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Articles by Felix Ellett in JoVE
JoVE Immunology and Infection
Die Infektion von Zebrafisch-Embryos mit Intrazelluläre bakterielle Krankheitserreger
1Department of Molecular Cell Biology, Institute of Biology, Leiden University, 2Department of Medical Microbiology and Infection Control, VU University Medical Center, 3Australian Regenerative Medicine Institute, Monash University
Transparente Zebrafischembryonen haben nützliches Modell Gastgeber zu visualisieren und funktionell Studie Wechselwirkungen zwischen Zellen des angeborenen Immunsystems und intrazelluläre bakterielle Erreger wie bewiesen
Other articles by Felix Ellett on PubMed
Die Rolle Der ETS Faktor Erg Im Zebrafisch Vaskulogenese
ERG, ein Mitglied der ETS-Produktfamilie von Transkriptionsfaktoren, hat verwickelt worden, von früheren Studien in endothelialen und blutbildenden Entwicklung. Deregulierung der menschlichen ERG-Locus ist akute myeloische Leukämie, Prostatakrebs und Ewing Sarkom zugeordnet. Zum besseren Verständnis die Rolle der Erg während der frühen Entwicklungsphase genutzt wir die Zebrafish als geneigt sein, beschreibende und funktionelle Studien in-vivo Modell. Zebrafish haben ein einzelnes Erg-gen, das Mesoderm und seine vaskulären Ableitungen während der Angioblast Migration, Vaskulogenese und frühen Angiogenese ausgedrückt wird. Mutant und Morphant Ausdruck Analysen platziert Erg in einen genetischen Weg flussabwärts Cloche, tal1/Scl und Etsrp während der frühen Angioblast Migration. Darüber hinaus eine Kombination von Gain of Function und Verlust der Funktion Studien vorgeschlagen eine redundante noch spezifische Rolle für Erg Angioblast Spezifikation/Verbreitung sowohl in frühen Angiogenese und eine synergistische Interaktion mit den kritischen ETS Faktor Etsrp.
Zebrafisch Als Modell Für Wirbeltiere Blutbildung
Der Zebrabärbling (Danio Rerio) ist ein Modellorganismus, einen nützlichen Beitrag in vielen Bereichen der biologischen Forschung. Zebrabärbling erwiesen sich besonders geeignet für die frühe Entwicklung zu studieren. Die Transparenz und Ex-Vivo-Entwicklung von Zebrafish Embryos bedeutet, dass diese frühe Embryologie kann problemlos visualisiert werden, vor allem mit transgenen Stämme Fluorophore Kennzeichnung Gewebe von Interesse zum Ausdruck zu bringen. Hohe Fruchtbarkeit und Toleranz von dichten Mutagenese machte es ein praktisches Modell für forward genetisches Screening und Erstellung von mutagenized Bibliotheken aus denen stabilen mutierten Allele wiederhergestellt werden können. Transiente genetische Manipulation durch Mikroinjektion von mRNA (Überexpression) oder Morpholino antisense Oligonukleotide (Niederschlag) bieten praktische Methoden zur Beurteilung der funktional genetischer Regulationsmechanismen ohne die Notwendigkeit für erweiterte Zucht-Strategien. Ein herausragenden Beispiel für die Nützlichkeit dieses Modell wurde für den Einsatz zur Modellierung der den frühesten Stadien der Blutbildung. Zebrabärbling Entwicklungsstörungen Blutbildung zeigt enge Korrespondenz an die Entwicklung der Säugetier-hämatopoetischen Systems und wird durch geregelt konserviert Molekulare Bahnen. Diesen Bericht hebt wichtige neuere Studien, die dieses Modell verwendet haben, um Einblicke in vertebrate hämatopoetischen Entwicklung und Angeborene Immunität.
MPEG1 Projektträger Transgene Direkte Makrophage-Übertragungslinie Ausdruck Im Zebrafisch
Makrophagen und Neutrophilen spielen wichtige Rollen bei der angeborenen Immunantwort, phagocytosing eindringenden Mikroben und Bereitstellung von antimikrobielle Substanzen auf der Website von Verletzungen. Funktionsanalysen der zellulären angeborenen Immunantwort im Zebrafisch-Infektion/Entzündung-Modelle haben mit Neutrophilen Fluorophor-gekennzeichnet durch transgene Linien unterstützt wurde. Jedoch war es nicht möglich, die Verhaltensweisen der Makrophagen und Neutrophilen/Makrophagen Interaktionen in-vivo direkt zu studieren, da gab es keine nur-Makrophagen-Reporter-Linie. Um dieses Hindernis zu entfernen, wurde ein Makrophage-spezifische Marker identifiziert (mpeg1) und seine Förderer in mpeg1-gesteuerte transgene verwendet. MPEG1-gesteuerte transgene werden in Makrophagen-Übertragungslinie Zellen ausgedrückt, die Neutrophilen-Kennzeichnung führen nicht zum Ausdruck bringen. Verwenden diese Zeilen, verglichen die verschiedenen dynamischen Verhalten von Neutrophilen und Makrophagen nach Verwundung waren nebeneinander in zusammengesetzten Transgenics. Makrophagen/Neutrophilen-Interaktionen, z. B. Phagozytose der alternde Neutrophilen, wurden bereitwillig in Echtzeit beobachtet. Diese Zebrafisch-transgenen bieten eine neue Ressource, die auf die Felder der Entzündung, Infektion und Leukozyten Biologie beitragen werden.
In-vivo-Visualisierung Und Dämpfung Von Oxidierten Lipid-Akkumulation in Hypercholesterolemic Zebrafisch
Oxidative Modifikation des LDL ist eine frühe pathologische Ereignis in der Entwicklung von Arteriosklerose. Oxydation Veranstaltungen wie Malondialdehyde (MDA) Bildung können spezifische, immunogen Epitopes produzieren. Tatsächlich Antikörper gegen Epitope MDA-abgeleitet sind weit verbreitet in der Arteriosklerose Forschung und sind erprobt, um kardiovaskuläre Bildgebung zu ermöglichen. In dieser Studie entwickelt wir eine transgene Zebrafish mit Temperatur-inducible Ausdruck einer EGFP-beschrifteten Einzel-Kette menschlichen monoklonalen Antikörpers, IK17, bindet an MDA-LDL und optisch transparente Zebrafisch-Larven für Untersuchungen eingesetzt. Fütterung eine hoch-Cholesterin-Diät (HCD) ergänzt mit einem roten, die fluoreszierende Lipid-Marker an der transgenen Zebrafisch vaskuläre Lipid Anhäufung geführt, quantifiziert, lebenden Tieren, die mit Hilfe der konfokalen Mikroskopie. Nach Hitze-Schock-induzierte-Ausdruck des IK17-EGFP messen wir den zeitlichen Verlauf vaskulärer Akkumulation von IK17-spezifische MDA Epitopes. Behandlung mit Antioxidantien oder ein Rückschritt-Diät führte zu reduzierten IK17 Bindung an vaskuläre Läsionen. Interessanterweise Homogenates der Larven IK17-EGFP-Ausdruck an MDA-LDL gebunden und MDA-LDL-Bindung an Makrophagen gehemmt. Darüber hinaus verhindert nachhaltig Ausdruck der IK17-EGFP effektiv HCD-induzierten Lipid-Akkumulation in der Gefäßwand, was darauf hindeutet, dass der Antikörper selbst therapeutische Wirkungen haben kann. Daher schließen wir, dass HCD gefüttert Zebrafisch-Larven mit Bedingungsausdruck EGFP-beschrifteten Oxydation-spezifische Antikörper leisten eine sehr effiziente Methode der Prüfung/diätetische oder andere therapeutische antioxidative Strategien, die letztlich auf den Menschen angewendet werden können.
Mittelhirn-Hinterhirn Grenze Musterbildung Und Morphogenese Sind Diverse Körnig Kopf-wie 2-abhängige Wege Geregelt
Isthmische Veranstalter befindet sich an der Grenze Mittelhirn-Hinterhirn (MHB) ist das entscheidende Entwicklungsstörungen Signalgebung für Musterung Aquaeductus und metencephalic Gehirnregionen Wirbeltiere verantwortlich. Bildung und Pflege von der MHB zeichnet sich durch eine hierarchische Programm der Genexpression von Fibroblasten-Wachstumsfaktor 8 (Fgf8), gepaart mit zellulären Morphogenese, die ihren Höhepunkt in der Bildung der tectal-Isthmo-zerebellären Strukturen initiiert. Hier zeigen wir im Zebrafisch, dass eine Orthologue der Transkription Faktor körnig Kopf-wie 2 (Grhl2), Zebrafish grhl2b spielt eine zentrale Rolle in MHB Wartung und Falten durch die Regelung von zwei unterschiedlichen, nichtlineare Wege. Verlust des grhl2b Ausdrucks induziert neuronales Apoptosis und Aussterben der MHB Markierungen, die von Re-expression Gezackter 2a gerettet werden (eng2a), ein evolutionär konservierte Ziel der Grhl-Familie. Injektionsverfahren sub-phenotypic Dosen von grhl2b und eng2a Morpholinos reproduziert die Apoptose und MHB Markierung Verlust, aber scheitert, Bildung von Isthmische Verengung wesentlich zu stören. Im Gegensatz dazu ein neuartige direkte grhl2b Ziel, spec1, phylogenetische Analyse festgestellten und von ChIP, bestätigt funktional kooperiert mit grhl2b MHB Morphogenese veranlassen, aber spielt keine Rolle bei der Apoptose oder Wartung von MHB-Markern. Gemeinsam zeigen diese Daten, dass MHB Wartung und Morphogenese Binom Ereignisse durch grhl2b durch diverse transkriptionelle Ziele geregelt sind.
Computational Quantifizierung Der Fluoreszierenden Leukozyten-Nummern in Den Zebrafish Embryos
Fluoreszierende transgene mit Leukozyten-eingeschränkte Ausdruck wurden für neuere Studien mit Zebrafisch-Modelle der Entzündung und der angeborenen Immunantwort. Viele der Experimente mit diesen Modellen durchgeführt umfassen die Quantifizierung von Veränderungen bei der Zahl der Leuchtstofflampen Leukocyten. Hier beschreiben wir ein Werkzeug für das Ableiten einer quantitativen Variablen proportional zu fluoreszierenden Leukozyten Zahlen vom Einzel-Flugzeug fluoreszierende Digitalbilder ganze Leben Embryonen. Der Parameter, genannt "Leukozyten-Einheiten," liefert zuverlässige Werte linear proportional zur tatsächlichen Leukozyten Zahlen im Bereich 50-400 Leukozyten/Embryo und seine Leistung bei höheren Leukozyten dichten bleibt linear. Seine Nützlichkeit zeigt Änderungen in Leukozyten-Zahl nach Störung der gekennzeichnete Leukozyten Spezifikation Weg erzielte.
