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Articles by Fardad T. Afshari in JoVE
JoVE General
Analyse de Schwann-astrocytes interactions à l'aide In Vitro Tests
Cambridge Centre for Brain Repair, Department of Clinical Neurosciences, University of Cambridge
Cet article vise à décrire de manière progressive l'couramment utilisés
Other articles by Fardad T. Afshari on PubMed
Facteurs Extrinsèques Et Intrinsèques Contrôle La Régénération Axonale Après Une Lésion De La Moelle épinière
Lésions de la moelle épinière est l'une des conditions les plus dévastateurs qui affecte le système nerveux central. Elle peut conduire à une invalidité permanente et il ya près de deux millions de personnes touchées dans le monde entier. Après une blessure, l'accumulation de débris de myéline et la formation d'une cicatrice gliale inhibitrice sur le site de lésion entraîne une barrière physique et chimique qui bloque la croissance axonale et la régénération. Le système nerveux central des mammifères a donc une capacité limitée intrinsèque à se réparer après une blessure. Afin d'améliorer la croissance axonale et favoriser le rétablissement fonctionnel, il est essentiel d'identifier les différents facteurs intrinsèques et extrinsèques de contrôle de régénération et de la navigation des axones au sein de l'environnement inhibiteur du système nerveux central. Les progrès récents dans la recherche la moelle épinière ont ouvert de nouvelles voies pour l'exploration de cibles potentielles pour la réparation de la moelle et l'amélioration de la récupération fonctionnelle après un traumatisme. Ici, nous discutons de quelques-unes des molécules clés importants qui pourraient être exploités pour la réparation des lésions de la moelle épinière.
La Migration Des Cellules De Schwann Est Intégrine-dépendante Et Inhibée Par Les Astrocytes Produite Aggrecan
La transplantation des cellules de Schwann a très prometteur dans les traumatismes médullaires de combler le site de la lésion et pour la remyélinisation dans des conditions démyélinisante. Ils soutiennent la régénération axonale et la germination par des facteurs de croissance sécrétant et offrant une surface permissive et molécules de la matrice tout en protégeant les axones de l'environnement inhibiteur du système nerveux central. Toutefois, à la suite de transplantation des cellules de Schwann montrent limitée capacité migratoire et ils sont incapables de se mêler avec les astrocytes d'accueil. Cela conduit à la formation d'une frontière nette et une transition abrupte entre le greffon de cellules de Schwann et les astrocytes tissulaires de l'hôte, ce qui empêche les axones de sortir de la greffe. L'objectif de cette étude était d'identifier les éléments inhibiteurs sur les astrocytes participent à restreindre la migration des cellules de Schwann. En utilisant des tests in vitro de migration cellulaire, nous montrons que l'aggrécane produite par les astrocytes est impliquée dans l'inhibition de la motilité des cellules de Schwann sur des monocouches astrocytaires. Knockdown de ce protéoglycane dans les astrocytes en utilisant l'ARNi ou la digestion des chaînes glycosaminglycan sur aggrécane améliore la migration de cellules de Schwann. Nous montrons en outre la médiation aggrecane son effet par une perturbation de la fonction des intégrines dans les cellules de Schwann, et que les effets inhibiteurs de l'aggrécane peut surmonter par l'activation des intégrines des cellules de Schwann.
Integrin Activation Ou Alpha 9 Expression Permet La Rétine Pigmentée Adhérence Des Cellules épithéliales Sur La Membrane De Bruch Dans La Dégénérescence Maculaire Humide Liée à L'âge
Rétinienne dysfonctionnement cellulaire épithélium pigmentaire est une caractéristique responsable de la dégénérescence maculaire liée à l'âge, et la transplantation de nouvelles cellules de l'épithélium pigmentaire est une stratégie intéressante pour éviter de nouvelles pertes progression et visuelle. Toutefois, les greffes ont montré une efficacité limitée, principalement parce que les cellules transplantées ne parviennent pas à adhérer et migrer sur une membrane de Bruch pathologique. Adhésion à la membrane de Bruch est intégrine-médiation. Le vieillissement de la membrane de Bruch conduit à une baisse des ligands des intégrines et, ajouté à cela, la dégénérescence maculaire humide liée à l'âge conduit à une régulation positive de l'anti-adhésives des molécules telles que la ténascine-C. Nous avons donc cherché à savoir si la manipulation de la fonction des intégrines dans les cellules de l'épithélium pigmentaire peut restaurer leur adhésion et la migration sur le mouillé âge dégénérescence maculaire liée à endommagée par la membrane de Bruch. Utilisation spontanément immortalisé des cellules de l'épithélium pigmentaire (adulte épithélium pigmentaire de la rétine-19), nous montrons que l'adhérence et la migration sur les composants de la membrane de Bruch est intégrine-dépendante et renforcée par l'intégrine-activation des agents de manganèse et de TS2/16. Ces cellules ont permis d'adhérer et de migrer sur de faibles concentrations de ligand, comme cela se trouve dans la membrane de Bruch ans. Nous avons ensuite développé une méthode pour le décapage des cellules de la membrane de Bruch sorte que les dosages d'adhésion et la migration peut être effectuée sur sa surface. Integrin activation a eu un effet modéré sur le renforcement de la rétine pigmentée adhérence des cellules épithéliales et de la migration sur la santé humaine normale et la membrane de Bruch rat. Toutefois, sur la membrane de Bruch préparé à partir de l'homme humides âge dégénérescence maculaire liée à touchées par les yeux, l'adhérence était plus faible et l'activation de l'intégrine a eu un effet beaucoup plus grande. Une molécule candidate pour empêcher la rétine pigmentée interaction avec la membrane épithéliale âge dégénérescence maculaire liée à touché de Bruch est la ténascine-C, ce qui nous confirmons est présent à des niveaux élevés dans humide liée à l'âge membrane dégénérescence maculaire. Nous montrons que la ténascine-C est anti-adhésif pour la rétine cellules épithéliales pigmentées, mais après activation de l'intégrine, ils peuvent adhérer et migrer à l'utiliser alphaVbeta3 intégrine. Sinon, nous constatons que la transduction des cellules épithéliales pigmentées rétiniennes avec alpha9 intégrine, une intégrine ténascine-C-contraignant, a conduit à une forte augmentation de alpha9beta1 médiée par l'adhésion et la migration sur la ténascine-C. La fois l'expression de l'intégrine alpha9 et activation de l'intégrine grandement amélioré la capacité des cellules de l'épithélium pigmentaire à adhérer à la ténascine-riches humides âge dégénérescence maculaire liée à touchées par membranes de Bruch. Nos résultats suggèrent que la manipulation des intégrines des cellules épithéliales pigmentaires rétiniennes grâce à des stratégies d'activation des intégrines ou l'expression d'intégrines nouveaux tels que alpha9, pourrait être efficace dans l'amélioration de l'efficacité de la transplantation de cellules de pigment rétinien épithéliale humides âge dégénérescence maculaire liée à touchées par les yeux.
Astrocyte-produits éphrines Inhiber La Migration Des Cellules De Schwann Via Vav2 Signalisation
Les cellules de Schwann sont un candidat prometteur pour combler les blessures de la moelle épinière et remyélinisantes axones. Cependant, les cellules de Schwann greffées montrent peu de croisements avec des astrocytes d'accueil et de migration donc limitée à partir de sites de transplantation. Ce qui conduit à la formation d'un bord tranchant entre les astrocytes et les cellules de Schwann hôte, ce qui entraîne axones bloquées à l'interface de greffage hôte et n'ayant pas la sortie de la greffe. Nous avons étudié la possibilité que Eph / éphrine interactions sont impliquées dans la ségrégation des cellules de Schwann et les astrocytes et en limitant la migration des cellules de Schwann. Utilisation de RT-PCR, nous avons caractérisé le éphrine et le profil Ep dans les cellules de Schwann en culture et les astrocytes, montrant que les astrocytes produisent tous les ephrinAs et les cellules de Schwann produire les récepteurs EphA2, EphA4, et EPHA7. Plusieurs ephrinAs inhiber la migration des cellules de Schwann sur la laminine, avec ephrinA5 étant le plus efficace. Le blocage des récepteurs d'EPHA avec un excès de EphA4-Fc augmente la migration des cellules de Schwann sur les astrocytes et améliore Schwann-astrocyte brassage. Nous montrons que l'action de ephrinA5 sur les cellules de Schwann est médiée par Vav2. Les deux contacts regroupés ephrinA5 et des astrocytes augmente la phosphorylation de Vav2 dans les cellules de Schwann. Knockdown de Vav2 abroge l'effet inhibiteur de ephrinA5 regroupés sur la migration et augmente la capacité des cellules de Schwann à migrer sur les astrocytes. En outre, nous avons trouvé un rôle à jouer dans la cellule de signalisation ephrinA5 inhibant Schwann intégrine et de la fonction. Dans l'ensemble, nous suggérons que Eph / éphrine interactions inhiber la migration des cellules de Schwann et le brassage avec des astrocytes via VAV signalisation affectant la fonction des intégrines.
Systèmes Coculture Astrocytes-Schwann-cellulaires
Les cellules de Schwann sont l'un des candidats cellulaires utilisés dans les stratégies de réparation suite à un traumatisme et une démyélinisation de la moelle épinière. L'un des obstacles majeurs à l'utilisation des cellules de Schwann est leur capacité limitée migratoires au sein de l'environnement astrocytaire des CNS et de la formation frontière entre les cellules de Schwann de la greffe et les astrocytes d'accueil. Cette limite constitue un obstacle brutal pour les axones qui tentent de quitter la greffe de cellules de Schwann de retour vers le SNC. Pour faciliter l'étude des mécanismes sous-jacents à ces interactions, dans des essais in vitro de coculture de Schwann des astrocytes ont été développés. Dans ce chapitre, nous avons décrit la méthodologie utilisée pour deux systèmes de coculture couramment utilisés connus comme le test des limites de Schwann-astrocytes et le dosage de la lamelle inversé la migration.
Un Test in Vitro Pour Examiner Oligodendrocyte La Migration Des Précurseurs Sur Les Astrocytes
La migration des oligodendrocytes est requis pour la myélinisation des axones au cours du développement et aussi suite à des lésions de démyélinisation du système nerveux central. Les oligodendrocytes sont issus de cellules précurseurs d'oligodendrocytes (OPC) qui sont présents dans le cerveau et la moelle épinière. Pour atteindre les lésions de démyélinisation, les OPC ont à migrer à travers un maillage dense de astrocytes inhibitrices. Par conséquent, les interactions entre ces deux types de cellules sont d'une grande importance dans la myélinisation. Pour faciliter l'étude des mécanismes sous-jacents de ces interactions, en co-culture in vitro des dosages de oligodendrocytes les astrocytes ont été développés. Dans ce chapitre, nous décrivons la méthodologie d'un système de co-culture connue comme l'épreuve la migration inversée lamelle, qui a été utilisée pour étudier l'effet des astrocytes sur le comportement migratoire des oligodendrocytes.
