Durchführung einer funktionalen DAT, die unempfindlich gegen Kokain wird generiert. Bei diesen Mäusen Kokain lokomotorische Aktivität unterdrückt, extrazelluläre DA in den Nucleus Accumbens nicht erhöhen und keine Belohnung gemessen durch CPP produzieren. Dieses Ergebnis legt nahe, dass Blockade der DAT ist notwendig für Kokain Belohnung bei Mäusen mit einem funktionalen DAT. Diese Maus-Modell ist einzigartig, da es spezifisch entworfen ist, um die Rolle der DAT von die Rolle des NET und SERT in induziert durch Kokain biochemischen und Verhaltens-Wirkungen zu unterscheiden.

Direkte Beweise, Dass Zwei Cysteine in Der Dopamin-Transporter Eine Disulfidbindung Bilden

Molecular and Cellular Biochemistry. Apr, 2007  |  Pubmed ID: 17131045

Wir haben eine voll funktionsfähige Dopamin-Transporter (DAT)-Mutante (dmDATx7) mit allen Cysteine entfernt außer den zwei Cysteine in extrazelluläre Schleife 2 (EL2) generiert. Zufällige Mutagenese an einem oder beiden EL2 Cysteine konnte nicht erstellen alle funktionalen Transporter-Mutanten, die darauf hindeutet, dass die zwei Cysteine durch jede andere Aminosäuren nicht ersetzt werden können. Das Reagenz Cystein-spezifische MTSEA-Biotin beschriftet dmDATx7 nur nach einer DVB-t-Behandlung die Disulfidbindung reduziert. Da es keine andere Cysteine in dmDATx7 gibt, muss die MTSEA-Biotin-Kennzeichnung auf die EL2 Cysteine durch die DVB-t-Behandlung zur Verfügung gestellt. Dieses Ergebnis stellt erste Beweise, dass die EL2 Cysteine eine Disulfidbindung bilden. Interessanterweise hatte die DTT-Behandlung kaum Auswirkungen auf Transport Aktivität darauf hindeutet, dass die Disulfidbindung nicht notwendig für die Aufnahme-Funktion des DAT. Unsere Resultate und Ergebnisse früherer stehen im Einklang mit der Vorstellung, dass die Disulfidbindung zwischen EL2 Cysteine für DAT-Biosynthese und/oder seine Lieferung an der Zelloberfläche erforderlich ist.

Funktionale Mutationen Im Maus-Noradrenalin-Transporter Reduzieren Sensibilität Für Kokain-Hemmung

Neuropharmacology. Feb, 2009  |  Pubmed ID: 18824182

Die Transporter von Dopamin, Noradrenalin und Serotonin sind Molekulare Ziele von Kokain, Amphetamine und therapeutische Antidepressiva. Die Rückstände, die Bindung dieser Drogen beteiligt sind unbekannt. Wir haben mehrere Runden von zufälligen und Site-verwiesene Mutagenese in der Maus-Noradrenalin-Transporter und geschirmt für Mutanten mit veränderter Sensibilität für Kokain Hemmung der Substrat-Aufnahme. Wir haben eine dreifache Mutation identifiziert, die in der Nähe von Wildtyp Transportfunktion behält jedoch zeigt eine 37-fold Abnahme der Kokain-Empfindlichkeit und 24-fold Abnahme der Desipramin Empfindlichkeit. Im Gegensatz dazu sind der Mutant Empfindlichkeiten und Amphetamin, Methamphetamin und Methylphenidat nur geringfügig geändert. Unsere Daten zeigen kritische Rückstände Beitrag zum die potente Aufnahme Hemmungen durch diese wichtige Medikamente. Darüber hinaus kann diese medikamentenresistente dreifach Mutant verwendet werden, erzeugen eine einzigartige Knock-in Maus-Linie, um die Rolle der Noradrenalin-Transporter in die süchtig machende Effekte von Kokain und die therapeutische Wirkung von Desipramin zu studieren.

Potenzen Von Kokain Methiodide Auf Großen Kokain Ziele in Mäusen

PloS One. 2009  |  Pubmed ID: 19855831

Kokain Methiodide (CM), ein aufgeladener Kokain-Analog, nicht die Blut-Hirn-Schranke übergeben werden. Es wurde davon ausgegangen, dass die Auswirkungen der systemischen CM Kokain Aktionen in peripheren Geweben darstellen. Jedoch die Werte IC (50) cm nicht eindeutig festgestellt für die großen Kokain-Ziele: Dopamin, Noradrenalin und Serotonin-Transporter und Natrium-Kanäle. Die mit einzelnen Transporter von Mäusen und Synaptosomes aus Maus Striatum Gewebe transfected Zellen verwenden, wir beobachteten, dass die Hemmung IC (50) Werte für Monoaminoxidase-Aufnahme durch CM 31-fold waren zu 184-fold höher im Vergleich zu Kokain an jedem der Transporteure. In Spinalganglien Ganglion Neuronen, Kokain gehemmt Natrium-Kanäle mit einer scheinbaren IC (50) von 75 MicroM, während CM zeigte keine wahrnehmbare Auswirkung bei Konzentrationen bis zu 3 mM. Diese Ergebnisse zeigen, dass eine gleiche Dosis CM gleicher peripheren Wirkung von Kokain nicht bringen wird.

Interaktion Von Tyrosin 151 in Noradrenalin-Transporter Mit Der 2β-Gruppe Von Kokain Analoge RTI-113

Neuropharmacology. Jul-Aug, 2011  |  Pubmed ID: 21420984

Kokain bindet und hemmt Dopamin-Transporter (DAT), Noradrenalin-Transporter (NET) und Serotonin-Transporter. Die Rückstände bilden Kokain-Bindungsstellen sind unbekannt. RTI-113, ein Kokain-Analog, ist stärker auf Hemmung DAT als Hemmung NET 100 ×. Hier zeigen wir, dass die Empfindlichkeit des NET zu RTI-113, Entfernen der Hydroxylgruppe aus Tyr151 Rückstand im Netz ersetzt sie durch Phe, der entsprechende Rückstand in DAT, erhöht werden, während die Rückmutationsversuch in DAT die Empfindlichkeit des DAT RTI-113 sank. Im Gegensatz dazu hemmt RTI-31, analog einer anderen Kokain haben die gleiche Struktur wie RTI-113 jedoch die Phenylgruppe an der 2β-Position durch eine Methylgruppe ersetzt die Transporter-Mutanten gleichermaßen gut, ob eine Hydroxylgruppe bei der Rückstand anwesend oder nicht ist. Die Daten deuten darauf hin, dass diese Rückstände zur Kokain-Bindungsstelle trägt und in der Nähe der 2β-Position der Kokain-Analoga liegt. Diese Ergebnisse stehen im Einklang mit unserer zuvor vorgeschlagenen Kokain-DAT-Bindungsmodell wo Kokain zunächst an einen Standort, der überschneidet sich nicht bindet mit, aber nah an die Dopamin-Bindungsstelle. Computational Modeling und Molekulare Andocken ergab ein Bindungsmodell, das die beobachteten Veränderungen im RTI-113 Hemmung Potenzen erklärt.