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Articles by Fabio Rossi in JoVE
JoVE General
骨格筋からの前駆体の精製
The Biomedical Research Centre, University of British Columbia
酵素的解離、線維/脂肪細胞とマウス骨格筋からの筋原性前駆細胞のフローサイトメトリーによる表面標識および精製方法。
Other articles by Fabio Rossi on PubMed
Bcr / Ablの+細胞のイマチニブへのin Vivoおよびin Vitro感受性の違いは、白血病患者から得られ
メシル酸イマチニブ（イマチニブ）は、Bcr / Ablの、発癌性融合タンパク質を阻害する。 BCR / ABL +白血病細胞のイマチニブのin vitroでの効果のBcr / Ablのチロシンリン酸化の阻害、増殖ブロック、およびアポトーシスの誘導が含まれています。イマチニブのin vivo効果の転化またはイマチニブで治療された加速期で12 CML（慢性骨髄性白血病）の患者で評価した。治療は10 12の評価可能な患者の白血病細胞の自発的な増殖の減少および11例9のアポトーシスの発展をもたらした。イマチニブはまた、Bcr / Ablのリン酸化の阻害を引き起こしたが、in vivoで得られた阻害の程度は、イマチニブと同様の濃度でin vitroで達成されるものより大幅に低くなっている。 7人の患者において、細胞は再発時に評価することができる：自発的な増殖は、もはやリン酸化を阻害しないとBcr / Ablのされたイマチニブ投与前に、治療の開始時に匹敵するか、その存在にも優れていた。血漿中イマチニブ濃度は減少していませんでした。イマチニブの抗増殖効果を部分的に抵抗が低い（0.01から0.3マイクロモルで存在していたが、白血病細胞は、in vivoで測定されたイマチニブ濃度はin vitroでの感度（Bcr / Ablの自己リン酸化および増殖阻害）（3マイクロモルまたはそれ以上）に維持再発で得られた）濃度。 4患者のリン酸化抑制の観点から再発復元されたイマチニブ感受性で得られた血液サンプルにエリスロマイシンのに加えて、プラズマイマチニブの大半は、α1酸性糖タンパク質に結合した細胞、おそらく利用できませんでしたことを示す。これらのデータは、末梢血試料中のBcr / Ablのキナーゼ活性の測定は、イマチニブの血漿中濃度の測定をより活性濃度より信頼性の高い指標を表すことができることを示唆している。
最新動向とTetシステムのインビボ使用で：ex Vivoで、テトラサイクリン調節遺伝子のインビボ送達
今年6月に、テトラサイクリン調節遺伝子発現システム（TETシステム）10周年 "誕生日"を祝った。過去10年間ではTETシステムの基本コンポーネントに加えられた変更の連続したストリームは、その全体的なパフォーマンスの著しい改善につながっている。それはこれらの改善の完全な利点が明らかになったこと、しかし、この年までではなかった。特に、TETシステムの使用法は、不死化細胞株及びトランスジェニック動物に限定されなくなります。このレビューでは、初代培養細胞や組織と同様にここでそれらを克服するために使用されるメソッドにTETシステムのコンポーネントを提供する上で遭遇した障害について説明します。また、概念的に似ていますが、別の抗生物質/転写因子のペアに基づいて新規なシステムに焦点を当てます。
アルドステロンは、人間の抵抗動脈の収縮を誘導する
in vitroでのアルドステロンの非常に迅速な非ゲノム効果が近年に記載されており、in vivoでの証拠にも同様に報告されています。本研究では、人間の生体内での抵抗動脈に対するアルドステロンの急速な効果を調べた。私たちは10人の健康な男性ボランティアに、無作為化プラセボ対照二重盲検クロスオーバー試験を行った。前腕血流量（FBF）は、両方の前腕に静脈閉塞プレチスモグラフィーを用いて測定した。 FBFは、アルドステロンの投与により減少した2.5分で4ピコモル/分（4.45 + / -0.03 3.3 + / -0.25 ml/100 mlの組織から）1.6（4.45 + / -0.03から分12でその直下に達した+ / -0.08 ml/100 mlの組織、P <0.001）。我々の研究は、人間の生体内における抵抗血管におけるアルドステロンの直接の非ゲノム効果を文書化します。生理的濃度におけるアルドステロンの急速な血管収縮作用が上昇、末梢血管抵抗によって特徴付けられる、高血圧などのいくつかの疾患、このステロイドの血管の役割に関する調査への道を開きます。
、α1酸性糖タンパク質は、イマチニブ（STI571）に結合し、実質的に慢性骨髄性白血病患者における薬物動態を変更します。
イマチニブ（グリベック）はBCR / ABL、慢性骨髄性白血病（CML）を引き起こす発癌性融合タンパク質の強力な阻害剤である。 、α1酸性糖タンパク質（AGP）は、高親和性でイマチニブに結合し、in vitroおよび動物モデルにおけるin vivoでのイマチニブの活性を阻害する。イマチニブの薬物動態解析は、CML患者で行われた。
骨格筋への造血幹細胞の寄与
成人の骨髄からの細胞が損傷した骨格筋線維の再生に参加しています。しかし、骨髄に見られる様々な造血系および非造血系細胞の種類とこれらの細胞の関係は依然として不明である。ここでは、単一の細胞の子孫は、再構成する造血系の両方の筋肉の再生に貢献できることを示している。筋線維への骨髄細胞の統合は、低周波と筋肉の損傷の増加で自然に発生します。したがって、古典的に定義された単一の造血幹細胞は血液や筋肉の両方に上昇を与えることができます。
[循環器病理学におけるアドレノメデュリン]
アドレノメデュリン（AM）は、抵抗血管の拡張によって引き起こされる強力な、強力な血圧降下作用を誘導する、その心血管系のアクションに興味を誘発しています。 AMは血管内皮細胞と平滑筋細胞を含む様々な細胞型から分泌される。血漿中濃度は心不全や高血圧などの様々な心血管疾患で増加しているAMと心血管疾患の病態生理学的変化に関与することができます。
術前ドセタキセル、シスプラチン、併用化学放射線療法対頭頸部の局所進行扁平上皮癌における化学放射線同時併用療法の前に、5 - フルオロウラシル：フェーズⅡのフィージビリティスタディ
局所進行頭頸部扁平上皮癌単独と同じCHT-RTレジメンと比較して同時化学放射線療法（CHT-RT）、続いて術前ドセタキセル、シスプラチン、および5 - フルオロウラシル（TPF）の実現可能性を決定します。
巨大な大腿膝窩動脈瘤と静脈破裂
アテローム性動脈硬化膝窩動脈瘤は、最も一般的な末梢動脈瘤である。血栓症、塞栓、破裂、隣接する構造物の圧縮は、よく知られた合併症である。我々は、巨大な大腿血腫と破裂膝窩動脈瘤であると考えられて拍動性腫瘤を有する患者を報告します。それはavulsedさと出血に隣接する静脈と大腿膝動脈瘤破裂8.5センチメートル、血腫の発生源であることが判明した。これは珍しい合併症の最初の知られているレポートを構成しています。
大人の胸腺前駆細胞の動員は、P-セレクチンおよびそのリガンドPSGL-1によって調節されている
胸腺に早期Tリンパ球前駆細胞の遊走を誘導する分子機構は不明である。我々は、P-セレクチンは内皮細胞胸腺と骨髄と胸腺バインドP-セレクチンにそのリンパ球前駆細胞で発現されていることをここに表示されます。並体結合、競争力のある胸腺の再構築と短期ホーミングアッセイは、P-セレクチンおよびそのリガンドPSGL-1は、胸腺ホーミングプロセスの機能的に重要な成分であることが示された。従って、PSGL-1を欠損したマウスの胸腺では、より少ない初期の胸腺前駆細胞が含まれており、野生型マウスと比較してprothymocytesの空のニッチを増加した。さらに、居住者胸腺前駆細胞の数は、直接前駆アクセスに使用することができ胸腺 "ニッチ占有センサー"により、P-セレクチン発現の調節を示唆し、P-セレクチンの胸腺の発現を制御します。
心筋の条件付き遺伝子発現の戦略：概要
動物モデルでリアルタイムに、組織特異的遺伝子の発現を監視するための特殊なレポーター遺伝子の使用は、トランスジェニックマウスモデルの確立に関連付けられた現在の制限を回避する機会を提供します。は、Cre-loxP部位とテトラサイクリン（Tet）誘導システムは、空間（細胞の種類に固有）を許可する条件、遺伝子発現の有用なメソッドであり、一時的な（インデューサーに依存する）を制御します。ほとんどの場合、α-ミオシン重鎖（α-MHC）プロモーターが心筋にレポーター遺伝子と導入遺伝子の発現を制限するために、これらの誘導システムで使用されています。各誘導システムの概要については、心筋のリアルタイム、非侵襲的イメージングのための提案されたレポーター遺伝子と一緒に、説明されています。誘導性遺伝子発現システムの効果的な遺伝子導入は、高い導入効率、長期的な導入遺伝子の発現、低免疫原性を提供するレンチウイルスベクターによって実施されています。この章では、遺伝子とレポーター遺伝子を心筋細胞に形質導入されたレンチウイルスベクター、心筋に特異的誘導発現システムのパッケージングの概要を説明します。そうすることで、遺伝子とレポーターの発現が生物発光イメージング（BLI）と陽電子放射断層撮影（PET）を使用して監視/追跡することができます。
虚血後と移植心臓の幹細胞を調べるための方法
現在、心臓の筋肉細胞が分化し、自己修復が不可能であることを信条に挑戦されています。最近の実験的観察は、内因性および外因性の両方の幹細胞集団は、心臓内の破損した領域を生成する可能性があることを示唆している。これらの知見は、心筋梗塞や移植血管疾患（TVD）のような一般的な条件を含む心血管疾患を治療する新しい治療戦略のための約束を保持します。この章では、虚血性心疾患とTVDを含む心血管疾患の調節におけるその役割のコンテキスト内で内因性幹細胞の研究に焦点を当てています。内因性の骨髄由来幹細胞の遊走および潜在的な分化の現象を研究するために使用される特定の実験的なモデルや手法についても説明します。
筋原性前駆細胞および筋肉の修復を循環させる
多くの末梢組織に貢献する骨髄由来細胞の機能は、再生医療の分野のための途方もない約束を保持することができます。特に骨格筋疾患のコンテキストでは、循環を介して損傷部位に到達するために、これらの細胞の能力は、現在の細胞療法のアプローチのいくつかの重要な限界を克服するだろう。筋肉にしても、この非古典的な修復プロセスは非常に低い周波数で行われ、任意の測定機能改善をもたらすために失敗しました。この現象に関与する細胞の種類やメカニズムに関する最近の進歩により、現在の治療レベルにその効率を高めることを目的とした戦略の方向性を提供することがあります。
腫瘍血管系への骨髄由来の血管内皮前駆体の最小限の貢献
胚発生時に、血管及び造血細胞は、共通の前駆体、血管芽細胞に由来する。最近の証拠は、成人の骨髄細胞における血管内皮前駆細胞の存在を示唆しているが、それはそれらの前駆体は、腫瘍血管新生の役割を持っているかどうかは不明である。本報告では、我々はマウス骨髄は自己再生能力を持つ細胞から発生する内皮前駆細胞が含まれており、非常に低い周波数ではあるが、腫瘍の微小血管に統合することができますを示しています。トランスジェニックのダブルレポーターの戦略は、私たちは、腫瘍、骨髄由来内皮細胞が骨髄前駆細胞の分化ではなく細胞融合によって発生することが決定的に実証することができました。単一細胞移植は、共通の前駆体はこのように成人血管芽細胞の存在を実証し、造血および内皮系統の両方に貢献することを示した。さらに、我々は増加し、血管内皮増殖因子（VEGF）、腫瘍細胞によって分泌と同様に、骨髄細胞におけるVEGF受容体-2の活性化を実証する腫瘍血管系への骨髄由来の血管内皮前駆細胞の動員および定款を変更しません。最後に、ヒト臍帯血細胞では、我々は血管内皮前駆細胞だけで約1 10（7）単核細胞におけるを構成しているが、非常にCD133 +細胞集団に濃縮されていることを示している。細胞融合を除外することによって、我々は明らかに成人の血管芽細胞の存在を示すが、血管内皮系に向かって骨髄幹細胞の分化は非常にまれなイベントです。さらに、我々は造血細胞のVEGF-A刺激は著しく、このプロセスを変更しないことを示している。
骨髄由来受信者のマウス移植心臓の細胞：潜在的な役割と免疫抑制の効果
現在、負傷者の心と血管内修復的細胞の起源についての激しい議論があります。受信者の骨髄（BM）由来の移植心臓の血管の細胞の再生への細胞の寄与を決定するために、この現象に免疫抑制の影響を調べるために、我々は緑色蛍光タンパク質（GFP）陽性レシピエントの運命を評価する非GFP発現心臓同種移植片のBM細胞。 C57BL / 6 BM-GFPキメラ受信者が心臓移植を受けた。同種移植は14または30日後に移植のためのタクロリムスと免疫抑制または治療を生理食塩水であった。ハーツは、内皮細胞（EC）や平滑筋細胞（SMC）のマーカーで切除し、染色した。 BM由来レシピエント細胞との共局在化は、三次元画像解析と共焦点顕微鏡を用いて評価した。タクロリムスによる免疫抑制は、ECまたはSMC表現型として受信者の骨髄由来細胞のキメラの周波数に影響を及ぼさなかった。 ECキメラの高い周波数は、同種移植心の中で30日後の移植と比較して14日目に発見されました。 BM由来レシピエント細胞は、移植の継続的な同種免疫認識の設定で受信ECとSMCのインターカレーションとドナー血管損傷の領域に動員されています。我々の調査結果では、タクロリムスの免疫抑制は14日移植後早期の時点で受信者の骨髄由来細胞の再増殖の頻度には影響しませんを確認します。 BM由来レシピエント細胞によるECの再設定は、時間の経過とともに周波数で減少し、移植同種移植心は、早い段階でのイベントであることが判明した。
アドレノメデュリンは、ヒト大動脈平滑筋細胞におけるアンジオテンシンII誘発収縮を抑制する
血管拡張ペプチドアドレノメデュリン（AM）は血管緊張と同様にオートクリン/パラクリン的に種々の細胞型の増殖と分化を調節することが報告されています。我々の研究では、関与するシグナル伝達経路を評価し、in vitroでヒト大動脈平滑筋細胞におけるアンジオテンシンII誘発性収縮（HASMC）にAMの影響を調べるために設計されています。我々の調査結果は、AMがHASMCアンジオテンシンII誘発性収縮（IC50 19 nM）を阻害することができたことを示します。同様に用量依存様式でcAMP産生を刺激しています。 SQ 22.536、アデニル酸シクラーゼ阻害剤、およびKT5720、PKA阻害剤は、それはcAMP情報伝達経路の活性化によって媒介されたことを示唆し、AMの効果を鈍化。我々の結果は、AMがAng IIの効果を拮抗することによりHASMC収縮の調節に役割を果たしていると血管の変化した規制の条件に関与している可能性を示唆している。
合併症のない肥満における血管内皮機能障害の非侵襲的評価：インスリン抵抗性との関係
肥満が増加し、心臓血管の罹病やamortalityに関連付けられています。心血管イベントの発症に関与する血管内皮機能障害は、動脈カテーテルを必要とする侵襲的な技術と肥満患者で実証されている。我々の調査の目的は、臨床的根拠、障害血管拡張と単純な肥満でインスリン抵抗性との関係で容易に雇用できる非侵襲的方法では、評価することであった。 15合併症のない肥満者（BMI = 36.6 + / - 3.2）と10リーンコントロール（BMI = 22.9 + / - 1.25）本研究では在籍していた。すべての被験者は、空腹時血糖およびインスリン（HOMA-IR）により、前腕静脈閉塞虚血の回数を増やした後pletysmographyし、正常血糖高インスリンクランプ法（Mインデックス）によってインスリン感受性を測定することによって内皮依存性（FBFR）血管拡張の測定を受け、経口ブドウ糖負荷試験（ISIインデックス）による。内皮非依存性（N-FBFR）血管拡張も同様に評価した。 FBFRは著しくリーンコントロール対肥満患者で平滑化した（30秒：2.12 + / - 0.34対3.63 + / - 0.22、P <0.01; 60秒：2.34 + / - 0.42対3.82 + / - 0.53、P < 0.01、180秒：3.20 + / - 0.45対7.15 + / - 0.35、P <0.01、300秒：4.08 + / - 0.94対14.1 + / - 0.82、P <0.001）。 N-FBFRは両群で差はなかった。高い相関関係がすべての虚血時間でMインデックスとFBFRの間に発見されました。 HOMA-IRとISIはFBFRと関連していませんでした。静脈閉塞プレチスモグラフィーに基づいて、シンプルで信頼性の高い方法による内皮機能不全の非侵襲的評価は障害内皮依存性血管拡張と単純な肥満でインスリン抵抗性の間に高い相関関係を示しています。内皮機能のこの非侵襲的検査は、定期的に合併症のない肥満の心血管リスクの評価で行うことができる。
筋萎縮性側索硬化症のモデルマウスの中枢神経系の起源と骨髄由来細胞の分布
筋萎縮性側索硬化症（ALS）は、中枢神経系（CNS）内のミクログリア数の増加に関連付けられています。しかし、それはミクログリアを常駐CNSの増殖、または骨髄の募集（BM）由来のミクログリアの前駆体からmicrogliosisの結果かどうかは不明である。ここでは、過剰発現骨髄切除マウスに緑色蛍光タンパク質（GFP）で標識した骨髄細胞の移植を用いた脊髄における骨髄由来細胞の分布と数を評価するヒト変異スーパーオキシドジスムターゼ1（mSOD）、ALSのマウスモデルを。 GFP + BMの移植はmSODマウスにおける疾患の進行の速度に影響を及ぼさなかった。コントロールマウスの脊髄でミクログリアとGFP +細胞の数を意味し、無症候性mSODマウスのものと有意差はなかった、動物の年齢とともに変化は見られなかった。 mSODマウスの脊髄内のGFP +細胞とミクログリア（F4/80 +およびCD11b +細胞）の数はmSODマウスは、疾患末期まで継続し、病気の症状を示した時の年齢をマッチさせた対照と比較して増加した。我々は、病気の症状とmSODマウスの脊髄におけるGFP +細胞数の増加を観察したが、GFPの番号を意味する+ F4/80 +細胞はすべてのF4/80 +細胞の20％未満を構成し、疾患の進行に伴って増加しませんでした。また、CD45の増殖の相対速度+ GFP-およびCD45 + GFP +細胞は同等であった。したがって、我々はmSODマウスの脊髄組織内に存在するmicrogliosisは、主に循環から常駐ミクログリアの拡大ではなく、ミクログリアの前駆体の動員にによるものであることを示している。
アドレノメデュリンは、ヒト大動脈平滑筋細胞のアンジオテンシンII刺激による増殖に拮抗
血管拡張ペプチドアドレノメデュリンは、血管トーンと同様にオートクリン/パラクリン的に種々の細胞型の増殖と分化を調節することが報告されています。矛盾するデータが血管平滑筋細胞の増殖、血管リモデリングとアテローム性動脈硬化病変の進行に関与するプロセスのアドレノメデュリン（AM）の効果が報告されています。本稿では、人間の大動脈平滑筋細胞（HASMC）の増殖に対するAMの影響を調べる。 AMは、アンジオテンシンII（AgII群）誘起拡散と静止期の細胞の増殖促進効果の強力な用量依存的な抑制効果を示した。 cAMP / PKA経路はHASMCでAgII群誘発増殖のAM抑制効果に関与していた。 PI3K/AKTおよびERK経路は、AM自体によってもたらされる細胞増殖抑制作用に関与していた。我々の結果は、AMはAgII群の効果を拮抗HASMC成長の調節に役割を果たしていると血管の変化した規制の条件に関与している可能性を示唆している。
グレリンはヒト大動脈内皮細胞のアンジオテンシンII誘導の移行を阻害する
グレリン、GH分泌受容体の内因性リガンドは、胃の酸分泌細胞によって産生されるとエネルギーバランスの調節に関与しています。しかし、直接グレリン心血管系への影響、および、それらの間で、アテローム性動脈硬化冠状動脈の高グレリン結合の増加が報告されています。我々は、グレリンはヒト大動脈内皮細胞（HAEC）への移行に影響を与えるかどうかを検討した。 HAECは、特定の飽和方法で、グレリンをバインドしました。グレリンは、次のような、HAECの移行に影響を及ぼさなかった、しかし、それはアンジオテンシンII誘発性の移行を阻害し、この効果は、拮抗薬（D-リジン（3））-GHRP-6によって抑制された。 HAECでは、グレリン誘発AgII群誘発性HAECマイグレーションへの影響に関与していたcAMPの細胞内濃度を増加させ、AMPシクラーゼ阻害剤SQ22.536それぞれPKA阻害剤KT5720として、抑制され、それを平滑化。これらの知見は、血管内皮細胞の遊走および低血漿中グレリンが特徴の疾患に存在する血管の変化で、その関与の可能性の制御におけるグレリンの役割を示唆している。
スピン培養におけるマイクロキャリアビーズ上でラット骨髄間葉系幹細胞のex Vivoで拡大
骨髄間葉系幹細胞（BM-MSC）は、結合組織の再生のための魅力的な候補である。現在、その使用は、in vivoで移植時に貧しい全体の細胞の生存と高いアポトーシス率によって制限されます。我々は、細胞移植前に細胞 - 細胞外マトリックスの接触の中断のいずれかのセル拡張中または直後には、細胞の生存を阻害するとアポトーシスを容易にすることができるという仮説を立てた。そこで我々はBM-MSCは、スピン文化の中でマイクロキャリアビーズ上に拡大し、直接移植することができるかどうかを検討した。この新しいアプローチは、通常、拡張や移植に必要な繰り返しtrypsinizationsする必要がなくなります。 CultiSpher-Sゼラチンマイクロビーズは、フィッシャーとトランスジェニック緑色蛍光タンパク質（GFP）（+）のSprague Dawley系ラットBM-MSCの拡張をサポートしていました。ビーズ拡張BM-MSCはまだ軟骨、骨と脂肪細胞系統に沿って区別することができます。短期的には、マイクロキャリア上に展開細胞の直接皮下移植をトリプシン処理し、コントロール細胞に比べて大幅に少ないアポトーシスと関連していた。長期的には、BM-MSCは、de novoのin vivoでの骨梁形成を誘導されるマイクロキャリアビーズ上に拡大しました。この新しいアプローチは、間葉組織再生のための現在の拡張移植プロトコルを介していくつかの利点を提示します。
マルチ薬物送達のためのシクロデキストリン/ PEGベースのヒドロゲル
シクロデキストリン-PEGハイドロゲルは、1.9kDa NH（2）PEGNH（2）hexamethlyeneイソシアネート活性化β-シクロデキストリンとの反応によって調製した。反応は0.25:1、0.33:1、0.5:1、0.67:1、1:1、2:1 CD / PEGのモル比を用いて無水ジメチルスルホキシドで行った。反応混合物に酢酸の添加は、均一なマトリックスが得られる、架橋反応を遅らせることが判明した。機械的な特性は、ヒドロゲルのCDの内容として増加したマトリックスの弾性伸びがヒドロゲル組成物とは無関係であった間に増加したことが示された。水とエタノールでインキュベートすることにより、ハイドロゲルは、5 10分で完全に腫れが施行された。 CD / PEGレシオは800％の膨潤度（腫れハイドロゲル/乾燥ハイドロゲル、W / W％）に到達するために減少としてテイク水は対数的に増加した。 CD / PEG比率として電力の相関と共に増加し、エタノール摂取量は0.25:1 CD / PEGハイドロゲルと約1000％の膨潤度に到達するために減少した。リゾチーム、β-エストラジオール、及びキニーネはうねり埋め込むことによってロードされていました。リゾチームローディングはβ-エストラジオールとキニーネの取り込みは、CD / PEG比率に関しては逆の相関関係を表示中に減少したCD / PEG比率が増加した。リゾチームのために最大限の取り込み（ロード薬物/ドライヒドロゲル、W / W％）は、β-エストラジオールとキニーネは、それぞれ2、0.6、2.4％であった。リゾチームはすぐに行列から解放され、CD / PEG比率が減少したとして、リリースは速かったしました。また、β-エストラジオールとキニーネ放出速度は、CD / PEG比に反比例していたが、これらのケースでは、放出プロファイルが強くマトリックスのhexamethylatedβ-シクロデキストリンとの薬物相互作用の影響を受けた。
自己更新localは成人してから一生を通じてCNSミクログリアのメンテナンスと機能を維持することができます
Microgliosisは、CNSの損傷の複数のタイプに共通の応答である。ただし、このプロセスに関与する細胞の起源は、まだ議論の余地があると血流からミクログリア前駆体の局所拡大対募集の相対的な重要性は不明である。ここでは、並体結合によって得られたキメラ動物を用いたミクログリアの起源を調べた。我々はミクログリアのメンテナンスやローカル拡張がこれらのモデルで細胞を常駐CNSの自己複製にもっぱら依存していることを示唆し、除神経または中枢神経系の神経変性疾患における循環からミクログリア前駆細胞の動員の証拠は見つかりませんでした。
複雑な赤血球接種による科目の輸血のための戦略：ロンバルディアの地域のレア供血者の銀行
複雑な予防接種の患者への輸血のために稀な血液の単位を選択すると、輸血センターの最も重要なプロセスの一つである。 2005年1月に "レアブラッド·コンポーネント·バンク - ロンバルディア州の地域のリファレンス·センター"として、次の目標を確立W：1）地域の珍しい血液ドナーを識別する、2）まれなドナーの地域レジストリの作成、3）組織地方銀行液体および凍結珍しい血液ユニットの、4）地域のImmunohaematologyリファレンスラボラトリー（IRL）がドナーを入力し、複雑なケースを解決するために設定する。
慢性炎症に応答したプルキンエニューロンの造血細胞の広範な融合
移植した骨髄由来細胞（BMDCs）多様な組織の細胞と融合することが報告されているが、核融合の超低周波は、このようなイベントが生物学的に有意であるという見方につながっている。それにもかかわらず、致死劣性肝疾患（tyrosinaemia）とマウスでは、野生型BMDCsの移植は、細胞融合により肝機能を復元し、その細胞融合は、有益な効果を持つことができることを示す、死を防いだ。ここでは、重度の皮膚炎や自己免疫性脳炎に起因する慢性炎症がプルキンエ神経細胞や小脳あたり二核ヘテロカリオンの何百もの形成とBMDCsの堅牢な融合につながることを報告し、10から100倍高い周波数は、以前の報告より。単一の造血幹細胞移植は、融合細胞が融合照射せずに発生する可能性があることを明らかにした造血系と並体結合実験からであることを示した。マウスのプルキンエ神経細胞との融合後のBMDC核における休眠ラットプルキンエニューロン特異的遺伝子の活性化につながったマウスにラットの骨髄の移植、核初期化と一致しています。これらのヘテロカリオンの正確な神経学的役割が解明を待っていますが、炎症後の脳内でその頻度は明らかに以前に感謝よりもはるかに高くなっています。
グレリンは、ERK1 / 2およびPI3K/AKTの活性化を介してヒト大動脈内皮細胞の増殖を誘導
心血管（CV）システムの恒常性に直接グレリン（GHR）の関与はCV組織におけるその受容体の発現により、証拠によって示唆されているグレリンを媒介動物とヒトのCVの活動。また、低GHR血漿中濃度が高い心血管リスクによって特徴付け病的状態で報告されている。本研究では、ヒト大動脈内皮細胞（HAEC）と関係する伝達経路の増殖にGHR効果を調べた。我々の結果は、グレリンが培養されたHAECに（5nmol / Lの約EC（50））用量依存的に増殖を誘発し、この効果は、受容体拮抗薬（D-Lys3）-GHRP-6によって阻害されていることを示しています。ウエスタンブロット用量依存的な方法で外部の受容体活性化キナーゼ（ERK1 / 2）の活性化を文書化し、Aktの実験と同様に、ERK1 / 2リン酸化のcAMP経路の関与。 GHR誘起HAEC増殖を調査するために適切な薬理学的阻害剤で行った実験では、ERK1 / 2とI3P/Akt経路の関与と同様に、ERK1 / 2リン酸化AMPシクラーゼ/ PKA経路の役割を確認した。我々の結果はGHRがHAEC増殖を促進するため、血管の損傷に対する保護因子であることを示している。インスリン抵抗性状態で報告された低グレリン血清レベルを効果的に血管内皮細胞傷害に対抗することはできません。
SCA-1の発現は、骨格筋の再生時には細胞外マトリックスの効率的な改造が必要です
SCA-1（幹細胞抗原-1）のLy-6ファミリータンパク質のメンバーであることを複数の組織の細胞増殖、分化、自己複製の機能。骨格筋ではSCA-1は、負の筋芽細胞の増殖と分化を調節し、前駆細胞の維持に機能することができる。我々は、骨格筋再生にSCA-1の役割を調査し、SCA-1の発現は、筋肉の損傷時の筋原細胞のサブセットでアップレギュレートされていることをここに表示されます。我々は、押しつぶされた筋肉からの抽出物はin vitroでの筋芽細胞では、SCA-1の発現をアップレギュレートを示しており、この効果は可逆的細胞増殖とは無関係であること。 SCA-1（ - / - ）マウスは、線維症、以下の傷害の開発と、筋肉の再生に欠陥を示す。 SCA-1（ - / - ）筋肉は、細胞外マトリックスのリモデリングの重要な調節因子、マトリックスメタロプロテアーゼの活性低下を表示します。衛星細胞でSCA-1は、自己複製に重要な役割を果たしていないことを示唆し、筋肉（ - / - ）興味深いことに、我々は、衛星細胞の数が野生型およびSCA-1に類似していることを示しています。我々は、Sca-1はアップレギュレートする、直接的または間接的に、マトリックスメタロプロテアーゼの活性は、マトリックスの破壊的かつ効率的な筋肉の再生につながると仮定した。マトリックスのリモデリングにおけるSCA-1の役割のさらなる解明が線維性疾患の治療のための新たな治療戦略の開発に役立つ可能性があります。
グレリンは、cAMP / PKA経路の活性化による収縮およびヒト大動脈平滑筋細胞の増殖を阻害する
グレリン（GHR）、成長ホルモン分泌促進物質受容体の天然リガンドは、主に胃で産生される。 GHR心血管系への影響の興味深い側面は、グレリンとGHS（成長ホルモン分泌促進物質）は、いくつかの心血管組織や細胞の種類の受容体mRNAの発現の同定によって誘発されました。男性では、GHR投与は血圧の低下を誘導し、減少した血漿中濃度は、いくつかの病的状態で報告された。本研究は、収縮およびヒト大動脈平滑筋細胞（HASMC）の増殖に対するグレリンの作用を解明するために行われた。 HASMCにおけるグレリン受容体の発現はRT-PCRにより評価した、との結合の研究は、受容体の動態を解明するために行われた。アンジオテンシンII誘発性HASMC収縮および増殖に対するGHRの効果はin vitroで評価した。さらには、cAMP、ERKおよびAkt経路の関与を調べた。 PCRは、GHS-R1A式を記録した。 HASMCに[（125）I-彼（9）] - グレリンの結合は、用量依存的に飽和した。スキャッチャード分析は、結合部位（Kdは1.58 + /-0.23nM、B（MAX）5848 + / -291fmol/10（5）細胞）の単一のクラスを示した。競争バインディングでは、（D-リジン（3））-GHRP-6 [（125）I-HIS（9）] 4.25nMのKiと、グレリンと競合する能力を示した。グレリンは、cAMP / PKA経路を介して投与量 - 応答方式でアンジオテンシンII誘発性増殖と収縮を抑制することができました。 GHRは血管損傷や改造に関連する多くの病的状態で可能な治療標的としてのグレリンを考慮する方法を開いて、いくつかのHASMC機能に影響を与えることが我々のデータは、文書。
筋萎縮性側索硬化症のモデルマウスの中枢神経系における骨髄由来細胞は血管やエクスプレスCX（3）CR1と関連付けられている
筋萎縮性側索硬化症（ALS）は、CNS内ミクログリア数の増加に関連付けられています。しかし、それは程度の骨髄（BM）由来の細胞はこのmicrogliosisに寄与するものかは不明である。我々は、CNSに緑色蛍光タンパク質（GFP）で標識しただけCXでGFPを発現する（3）CR1 +細胞（CX（3）CR1（+ / GFP））は、マウスからの全骨髄細胞とBMの養子移入を検討してきた変異スーパーオキシドジスムターゼ（mSOD）と、重量同腹の過剰発現を有するALSのモデルマウス。我々は、ほとんどのGFP +およびCX（3）CR1（+ / GFP）細胞がCNS内の微小血管に隣接して発見され、mSODとWTマウスの両方を見つけます。 CNS内のGFP +およびCX（3）CR1（+ / GFP）細胞は、これらの細胞は血管周囲のミクログリアであることを示す、細長い外観、弱い伊庭-1免疫反応性で、しばしばマンノース受容体の免疫反応性を持つ細胞を含む形態の多様を持っています。一般的に、骨髄由来細胞の10％未満では、星状形状を有しており、骨髄由来細胞は稀に実質ミクログリアを生成することを示すように実質のミクログリアに期待される強い伊庭-1の免疫反応性を、表明した。 CX（3）CR1（+ / GFP）マウスから骨髄由来細胞の養子免疫伝達は、多くの細長い細胞がいくつかの血管周囲の細胞がCX（3）CR1 +系統の骨髄細胞から誘導されることを実証し、GFP +であることを明らかにした。対照マウスに比べてmSODのBM細胞のかなり大きい数字は、脊髄におけるこれらのBM細胞の存在はCNS内に照射し、炎症性因子を含めることができコンディショニング刺激によって調節されていることを示しています。
胸腺前駆細胞ホーミングとリンパ球の恒常性は、胸腺P-selectin/CCL25のS1P制御発現を介して結合している
胸腺T細胞の前駆細胞（TCP）の輸入はTCPS上で機能的なP-セレクチンリガンドの発現に依存している定期的に、ゲートのイベントです。胸腺内のTCPニッチの占有率は負のTCP輸入を規制すると考えられているが、このフィードバックメカニズムの性質はまだ解決されません。我々は、P-セレクチンおよびCCL25が定期的に胸腺で発現されることを示していると胸腺ゲート維持機構の本質的な部分である。胸腺TCPの受容と初期の胸腺TCP·プールのサイズの周期はTCPS上で機能的なP-セレクチンリガンドの存在に依存していた。さらに、末梢血リンパ球の数が直接胸腺P-セレクチン発現およびTCP感受性に影響を与えたことを示している。我々は、胸腺のTCP感受性の末梢リンパ球プールの影響を媒介することができる一つのフィードバック信号としてスフィンゴシン-1 - リン酸（S1P）を同定した。今回の知見は、胸腺のTCP輸入が早期に胸腺ニッチ占有とS1Pを介した末梢血リンパ球プールの両方によって制御されるモデルを示唆している。
ラット骨髄間質細胞の連続と拍動PTH治療の効果
骨髄間質細胞（MSCs）の分化や増殖は、多くの成長因子やホルモンによって制御されます。継続的な副甲状腺ホルモン（PTH）治療は、拍動性PTHは骨芽細胞分化を増加させる一方、骨芽細胞分化を減少させることが示されています。しかし、MSCS上にPTH治療の効果が調べられていない。本研究では、デキサメタゾンの存在下で連続的なPTH治療を示した（DEX）が増加、アルカリホスファターゼ（ALP）活性、ALPを発現する細胞の数、およびPTH受容体-1のアップレギュレーションによって示され、in vitroでラットのMSCの骨分化を促進し、 ALP、およびオステオカルシンmRNA発現。対照的に、拍動性のPTHの治療はおそらく未分化細胞の維持を促進することにより、ラットMSCの骨形成を抑制することが判明した。また、PTHの観測された効果はDEXの存在に強く依存していた。 MSCの増殖は、しかし治療レジメンとDEXの有無PTH独立した影響を受けませんでした。さらに、我々の仕事は、PTHの治療は、MSCの培養内で幹細胞/前駆細胞の活性を調節する可能性があることを提起した。
サイレンは、成体細胞のZ / APとZ / EG記者のCre-媒介組換えを阻害する
Cre-loxP組システムは、組織特異的活性化、不活化およびin vivoで多くの遺伝子の突然変異を有効にするために使用されており、それによって大幅にいくつかの細胞と発生過程の遺伝解剖を容易にしました。このような研究では、Creリコンビナーゼ活性化マーカー遺伝子を運ぶためのCreレポーター株は、頻繁に、Creリコンビナーゼ導入遺伝子の発現プロファイルを検証する2番目の対立遺伝子の切除のためのサロゲートマーカーとして機能するように、不可逆的分化のために細胞を標識するために利用されてい実験をトレースします。
ケースレポート：Interpositional移植および非常に萎縮上顎のリハビリテーションのための遅延修正SLActive表面歯科インプラントの即時読み込みを持つルフォートI骨切り術
ルフォートI骨切り術の後にグラフトされた上顎に挿入された変更されたサンドブラストと酸エッチング表面のITIインプラントの即時補綴の読み込みの成功した臨床例を記述します。
デポ固有の脂肪細胞前駆豊富の違いと高脂肪食に対する増殖応答
白色脂肪組織（脂肪）がエネルギー貯蔵のための主要な器官であり、その規制は、人間の健康に重大な意味を持っています。余分な脂肪組織は重大な合併症を引き起こし、過度の脂肪細胞の肥大が原因で脂肪組織の機能不全は、代謝性疾患の病因に重要な役割を果たすことが提案されている。人間と動物モデルの両方での研究では、代謝機能障害がより密接に皮下脂肪の蓄積よりも内臓に関連付けられていることを示しています。ここでは、マウスに高脂肪食を与えたことを示している、内臓脂肪（VAT）は、代謝の健康上の特定の脂肪デポのさまざまな効果の理論的根拠を提供し、過形成による肥大と皮下脂肪（SAT）で主に育つ。デポの拡張が幹細胞/前駆細胞のレベルで制御されているかどうかに対処するために、我々は前向きに、両方のデポから脂肪細胞前駆細胞（AP）を識別するための戦略を開発した。クローン原性アッセイおよびin vivoでブロモデオキシウリジン（BrdU）の研究では、付加価値よりも、SAT、APの増殖が高脂肪食に対応して有意に土に増加はなく、付加価値税であることをAPが八重の方が多いことを示している。我々の結果は、APの豊かさと増殖のデポ固有の違いは脂肪デポが肥大または過形成で拡大するかどうかを根底にあるため、代謝性疾患の発展に重要な意味を持っていることが示唆された。また、食事の入力は成人の脂肪細胞前駆細胞の増殖を調節することができる最初の証拠を提供しています。
In Vitroおよび新規多孔性ゼラチン、アルギン酸足場上で骨髄間質細胞のin Vivo応答の差
組織工学と幹細胞療法は、完全に復元することができるという大きな可能性を秘めて、修復し、本体に損傷を受け、病気や失われた組織を交換してください。生体適合性多孔質足場は、再生部位への細胞の送達のために使用されています。また、間葉系幹細胞と呼ばれる骨髄間質細胞（MSC）は、アイソレーションの相対的な容易さに起因する組織工学のための魅力的な細胞源と、骨芽細胞、軟骨細胞を含む複数の細胞型を生成するために、in vitroで展開されたMSCSでの能力です。脂肪細胞。本研究では、MSCの配信のために多孔質、ゼラチン、アルギン酸の足場を作製するマイクロ波真空乾燥と呼ばれる新しい技術を活用し、in vitroおよびこれらの足場上のMSCSシードのin vivoでの反応の差を調べた。足場総気孔率が増加し、架橋密度を減少させることが判明しましたが、細孔径と細孔径分布には影響しませんでした。非常に多孔性が、足場は比較的小さく、毛穴や限られた相互接続性を持っていた。多孔性ゼラチン、アルギン酸足場は表面上の血管新生との優れた生体適合性を実証し、架橋密度に応じて、生体内で完全にbioresorbedされました。 MSCは、足場上で同じ速度で接続し、増殖することができましたし、MSC培養の自己再生の可能性はin vitro培養およびin vivo移植の両方で類似していた。しかし、皮下微小環境は、in vivoでの移植に比べてin vitroで培養したMSCの差動応答を強調し、in vitroの条件で比較して、骨軟骨および脂肪細胞系列に沿って、MSCの分化を抑制することが判明した。
筋肉の損傷は筋形成を促進するファイブロ/脂肪細胞前駆細胞を常駐アクティブ
効率的な組織の再生には、複数の細胞型の協調的応答に依存しています。ここでは、筋肉組織中の線維/脂肪細胞前駆細胞（FAPs）居住者の新たな集団を記述するが、別個の発達系統に起因する。脂肪浸潤のモデルではなく、健康な筋肉に皮下または筋肉内に配信するときの環境が彼らの生着を制御することを示唆し、異所性白色脂肪の世代のFAPs結果、精製の移植。これらの細胞は無傷の筋肉の静止であるが、損傷に応答して効率的に増殖する。 FAPsはmyofibresを生成しますが、共培養実験の主な筋前駆細胞の分化の速度が向上することはありません。要約すると、FAPsは筋前駆細胞を増殖するためのプロ分化信号の過渡的なソースを提供するために被害に展開します。
骨髄間質細胞の増殖·分化に対する骨移植片代替の効果
骨髄間質細胞（MSC）は、彼らが骨を再生する可能性があるので、理想的に組織工学骨移植に適しているだけでなく、自己複製能力によって修復組織の恒常性を維持することができます。理想的な骨移植の代替は、完全な骨欠損の再生と維持を確実にするためにMSCの自己複製と同様に差別化をサポートする必要があります。この調査の目的は、MSCの拡大と分化の異なる基板材料の効果を決定することであった。ポリリン酸カルシウム（CPP）、骨と水酸アパタイト/リン酸三カルシウム（HA / TCP）は、ラットのMSCを播種し、細胞の増殖を促進する培養条件で維持した。 0では、3、7、14、21日の細胞数は、24時間BrdUの取り込みによるMTTアッセイとサイクリング細胞の周波数を使用して代謝活性を測定することによって決定されました。これらの培養物における骨、軟骨、脂肪細胞及びマーカーの発現は、定量RT-PCRにより測定した。細胞数の初期の低下はすべての基板上に観察された。 CPPと骨ではなく、HA / TCPは、14日と21で増殖する細胞の増加をサポートしていました。さらに、成熟した骨マーカーのないレギュレーションは、これらの基質は未分化MSCの拡張をサポートしていることを示唆しているCPPと、骨、上で培養した細胞で観察されなかった。対照的に、HA / TCP上の細胞数は時間とともに減少し、唯一の珍しいBrdU陽性細胞が観察された。増殖の減少は、HA / TCPは骨系統に沿って、MSCの分化と成熟を支持することを示す、骨前駆細胞のマーカーと成熟した骨細胞のマーカーの大幅な増加のダウンレギュレーションと相関していた。
ヘルパーT細胞の分化と機能におけるヒストンリジンメチルトランスフェラーゼ现在、G9aの活性化と抑制機能
証拠を蓄積するヒストンリジンメチル化による遺伝子発現の調節は、いくつかの生物学的プロセスに重要であることを示唆している。ヒストンリジンメチルトランスフェラーゼ现在、G9aは、リジン9（H3K9me2）でのヒストンH3のジメチル化の大部分の責任があり、胚性幹細胞の分化の間に発達調節される遺伝子を効率的に抑圧するために必要です。しかし、现在、G9aは、大人の細胞で同様の役割を果たしているかどうかはまだ不明である。我々は、CD4で现在、G9aのために重要な役割を（+）Tヘルパー（Th）細胞の分化と機能を識別します。现在、G9a欠損Th細胞は、特にTh2の系統特異的サイトカインIL-4、IL-5、IL-13の彼らの誘導に障害と腸内寄生虫ネズミ鞭虫の感染から保護するために失敗しています。さらに、现在、G9a欠損Th細胞はIl17a座のH3K9me2の損失に関連付けられているIL-17Aの発現増加によって特徴付けられる。総称して、我々の結果は、成人のCD4（+）T細胞の分化のコミットメントの間の遺伝子発現を調節する现在、G9aのために予期せぬ、複雑な役割を確立します。
HDLコレステロールは高コレステロール血症者における内皮前駆細胞の強力な決定因子である
内皮前駆細胞（EPC）は、内皮層を修復することができ、心血管系の構成要素とみなされます。 EPCの数と機能は、心血管リスク因子を含む病理学的な条件の下で変更されることがあります。研究では、LDL-C、HDL-Cおよび高コレステロール血症患者における内皮依存性血管拡張を用いたin vitroの機能との関係で、循環EPC数を調査するために実施した。四十一、男性、39女性被験者は、年齢> 35 <45、LDLコレステロールの血漿レベル> 130 mg / dlと正常で（>または= 50 mg / dlと雌と>または= 40 mg / dlと雄）または低HDL- Cは、任意の随伴障害および/または薬物治療の欠如は、高コレステロール血症の最初の診断時に、連続してローマのサピエンツァ大学医学部病態部門の外来サービスで採用された。高LDL-Cの患者では、循環EPC数が減少し、移行するには、EPCの機能も同様に障害されていた。このパターンは、通常のHDL-Cサブグループでははるかに明白であった。内皮依存性血管拡張（EDV）が著しくなく、女性被験者では男性のHDL-Cの減少に従って減少した。単変量解析では、EPC番号とEDVの間に直接的な相関関係を示し、協会は性別、年齢、すべて有意に、in vivoで内皮細胞上のEPCの保護の役割を示唆するEDVに相関したHDL-C、調整後に永続化されます。我々の研究は、高コレステロール血症の被験者では、HDL-Cは、EPC番号と機能の強力な決定因子であり、EPC番号の減少は、血管内皮機能障害の独立した危険因子であることに記録した。
CD34仲介サルモネラに感染したマウスの腸炎
CD34は、血管内皮細胞からの造血幹細胞に至るまで、様々な細胞に発現して高度にグリコシル化シアロムチンです。そのグリコシル化の状態に応じて、CD34は細胞接着や遊走を促進または阻害することが示されているが、腸内でCD34の機能的役割が決定されていません。サルモネラ誘発性胃腸炎のモデルを使用して、我々は感染のコンテキスト内でCD34の役割を調べた。経口感染すると、CD34 +細胞の数が大幅にS. Typhimuriumの感染C57BL / 6マウスでは増加した粘膜、血管内皮および粘膜固有層で検出された。 S. Typhimuriumの感染C57BL / 6マウスの病態は、炎症、粘膜下浮腫およびcrypt破壊部位への好中球の動員によって特徴づけられた。対照的に、CD34（ - / - ）マウスは、遅延病理学、腸組織への炎症細胞の遊走と強化された生存率の欠陥を示した。重要なのは、これはCD34の走化性シグナルの欠如によるものではなかった（ - / - ）は、これらのマウスのようなマウスは、感染したC57/BL6コントロールマウスと比較して炎症性サイトカインおよびケモカインの感染後のいずれかの類似したまたは非常に高いレベルを持っていた。要約すると、我々は、炎症細胞の遊走を高め、それによってS. Typhimuriumの感染マウスの腸内でホスト媒介免疫病理を悪化させるのCD34のための新たな役割を示しています。
適度に粗面と6 Mmの長インプラントでサポートされているシングルクラウンの初期のローディング：前向き2年間のフォローアップコホート研究
後方地域内の単一の冠をサポートする6ミリメートル長い適度にラフインプラントの荷重の2年後にプロスペクティブな臨床および放射線学の成果を評価することができます。
エンジニア骨髄間葉系幹細胞を用いた歯周組織再生
失われた歯周組織の再生、そのハード（歯槽骨、セメント質）の両方の課題であるとソフト（歯根膜）、結合組織は、元のアーキテクチャに復元する必要があります。骨髄間葉系幹細胞（BM-MSC）は結合組織の再生のための魅力的な候補であると思われる。我々は、BM-MSCは、局所微小環境から生物学的な手がかりを感知し、ソフトとハードの両方の歯周結合組織の再生に寄与することを適切に整理することができるという仮説を立てた。この仮説を検証するために、我々は外科的に作成されたラットの歯周欠損部にマイクロゼラチンビーズ上のGFP（+）ラットBM-MSCsの拡張ex vivoで移植した。 3週間後、骨、セメント質と歯根膜の再生の証拠は、移植とコントロール動物の両方で観察された。しかし、BM-MSCを受けた動物は、かなり大きい新しい骨を再生した。さらに、細胞とビーズの移植を受けた動物は、機能回復の指標と有意に適切に配向し、歯根膜繊維を持っていた。最後に、BM-MSCは、彼らが直接これらの組織の細胞の再生に貢献できることを示唆し、新たに形成された骨、セメント質と歯根膜に統合され発見されたドナー由来。
大人の神経堤のような個別発達の起源から皮膚幹細胞の収束ジェネシス
皮膚由来の前駆体は、（SKPs）毛包のニッチと胚の神経堤前駆体と、その共有のプロパティ内に存在する多能性皮膚幹細胞である。ここでは、SKPsとその内因性の皮膚前駆体が神経堤からかどうかに由来するかどうかを尋ねたが、真皮自体のように、彼らは、複数の発達の起源に由来する。体節由来の細胞を標的とする神経堤に由来する細胞を標的とWnt1-CRE、およびMyf5-CRE、これを行うには、私たちは私たちは、系統のトレースを実行するための2つの異なるマウスはCreラインを使用していました。レポーターマウスにこれらのCreリコンビナーゼの行を交配することによって、我々は顔の内因性卵胞関連真皮の前駆体が神経堤から派生し、背トランク内のものは体節から派生したとして、それらが生成するSKPsを行うことを示している。これらのさまざまな発達の起源にもかかわらず、これらの2つの場所からSKPsは、機能的に似ていても、シュワン細胞に分化する能力に関しては、細胞型のみが神経堤から発生すると考えられる。顔と背SKPsことを確認したマイクロアレイを用いたグローバルな遺伝子発現の分析は、類似性の非常に高度を示し、彼らはまた、側板の起源を持って腹真皮由来SKPsに非常に似ていることを確認します。しかし、これらの発達の異なるSKPsはまた、発達の起源を反映している少数の遺伝子の差次的発現を保持します。したがって、成人の神経堤のような皮膚の前駆体は、非神経堤起源、体内の多くの神経内分泌細胞のための広範な意味を持つ発見から生成することができます。
喘息における気道上皮の修復のための間葉系幹細胞
気道上皮は常に炎症性および潜在的に有害な刺激に直面している。損傷後、住民前駆細胞および幹細胞プールの増殖と分化を伴う迅速な修復機構では、防護壁を維持するために必要です。喘息では、適切に修復し、再生する上皮の侵入能力を指している証拠が急速に蓄積されています。この結果は現在不明であるが、肺機能に大きな影響を与える可能性がある。間葉系幹細胞はいくつかの疾患の特定のセルの交換のためのユニバーサル情報源として機能するので、喘息の上皮に発生する慢性的なリモデリングの変化の治療のための潜在的な治療的介入としての希望を提供する可能性があります。彼らは強力なパラクリン免疫調節効果を持つことができますしかし、論争は、このメカニズムが必要で、これらの細胞はに家庭や気道内生着実際に缶や組織の機能に寄与しているかどうかかどうかについては存在しています。この資料では、気道上皮の再生に貢献するかもしれない特定の幹細胞集団に関する現在の知識に焦点を当て、潜在的な治療的介入として間葉系幹細胞の使用について説明します。
骨格筋再生における細胞Nonmyogenic
古典的な教義は、衛星細胞は骨格筋の再生に関与する主要な細胞型であることを指示するが、このような炎症と間質細胞の様々な代替細胞の種類にも積極的にこのプロセスに関与している。重要なアクセサリーとして、他の発達のソースからの再生とnonmyogenic細胞への直接の貢献者として筋原細胞を記述するモデルは、同様のシステムは、体内の多数の他の組織に記載されたことで、浮上している。増加する証拠は、炎症細胞が支持するアクセサリー細胞として機能するという概念をサポートしており、単に骨格筋損傷後のダメージをクリアに関与していない。さらに、最近の研究では、再生の制御に中心的な役割を果たしているとして、組織の居住者間葉系幹細胞集団の役割を強調している。これらの "アクセサリ"の細胞集団は、直接細胞接触およびパラクリン栄養因子の分泌を介して筋形成に影響を与えることが提案されている。アクセサリー細胞の理解の基本的な基盤は、再生医療のすべての将来に不可欠なコンポーネントとして認識され、この章では、免疫および骨格筋再生の組織に常駐する間葉系細胞の役割について説明する現在の文学の包括的な背景を提供することを目的とするべきである。
長期自己複製アクティビティはテロメラーゼテロメア恒常性の制御とマウスの造血幹細胞の機能をマスク解除
造血幹細胞（HSC）に拡大するための戦略は、移植ベースの治療のための重要なユーティリティを持つことができます。しかし、このような操作の有害な影響は不明のままである。ここでは、彼らのその後の再生とテロメラーゼの存在下で血液細胞の生産を維持する継続的な能力について、in vitroおよびin vivoでHSCの自己複製分裂の影響を検討した。 in vitroでのHSC拡大はNUP98-HOXA10hd伝達戦略を使用して、in vivoで、シリアル移植プロトコルを使用して得られた。我々の主要な受取人で再生造血幹細胞を移植した二次マウスで生産された白血球で〜10キロバイトテロメアの損失を観察NUP98-HOXA10hd形質およびin vitroで拡張ターシャの（ - / - ）造血幹6ヶ月前。第二世代の白血球にも大きな蓄積DNA損傷の指標γH2AX（コントロールからの相対パス）の発現上昇を示した。そのHSC複製移植後は、マウスのテロメアの短縮化に限定されるものではない示唆し、造血幹細胞は、（ - / - ）とは対照的に、重要なテロメアの短縮が直列に野生型（WT）またはtert移植し、新たに単離したから生産白血球では検出されなかった。これらの知見は、テロメアホメオスタシスにおけるテロメラーゼの役割を文書化し、長期自己複製の刺激にHSC機能の整合性を維持することに。
浸潤単球はEAEの進行をトリガーするが、住民ミクログリアプールに寄与しない
多発性硬化症および実験的自己免疫性脳炎（EAE）マウスモデルでは、形態的に区別できない食細胞の2つのプール、ミクログリアと炎症性マクロファージでは、それぞれ、血液を媒介とする前駆体の前駆体及び居住者の募集を増殖から生じる。これらの細胞型は、機能的に同等で熱く議論されていますが、実験的に対処するために挑戦しているかどうかを指定します。 CNS-常駐ミクログリアに影響を与えることなく、循環前駆細胞を置き換えるために並体結合と骨髄除去の組み合わせを使用して、我々は、EAEの麻痺のステージに単球浸潤と進行の間に強い相関が認められた。 CNSへの単球のケモカイン受容体依存性の採用の阻害は、これらの浸潤細胞は、病原性に不可欠であることを示唆し、EAEの進行を阻止した。最後に、我々はミクログリアは、細胞周期を入力して、休止、次寛解に戻すことができますが、募集球が消えてしまう、ことがわかったため、最終的に常駐ミクログリアのプールに貢献していません。結論として、我々は神経炎症や病気の進行において異なる役割を持つ骨髄単核細胞の2つの別個のサブセットを同定した。
P53依存性転写および腫瘍抑制はSet7/9-deficientマウスに影響を受けません。
p53のC末端の特定のリジン残基のメチル化は、遺伝毒性及び発癌性ストレス後にp53依存性転写を支配すると考えられている。特に、リジン372（p53K372me1）でヒトのp53タンパク質のSet7 / 9（KMT7）介在monomethylationは、ヒト細胞株におけるp53の活性化に必須であることが示唆された。この発見は、Set7 / 9ノックアウトマウスモデル（クラシュら、2008）で確認された。 Set7 / 9欠損独立したノックアウトマウス系統では、我々はp53の調節への関与を調査し、これらのマウス由来の細胞は、遺伝毒性と発癌性の侮辱後にp53依存性転写を誘導する能力が正常であることがわかりました。最も重要なのは、我々は主要な規制のイベントを表すように思えませんし、かなりin vivoでのp53の活性を制御しないp53のそのSet7/9-mediatedメチル化を示し、これらのマウスにおける標準的なp53の機能でない障害を検出しません。
骨再生のためにカルシウムポリリン酸のin Vivo評価に
骨同種移植に関連付けられている現在の問題は、病気の感染の危険性、限られた可用性、およびコストが含まれています。合成足場は、これらの問題を解決する代替移植材料として提案されている。ポリリン酸カルシウムは、良好な機械的性質と生体適合性を示した新規合成足場材料である。ここでは、in vivoでの細胞増殖および分化をサポートする能力の点ではポリリン酸カルシウムを評価した。ポリリン酸カルシウム、morsellized海綿骨と水酸アパタイト/リン酸三カルシウム粒子は骨髄間質細胞を播種し、NOD / SCIDマウスの背部皮下に移植した。 7、14、および28日でサンプルを採取し、増殖特性および遺伝子発現を解析した。すべてのテストされた移植片の材料は、同様の増殖特性と遺伝子発現していた。皮下環境では、足場材料そのものよりも細胞の増殖と分化に強い影響を与えた。しかし、カルシウム、ポリリン酸は、生体内で細胞の生存を支援する能力にハイドロキシアパタイト/リン酸三カルシウムと骨に優れていることが示された。研究では、ポリリン酸カルシウムは、骨再生のための移植材料としてmorsellized海綿骨を交換するための可能性を秘めていることを確認した。
CD34は、効率的な骨格筋の再生を容易にするために、増殖にサテライト細胞運動およびエントリを促進する
細胞表面シアロムチンCD34の発現は、筋衛星細胞を含む多くの成体幹細胞の種類に共通です。しかし、明確な幹細胞や再生に関連する表現型は、これまでにCD34を欠損したマウスで報告されておらず、これらの細胞上のその機能はよくわかっていないままされています。ここでは、衛星細胞媒介筋肉の再生におけるCD34の機能的役割を評価します。 （ - / - ）急性または慢性のいずれかの筋肉の負傷で挑戦したときには明らかな発達の表現型を持たないマウスは、筋肉の再生に不具合が表示されます我々は、CD34であることを示す。この回生欠陥が増殖と遅延筋の進行に障害のあるエントリによって引き起こされます。 CD34の報告付着防止機能を備えた、一貫性のあるノックアウト衛星細胞はまた、それらのホスト筋線維に沿って減少した運動性を示しています。完全に、我々の結果は、衛星細胞の活性化の不十分な理解の初期段階におけるCD34の役割を識別し、幹細胞のマーカーである以上に、CD34は、変調幹細胞活性の重要な機能を果たしていることを最初の証拠を提供しています。
標的細胞融合は、in Vitro及びin Vivoで安定したヘテロカリオンの生成を容易に
誘導される細胞融合は、核初期化の現象など、いくつかの重要な発見を、有効になって、まだ変性疾患の新規治療法として適用されるかもしれません。ただし、既存のfusogensは、核初期化と臨床応用するために必要な特異性を根底にエピジェネティックな修飾の調査を有効にするために必要な効率性を欠いている。ここでは、キメラ麻疹特異的かつ効率的に仲介する赤血球凝集素、Hα7、in vitroおよびin vivoの両方の骨格筋と多様な種類の細胞の融合を提示します。ポリエチレングリコールを直接比較した場合、Hα7は一貫してヘテロカリオンの収率で大幅な増加を生成し、毒性の有意水準を示した。また、この増加した融合効率は、ヒト線維芽細胞とマウスの筋管の核初期化は、次Hα7媒介融合に関連付けられているクロマチン修飾の検出を可能にしました。最後に、Hα7は、この戦略は、治療用遺伝子デリバリーを使用することができることを示唆し、またin vivoでの骨格筋の修復に移植された線維芽細胞の貢献を増大させることができた。
インプラント周囲のハードおよびソフトの組織に抽出ソケットにすぐにインストールされているさまざまなサイズと構成を持つインプラントの影響：犬における実験的研究
AIM：さまざまなサイズと構成のインプラントはすぐに抜歯した後にソケットにインストールされたソフトとハードのインプラント周囲組織の治癒に及ぼす影響を調べるため。材料と方法：粘膜円筒形のインプラント、コントロールサイトで、直径3.3ミリメートル、テストサイトで、直径5ミリメートルの円錐は、すぐに抜歯後のイヌにおける第四下顎小臼歯の先端部ソケットにインストールされていました。 4ヶ月後、硬組織及び軟組織の治癒は組織学的に評価した。結果：すべてのインプラントが石灰化し成熟した骨に統合されました。両方のテストや制御サイトでは、歯槽堤が吸収を受けた。インプラントのテストサイト（円錐、3.8ミリメートル）で頬骨の表面には複数の制御部位（; 1.6ミリメートルの円筒）と比較して再吸収されました。軟組織の寸法は両群で同等であった。しかし、インプラントショルダーに関連して、インプラント周囲粘膜は、コントロールのサイトと比較してテストでより多くの根尖側に位置していた。結論：本研究では、インプラント表面と頬歯槽骨堤の外側の輪郭の間の距離が頬の骨板の吸収の度合いに影響を与えたことを確認した。インプラント表面と歯槽堤の外側の輪郭の間の距離が小さい場合、その結果、インプラントの肩に関連して、インプラント周囲粘膜は、より心尖部レベルで確立されます。
正常な甲状腺超音波検査の5教科の一つは、甲状腺のテストを変更した
甲状腺超音波検査および実験室、臨床および身体計測パラメータを持つ甲状腺容積の関係間の関係は明らかにされていません。研究の目的は、甲状腺のテストを予測する際に、正常および低エコー、不均一な結節ない甲状腺を調べるために、いくつかの臨床パラメータを使用して甲状腺容積との相関を評価することであった。シリーズは、最初の評価では434科目（通常の甲状腺超音波検査で244と、低エコー、不均一な甲状腺を持つ190）含まれています。通常の超音波検査と偏ったテストで被験者は、1年後に再評価した。 TSHは、ケースと甲状腺抗体の9.8％に上昇した一方で、通常のフリー-T（4）を示した通常の超音波を持つすべての被験者は、別の9.8パーセントに陽性であった。低エコー、不均一な甲状腺の患者では、無料の-T（4）は33.2パーセントに低く、TSHは78.4パーセントに上昇し、甲状腺抗体は76.3％で陽性であった。通常の超音波検査は9.5％で低エコー、不均一な甲状腺た（p <0.001）一方、例81.1パーセントで、通常のテストと一致しました。テストの再評価は、有意差は認められなかった。通常の超音波検査とテストの両方を有する被験者では、甲状腺容積はBMI（P = 0.04）、体表面積（P = 0.002）、年齢（P = 0.001）、体重（p = 0.003）と相関していた。甲状腺の検査評価は、超音波検査で正常または低エコー、不均一な甲状腺の被験者間で異なっていた。甲状腺疾患フリー被験者の甲状腺容積は年齢、体重、BMIと体表面積と相関していたが、これは甲状腺の大きさの正規の参照を調べるために関心を持たれるべきものである。
リジンメチルトランスフェラーゼ现在、G9aは、プロウイルスのサイレンシングのde Novo DNAメチル化と設置ではなく、メンテナンスが必要です
ヒストンH3のリジン9（H3K9me）とDNAメチル化におけるメチル化は、特定の遺伝子や反復配列の転写サイレンシングに重要な役割を果たしている。両方のマークは、マウス胚性幹細胞のクラスIおよびII内在性レトロウイルス（ERVs）（mESCs）で検出されます。最近、我々はH3K9固有のリジンメチルトランスフェラーゼ（KMTase）Eset/Setdb1/KMT1EがH3K9me3ために必要とmESCsでERVsのサイレンシングの維持されていることを報告した。対照的に、G9a/Ehmt2/KMT1CこのKMTaseはH3K9ジメチル化（H3K9me2）と、これらのレトロトランスポゾンの効率的なDNAメチル化に必要とされているという事実にもかかわらず、する不要です。外因性レトロウイルスの転写（XRV）モロニーマウス白血病ウイルスが急速にのde novo DNAメチル化との併用、mESCsの統合後消滅する。しかし、H3K9 KMTasesこのプロセスで果たす役割が対処されていません。ここでは、现在、G9aはなく、Suv39h1またはSuv39h2は、mESCsに新しく統合されたモロニーマウス白血病ウイルスベースのベクターのサイレンシングに必要であることを示しています。 （ - / - ）现在、G9aのサイレンシング欠陥細胞がXRVsは、现在、G9aの直接の標的であることを示し、プロウイルスLTRでH3K9me2の減少を伴っている。 Dnmt3a欠損mESCsで観察されたプロウイルスDNAメチル化やサイレンの欠陥をphenocopying、ライン（ - / - ）さらに、新たに統合されたプロウイルスのde novo DNAメチル化は、现在、G9aに損なわれてしまう。一度確立され、しかし、XRVsのサイレンシングの維持は、ERVsのように、KMTase Esetは排他的に依存しています。まとめると、これらの観測はmESCsで、H3K9 KMTase现在、G9aが新たに統合されたプロウイルスのサイレンシングにより、設立のためではなく、メンテナンスのために必要とされることを明らかにした。
