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Articles by Fardad T. Afshari in JoVE
JoVE General
雪旺的星形胶质细胞使用相互作用分析检测
Cambridge Centre for Brain Repair, Department of Clinical Neurosciences, University of Cambridge
本文拟在逐步时尚来形容常用的
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外在和内在因素控制脊髓损伤后的轴突再生。
脊髓损伤是一种最具破坏性的情况会影响中枢神经系统。它可能导致永久残疾，全世界受影响的约 200 万人。受伤以后，髓鞘堆积物和遗址的损伤抑制胶质瘢痕形成通向一个物理和化学的屏障，阻止轴突生长和再生。哺乳动物中枢神经系统因此有损伤后修复本身的内在能力有限。改善轴突产物和促进功能恢复，它是基本确定的各种内在和外在因素控制再生和神经轴突的中枢神经系统抑制环境内的导航。脊髓损伤研究最新进展已打开的维修电源线及改善外伤后功能恢复的潜在目标探索的新途径。在这里，我们讨论一些重要的关键分子能够利用修复脊髓损伤。
雪旺氏细胞迁移是整合素依赖和抑制星形胶质细胞产生蛋白聚糖的。
雪旺氏细胞移植在脊髓创伤弥合的损伤和髓鞘再生的脱髓鞘性条件的站点中有相当大的希望。他们支持轴突再生和分泌生长因子和屏蔽轴突从中枢神经系统的抑制环境同时提供一个宽松的表面和基质分子发芽。但是，以下移植雪旺氏细胞显示洄游的能力有限，他们不能与主机星形胶质细胞混合。这反过来导致形成一个锋利的边界与突然转雪旺氏细胞移植物与宿主组织星形胶质细胞，因此防止再生纤维从退出嫁接。这项研究的目的是确定对星形胶质细胞参与限制雪旺氏细胞迁移的抑制元素。我们使用的细胞迁移的体外测定，显示产生的星形胶质细胞的蛋白聚糖参与星形胶质细胞的膜上的雪旺氏细胞运动的抑制作用。这在使用 RNAi 或消化的 glycosaminglycan 链上蛋白聚糖的星形胶质细胞中的蛋白多糖的组合式提高了雪旺氏细胞迁移。我们进一步显示蛋白聚糖的雪旺细胞整合素功能紊乱介导其效果和蛋白聚糖的抑制作用可以克服由雪旺氏细胞整合素激活。
整合素激活或 Alpha 9 表达式允许上布鲁赫的膜在湿的年龄相关性黄斑变性的视网膜色素上皮细胞粘附。
视网膜色素上皮细胞故障是一种致病的年龄相关性黄斑变性，功能和新的视网膜色素上皮细胞移植是有吸引力的战略，以防止进一步的进展和视力丧失。然而，移植显示效力有限，主要是因为细胞移植失败坚持和迁移到病理布鲁赫膜上。整合素介导对布鲁赫的膜的附着力。布鲁赫的膜老化导致下降整合素配体，并添加到此，湿年龄相关性黄斑变性导致如韧 C.抗黏附分子的表达上调我们因此有调查是否操纵的视网膜色素上皮细胞整合素功能可以还原其黏附和迁移湿的年龄相关性黄斑变性损坏布鲁赫的膜上。使用自发永生人视网膜色素上皮细胞 (成人视网膜色素上皮细胞-19），我们显示该黏附和迁移对布鲁赫的膜元件是整合素依赖和整合素活化剂，从而增强锰和 — TS2/16。这些允许要遵守和迁移低浓度的配体，因为会在老年的布鲁赫膜中找到的单元格。我们下一步制定剥离细胞的布鲁赫的膜，以便进行黏附和迁移的检测方法可以在其表面的一种方法。整合素激活了提高视网膜色素上皮细胞粘附和迁移对正常人和大鼠布鲁赫膜中度影响。然而，对编写从人类湿与年龄相关黄斑变性影响眼睛的布鲁赫的膜，附着力较低和整合素激活了很大影响。候选分子防止视网膜色素上皮与互动与年龄相关黄斑变性影响布鲁赫膜是韧 C，我们确认本高级别在湿的年龄相关性黄斑变性膜。我们展示韧 C 是防粘的视网膜色素上皮细胞，但整合素激活后，他们可以遵守和对它使用 alphaVbeta3 整合素迁移。另外，我们发现这与 alpha9 整合素，韧-C 结合整合素韧 C.alpha9beta1 介导的黏附和迁移大量增加导致视网膜色素上皮细胞转导这两个表达式 alpha9 整合素和整合素激活大大提高坚持韧富湿的年龄相关性黄斑变性影响布鲁赫的膜视网膜色素上皮细胞的能力。我们的研究结果表明操纵的视网膜色素上皮细胞整合素通过整合素激活战略或如 alpha9，新整合素的表达可以有效地改善湿年龄相关性黄斑变性影响眼睛视网膜色素上皮细胞移植的疗效。
星形胶质细胞产生的 Ephrins 抑制雪旺氏细胞迁移通过 VAV2 信号。
雪旺细胞为脊髓损伤和神经轴突 remyelinating 桥接是有希望的候选人。然而，嫁接的雪旺细胞显示主机星形胶质细胞与移植网站从因此有限的迁移有点混杂。这将导致形成一个锋利的边框的主机星形胶质细胞与雪旺细胞之间导致神经轴突停滞在移植主机接口和未能退出嫁接。我们调查了弗/ephrin 的相互作用参与雪旺氏细胞和星形胶质细胞的分离和限制雪旺氏细胞迁移的可能性。使用逆转录 PCR，我们有特点 ephrin 和雪旺氏细胞和星形胶质细胞，弗剖面显示星形胶质细胞产生所有 ephrinAs 和雪旺氏细胞产生的受体 EphA2、 EphA4 和 EphA7。几个 ephrinAs 抑制层粘连蛋白与 ephrinA5 正在对雪旺细胞迁移的最有效。阻止与过剩 EphA4 Fc EphA 受体增加星形胶质细胞的雪旺细胞迁移，提高了旺-星形胶质细胞混杂。我们显示介导通过 VAV2 的 ephrinA5 对雪旺细胞的作用。两者都聚集 ephrinA5 和星形胶质细胞接触增加雪旺氏细胞中 VAV2 的磷酸化。VAV2 组合式废除聚集 ephrinA5 对迁移的抑制作用，并增加了对星形胶质细胞迁移雪旺细胞的能力。另外，我们发现作用为 ephrinA5 在抑制雪旺氏细胞整合素信号及功能。总体而言，我们建议弗/ephrin 交互抑制雪旺氏细胞迁移和混杂与星形胶质细胞通过变风量信号影响的整合功能。
星形胶质细胞雪旺氏细胞共培养系统。
雪旺氏细胞是细胞在创伤和脱髓鞘脊髓损伤后的修复策略中使用的候选人之一。雪旺细胞使用中的主要障碍之一是其洄游能力有限的中枢神经系统和边界形成雪旺氏细胞移植物与宿主星形胶质细胞之间在星形胶质细胞环境中。这一边界创建试图退出雪旺氏细胞移植并返回到中枢神经系统的神经轴突再生的突发性障碍。为方便这些交互的基本机制的研究，制定旺-星形胶质细胞体外共培养化验。在本章中，我们描述了两个常用的共培养系统，称为雪旺-星形胶质细胞边界检测和倒立的 coverslip 迁移测定的方法。
要检查星形胶质细胞少突胶质细胞前体细胞迁移体外测定。
在开发和中枢神经系统脱髓鞘病变也以下过程需要神经轴突的髓鞘少突胶质细胞迁移。少突胶质细胞产生的少突胶质前体细胞 （OPCs），目前在脑和脊髓内。要达到脱髓鞘病变，OPCs 必须通过密网抑制星形胶质细胞的迁移。因此，这两个单元格类型之间的相互作用是非常重要的髓鞘。为方便这些交互的基本机制的研究，开发的少突胶质细胞-星形胶质细胞体外共培养化验。在这一章中我们将介绍共育体系称为倒的 coverslip 迁移检测中，被用来研究少突胶质细胞洄游行为对星形胶质细胞的影响的方法。
