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Articles by Gavin J. Wright in JoVE
JoVE General
Avidità-based Screening Interaction extracellulare (AVEXIS) per il rilevamento scalabile di bassa affinità extracellulare del recettore-ligando interazioni
Cell Surface Signalling Laboratory, Wellcome Trust Sanger Institute
AVEXIS è un saggio di rendimento elevato di proteine di interazione sviluppate per lo screening sistematico per nuovi extracellulare del recettore-ligando coppie coinvolte in processi di riconoscimento cellulare. Si è specificamente progettato per rilevare le interazioni proteina transitori che sono difficili da identificare usando altri metodi di high throughput.
Other articles by Gavin J. Wright on PubMed
CD200 E Membrana Interazioni Della Proteina Nel Controllo Delle Cellule Mieloidi
OX2 (ora designato CD200) è una proteina di membrana espressa da una vasta gamma di tipi di cellule. È il legante per un recettore limitato alle cellule mieloidi, con il potenziale per fornire segnali inibitori. Questo è indicato dal modello di mouse CD200-carenti, in cui le cellule mieloidi sono più attivate quando stimolato immunologicamente più cellule da topi normali. La distribuzione di tessuti insoliti di CD200 indica dove le cellule mieloidi possono essere controllate restrittivo attraverso il contatto cellula-cellula. Dati recenti su CD200 verranno esaminati nel contesto di altre proteine che potrebbero avere ruoli simili, in particolare, l'interazione tra CD47 e SIRPalpha (CD172a).
Mente Bomba è Un'ubiquitina Ligasi Che è Essenziale Per L'efficiente Attivazione Della Tacca Di Segnalazione Di Delta
Inibizione laterale, mediata dalla tacca di segnalazione, conduce alla selezione delle cellule che hanno il permesso di diventare neuroni all'interno di domini definiti dall'espressione del gene proneural. Ridotta inibizione laterale nell'embrione mutante di zebrafish mib permette troppi progenitori neurali per differenziare come i neuroni. Clonazione posizionale di mib ha rivelato che si tratta di un gene nella via della tacca che codifica una ligasi di ubiquitin di anello. MIB interagisce con il dominio intracellulare di Delta per promuovere la sua ubiquitylation e interiorizzazione. Cella trapianto studi suggeriscono che mib funzione è essenziale nella cella di segnalazione per l'efficace attivazione del tacca in celle vicine. Queste osservazioni supportano un modello per l'attivazione di tacca dove l'interazione Delta-Notch è seguita da endocitosi di Delta e transendocytosis del dominio extracellulare tacca dalla cellula di segnalazione. Questo facilita intramembranosa clivaggio del recettore Notch rimanente, rilascio del frammento intracellulare di Notch e l'attivazione dei geni bersaglio in celle vicine.
Caratterizzazione Della Famiglia Del Recettore CD200 in Topi Ed Esseri Umani E Le Loro Interazioni Con CD200
CD200 (OX2) è una glicoproteina di superficie cellulare largamente distribuita che interagisce con un recettore strutturalmente correlato (CD200R) espresso sulle cellule mieloidi roditore ed è coinvolto nella regolazione della funzione dei macrofagi. Riportiamo la prima caratterizzazione del CD200R umano (hCD200R) e definire le caratteristiche di associazione a hCD200. Segnaliamo anche l'identificazione di un gene strettamente correlato a hCD200R, hCD200RLa designato e geni correlati a CD200R quattro mouse (definiti mCD200RLa-d). CD200, CD200R, geni correlati a CD200R erano strettamente legate in esseri umani e topi, suggerendo che questi geni si alzò dalla duplicazione genica. Le distribuzioni dei geni del recettore sono state determinate mediante RT-PCR quantitativa, e l'espressione della proteina è stata confermata da un set di mAbs romanzo. La distribuzione del mouse e CD200R umana era simile, con etichettatura più forte di macrofagi e neutrofili, ma anche altri leucociti, monociti, mastociti e linfociti T. Due mCD200 receptor-like familiari, designato mCD200RLa e mCD200RLb, sono stati mostrati a coppia con la proteina dell'adattatore activatory, DAP12, suggerendo che questi recettori vuoi trasmettere attivando forti segnali in contrasto con il segnale inibitorio apparente consegnato innescando la CD200R. Nonostante omologia di sequenza sostanziale con mCD200R, mCD200RLa e mCD200RLb non associare mCD200 e attualmente sconosciuti ligandi. La famiglia del gene del recettore CD200 ricorda le proteine regolatorie di segnale e killer recettori Ig-correlati nell'avere membri della famiglia dei recettori con funzioni activatory e inibitorie potenziali che possono giocare ruoli importanti nella regolazione immunitaria e l'equilibrio. Perché la manipolazione dell'interazione CD200-CD200R colpisce il risultato dei modelli di malattia roditore, targeting di questo percorso può avere utilità terapeutica.
Proteina K14 Herpesvirus Umano 8 Imita CD200 in Down-regolazione Di Attivazione Dei Macrofagi Attraverso CD200 Recettore
Molte proteine virali limite host difese immunitarie e loro geni provengono spesso da loro ospiti. CD200 (OX2) è una glicoproteina di superficie cellulare largamente distribuita che interagisce con un recettore sulle cellule mieloidi (CD200R) che è implicato nella prevenzione localmente attivazione dei macrofagi. Distanti, ma riconoscibili, i cromosomi omologhi di CD200 sono stati identificati in molti herpesvirus e Poxvirus. Qui, ci mostrano che il prodotto della K14 aperto lettura telaio da herpesvirus umano 8 (associato al sarcoma di Kaposi herpesvirus) interagisce con CD200R umana e si esprime presso le superfici delle cellule infette unicamente durante il ciclo litico. Nonostante la condivisione di identità della sequenza primaria solo il 40%, K14 e CD200 interagito con CD200R con una quasi identica e bassa affinità (K(D) = 0,5 microM), in contrasto con altri caratterizzati interazioni omologo virale. Le cellule che esprimono CD200 o K14 sulla superficie della cellula erano in grado di inibire la secrezione attivate macrofagi di citochine proinfiammatorie come il fattore di necrosi tumorale alfa, un effetto che potrebbe essere alleviato in particolare tramite l'aggiunta di anticorpi monoclonali e proteine solubili di CD200 monomerica. Concludiamo che CD200 trasporta segnali giù-modulatrice locale di cellule mieloidi attraverso il contatto diretto cellula-cellula e che l'omologo virale K14 imita molto attentamente questo.
Delta Proteine E Proteine MAGI: Un'interazione Di Ligandi Tacca Con Molecole Intracellulari Ponteggi E La Sua Importanza Per Lo Sviluppo Dello Zebrafish
Le proteine Delta attivare Notch attraverso una reazione di binding che dipende dalla loro domini extracellulari; ma i domini intracellulari (C-terminale) del Delta hanno anche importanti funzioni. Tutte le classi di vertebrati possiedono un sottoinsieme delle proteine Delta con un motivo ATEV * conservata a loro termini C. Questi Delta ATEV includono Delta1 e Δ4 nei mammiferi e DeltaD e DeltaC in the zebrafish. Mostriamo che questi Delta si associa con le proteine di membrana associati ponteggi MAGI1, MAGI2 e MAGI3, attraverso un'interazione diretta tra i termini C del Delta e uno specifico dominio PDZ (PDZ4) della MAGIs. In cellule in coltura e in sottoinsiemi di cellule nell'embrione dello zebrafish intatto, DeltaD e MAGI1 sono co-localized alla membrana del plasma. L'interazione e la collocazione può essere abolite da iniezione di un oligonucleotides che blocca il mRNA impionbatura reazione che dà DeltaD sua valina terminale, da cui dipende l'interazione. Embrioni trattati in questo modo appaiono normali per quanto riguarda alcune funzioni di DeltaD conosciuti come un ligando Notch, compreso il controllo della formazione di segmentazione, neurogenesi e hypochord somite. , Tuttavia, mostrano una distribuzione anomala dei neuroni Rohon-barba in tubo neurale dorsale, suggerendo che l'interazione Delta-MAGI può giocare qualche parte del controllo della migrazione del neurone.
Impostazione Del Tempo Di Sviluppo: Un'indagine Del Meccanismo Dell'orologio Di Zebrafish Somite
I somiti dell'embrione vertebrato sono cronometrati in sequenza dal mesoderm presomitic (PSM) alla fine della coda dell'embrione. Formazione di ciascun somite corrisponde a un ciclo di oscillazione del clock segmentazione somite - un sistema di geni la cui espressione accende e si spegne periodicamente nelle cellule del PSM. In precedenza abbiamo proposto un semplice modello matematico che spiega come le oscillazioni, in zebrafish almeno, possono essere generate da un ciclo di feedback negativo ritardata in cui i prodotti dei due geni bersaglio di tacca, her1 e her7, inibiscono direttamente la propria trascrizione, così come quella del gene che codifica per il ligando Notch DeltaC; Tacca di segnalazione via DeltaC mantiene le oscillazioni delle cellule vicine in sincronia. Qui sottoponiamo il modello di test quantitativi. Vi mostriamo come leggere informazioni temporali dal modello spaziale di strisce di espressione genica nel PSM anteriore e in questo modo ottenere i valori per i ritardi biosintetici e durate molecolare da cui dipende criticamente il modello. Utilizzando linee transgeniche di zebrafish esprimendo her1 o her7 sotto il controllo di scossa di calore, confermiamo il regolamentazione rapporti postulati dal modello. Dai tempi delle dispersioni di segmentazione somite seguendo un impulso di her7 misexpression, si deduce che anche se her7 continua a oscillare nella metà anteriore del PSM, esso governa il comportamento di segmentazione somite future delle cellule solo mentre sono nella metà posteriore. In generale, i risultati sostengono fortemente il modello matematico di come funziona l'orologio somite, ma essi non escludono la possibilità che altri meccanismi di oscillatore possono operare a monte dall'oscillatore her7/her1 o in parallelo con essa.
Screening Su Larga Scala Per Le Interazioni Proteina Extracellulare Novella Bassa Affinità
Interazioni proteina-proteina extracellulare sono essenziali per la comunicazione intercellulare e la coesione all'interno di organismi pluricellulari. Circa un quinto dei geni umani codificano proteine secrete o legato a membrana, ma sono in gran parte assente dal DataSet recente interazione su grande scala della proteina, rendendo attuali reti di interazione parziale e incompleta. Questa discrepanza è dovuta l'inadeguatezza dei metodi popolari di high-throughput per rilevare le interazioni extracellulare causa il intractability biochimica delle proteine di membrana e le loro interazioni. Per esempio, proteine della superficie delle cellule contengono regioni transmembrane idrofobici insolubile, e loro interazioni extracellulari sono spesso altamente transitori, con emivite di meno di un secondo. Per rilevare le interazioni transienti extracellulare su larga scala, abbiamo sviluppato AVEXIS (schermo di interazione extracellulari basata su avidità), un saggio di alto-rendimento che supera questi problemi tecnici e in grado di rilevare le interazioni molto transitorie (emivita < o = 0.1 sec) con un basso tasso di falsi-positivi. Abbiamo utilizzato per lo screening sistematico coppie recettore-ligando all'interno della superfamiglia delle immunoglobuline zebrafish e identificato romanzo ligandi per recettori ben noti e orfani. Geni che codificano per coppie recettore-ligando erano spesso raggruppati filogeneticamente ed espresso nei tessuti adiacenti o stessi, implicando immediatamente il loro coinvolgimento nei processi biologici simili. Utilizzando AVEXIS, abbiamo determinato la prima rete di interazione sistematica della proteina extracellulare a bassa affinità, supportata da dati biologici indipendenti. Questa tecnica permette ora di mapping di interazione della proteina extracellulare su larga scala in una vasta gamma di contesti sperimentali.
Iniziazione Del Segnale Nei Sistemi Biologici: La Proprietà E L'individuazione Delle Interazioni Della Proteina Extracellulare Transitoria
Singole celle all'interno di sistemi biologici spesso coordinano le loro funzioni attraverso segnali iniziate da interazioni specifiche proteina extracellulare che coinvolgono i recettori che colmano la membrana cellulare. A causa della loro natura biochimica, queste proteine recettore di membrana-embedded sono difficili da manipolare e loro interazioni sono caratterizzati da punti di forza di legame molto debole che non può essere rilevati utilizzando dosaggi popolare ad alto rendimento. Questa recensione fornirà un quadro generale degli attributi di biochimici delle proteine del recettore, concentrandosi in particolare sulle proprietà biofisiche delle loro interazioni transienti. Metodi che sono in grado di rilevare questi eventi debole legame extracellulare e in particolare quelli che possono essere utilizzati per identificare le interazioni romanzo saranno confrontati. Infine, discutere la fattibilità della costruzione di una mappa di interazione della proteina extracellulare completa e accurata e i metodi che possono essere utili nel raggiungimento di questo obiettivo.
Una Rete Di Interazione Di Superficie Delle Cellule Di Neurale Recettori Ripetizione Ricchi Di Leucina
Il vasto numero di precise connessioni intercellulari all'interno dei sistemi nervoso vertebrati è solo parzialmente spiegato dagli spunti di noto orientamento extracellulare relativamente pochi. Grandi famiglie di proteine recettore orfano neurali sono state identificate e sono suscettibili di contribuire a questi processi di riconoscimento, ma a causa delle difficoltà tecniche nell'identificazione romanzo extracellulare interazioni delle proteine di membrana-embedded, loro ligands rimangono sconosciute.
Inerente Allo Sviluppo Regolato Impedimenti Alla Pelle Reinnervazione Dai Terminali Infortunato Assone Sensoriale Periferico
La plasticità strutturale dei neuriti nel sistema nervoso centrale (SNC) diminuisce drasticamente dopo la fase di sviluppo iniziale, ma il sistema nervoso periferico (PNS) mantiene la sostanziale plasticità nell'età adulta. Tuttavia, reinnervazione funzionale di neuroni sensitivi periferici feriti è spesso incompleta [1-6]. Per indagare il controllo dello sviluppo di reinnervazione pelle, abbiamo ripreso la rigenerazione dei terminali di assoni sensoriali del trigemino in larve di zebrafish live seguendo laser axotomy. Quando assoni sono stati feriti durante le prime fasi di escrescenza, rigenerante e illeso assoni crebbero in pelle denervata e gareggiarono con uno altro per il territorio. Nelle fasi successive, dopo l'istituzione dei territori periferici arbor, la capacità dei vicini illesi a germogliare diminuito severamente, e sebbene ferito rilanciate crescita assoni, essi furono respinti da pelle denervata. Assoni rigeneranti furono respinti in particolare dai loro ex territori, suggerendo che fattori inibitori locali persistono in queste regioni. Inimicarsi la funzione dei diversi membri del recettore Nogo (NgR) / RhoA percorso migliorato la capacità di assoni feriti a crescere in pelle denervata. Così, come il CNS, impedimenti a reinnervazione nel PNS sorgono dopo il primo insediamento della struttura arbor assone.
Un Metodo Veloce E Scalabile Per La Selezione Di Anticorpi Monoclonali Ricombinanti
Gli anticorpi monoclonali con elevata affinità e selettività che funzionano su wholemount tessuti fissata sono preziosi reagenti per la cella e il biologo dello sviluppo, e isolandoli ancora rimane un processo lungo e imprevedibile. Qui riportiamo un metodo veloce e scalabile per selezionare ed esprimere anticorpi monoclonali ricombinanti del mouse che sono sostanzialmente equivalenti a quelle secreto dai genitori ibridomi isotipo IgG.
High-throughput Identificazione Delle Interazioni Della Proteina Extracellulare Transitoria
Le interazioni della proteina sono altamente diversificate nella loro natura biochimica, variando in affinità e spesso dipende il circostante ambiente biochimico. Tenuto conto di questa eterogeneità, sembra improbabile che qualsiasi uno metodo ed in particolare quelle in grado di screening per molti le interazioni della proteina in parallelo, sarà in grado di rilevare tutte le interazioni funzionalmente rilevanti che si verificano all'interno di una cellula vivente. Una classe importante di interazioni che non vengono rilevate dalla corrente metodi popolari ad alta velocità sono quelle che si verificano nell'ambiente extracellulare, soprattutto quelli fatti da proteine recettore di membrana-embedded. Nel presente articolo, si discute alcune delle nostre recenti ricerche nello sviluppo di un dosaggio scalabile per identificare questa classe di interazione della proteina e alcuni dei risultati della sua applicazione nella costruzione di reti di interazione della proteina extracellulare.
Costruzione Di Una Rete Di Interazione Della Proteina Extracellulare Grandi E La Sua Risoluzione Da Spatiotemporal Expression Profiling
Extracellulare interazioni che coinvolgono entrambe le proteine secrete e legato a membrana recettore sono essenziali per avviare percorsi di segnalazione che orchestrare comportamenti cellulari all'interno di sistemi biologici. A causa delle proprietà biochimiche di queste proteine e loro interazioni, identificando nuove interazioni extracellulare rimane sperimentalmente impegnativo. Per risolvere questo problema, abbiamo recentemente sviluppato un test, AVEXIS (schermo di interazione extracellulari basata su avidità) per rilevare le interazioni extracellulare bassa affinità su larga scala e hanno cominciato a costruire reti di interazione tra i recettori di zebrafish appartenendo all'immunoglobulina e ricchi di leucina ripetere famiglie della proteina per individuare percorsi di segnalazione romanzo importante per lo sviluppo precoce. Qui, abbiamo ampliato la nostra libreria di proteina zebrafish per includere altre famiglie di dominio e molti più secreto proteine ed eseguito il nostro più grande schermo a data per un totale di 16.544 potenziali interazioni uniche. Riportiamo 111 interazioni di cui 96 romanzo e includono i primi documentati ligandi extracellulari per 15 proteine. Includendo 77 interazioni da schermate precedenti, abbiamo montato una rete estesa di 188 extracellulare interazioni tra 92 proteine e usato per mostrare che le proteine secrete hanno due volte come molti partner di interazione come recettori di membrana-legato e che la connettività della rete extracellulare si comporta come una legge di potenza. Per cercare di capire il ruolo funzionale di queste interazioni, abbiamo determinato nuovi modelli di espressione per 164 geni all'interno della nostra libreria clone utilizzando intero embrione l'ibridazione in situ in cinque fasi principali dello sviluppo embrionale di Danio rerio. Questi dati di espressione sono stati integrati con la rete di associazione di rivelare dove ogni interazione è probabile che la funzione all'interno dell'embrione e sono stati utilizzati per risolvere la rete di interazione statica in sottoreti dinamico tessuto e fase-specifici all'interno dell'embrione di zebrafish. Tutti questi dati sono stati organizzati in un database liberamente accessibile on-linea chiamato ARNIE (rete del recettore AVEXIS con espressione integrata; www.sanger.ac.uk/arnie) e fornire una risorsa preziosa di nuove interazioni segnalazione extracellulare per la biologia dello sviluppo.
L'impatto Della Regolazione Di Espressione Genica Sull'evoluzione Delle Vie Di Segnalazione Extracellulare
Le interazioni della proteina extracellulare sono cruciali per lo sviluppo di organismi pluricellulari perché avviare percorsi di segnalazione e attivare segnali di riconoscimento cellulare. Nonostante la loro importanza, le interazioni della proteina extracellulare sono spesso sotto-rappresentate in insiemi di dati della interazione di proteine su larga scala perché la maggior parte dei saggi ad alto rendimento non sono progettati per rilevare le interazioni extracellulare bassa affinità. A causa della mancanza di un completo set di dati, l'evoluzione delle vie di segnalazione extracellulare è rimasto in gran parte un mistero. Abbiamo studiato questa domanda utilizzando un set di dati combinato di fisiche pairwise interazioni tra proteine extracellulari zebrafish, pricipalmente dalla Superfamiglia delle immunoglobuline e ricchi di leucina ripetono le famiglie e i loro profili spatiotemporal espressione. Abbiamo approfittato del noto omologia tra le proteine di stimare i tassi relativi cambiamenti di quattro parametri dopo la duplicazione genica, cioè interazione proteina extracellulare, pattern di espressione e la divergenza delle sequenze della proteina extracellulare e intracellulare. Abbiamo dimostrato che il cambiamento nel profilo di espressione è un importante contributo all'evoluzione della segnalazione percorsi seguiti da divergenza nella sequenza della proteina intracellulare, considerando che la sequenza extracellulare e i profili di interazione relativamente erano più conservati. Evolvendo rapidamente profili di espressione guiderà alla fine altri parametri a divergere più rapidamente perché le proteine differenzialmente espressione ottenere esposti a diversi ambienti e potenziali partner di associazione. Questo permette di omologhi recettori extracellulari di raggiungere funzioni specializzate e diventano specifici per tessuti e/o stadi di sviluppo.
Neurexins, Neuroligins E LRRTMs: Adesione Sinaptica Sempre Di Pesce
Studi recenti hanno identificato la proteina LRRTM2 ripetizione ricchi della leucina come un ligando di Neurexins. Neurexins legano anche le molecole di adesione dei, Neuroligins. Tutte e tre le famiglie di geni sono state implicate nelle eziologie dei disturbi dello sviluppo neurologico, in particolare disturbi dello spettro dell'autismo e schizofrenia. La promiscuità di associazione di Neurexins suggerire ora cooperatività complesse o ridondanza a sinapsi? Mentre studi recenti in colture neuronali primarie e anche gli schermi di interazione della proteina extracellulare sistematica suggeriscono effetti sommativa di questi sistemi, proponiamo che studiando queste interazioni nell'embrione di zebrafish sviluppo o larve può far luce sulle loro funzioni durante pervasivi in vivo. Queste famiglie gene sono recentemente state ampiamente caratterizzate in zebrafish, dimostrando conservazione alta sequenza con i geni umani. Il più semplice circuito di zebrafish, insieme con la caratterizzazione dei modelli di espressione fino a neuroni singoli, identificabili e la capacità di knock-down o intra geni multipli in maniera rapida si prestano a percorsi di interazione complessa di dissezione. Inoltre, la capacità di realizzare schermi high-throughput drug suggerisce che questi piccoli vertebrati possono rivelarsi estremamente utili per identificare gli approcci farmacologici per trattare disturbi dello spettro autistico.
DeltaC E DeltaD Interagire Come Ligandi Tacca Nell'orologio Di Segmentazione Zebrafish
Descriviamo la produzione e la caratterizzazione di due anticorpi monoclonali, zdc2 e zdd2, diretto contro i ligandi tacca zebrafish DeltaC e DeltaD, rispettivamente. Usiamo i nostri anticorpi per mostrare che queste proteine Delta possono legarsi l'uno a altro homo - e heterophilically e di studiare la localizzazione di DeltaC e DeltaD nel sistema nervoso zebrafish e mesoderm presomitic (PSM). I nostri risultati nel sistema nervoso in gran parte confermano le aspettative da studi precedenti, ma il PSM vediamo un motivo imprevisto in cui la localizzazione di DeltaD varia a seconda del livello di espressione di DeltaC: nel PSM anteriore, dove DeltaC è abbondante, sono colocalised le due proteine intracellulare puncta, ma il PSM posteriore, dove DeltaC è a un livello inferioreDeltaD è visto principalmente sulla superficie della cellula. Sovraespressione forzata di DeltaC riduce la quantità di DeltaD sulla superficie delle cellule nel PSM posteriore; al contrario, mutazione di perdita di funzione di DeltaC aumenta la quantità di DeltaD sulla superficie delle cellule nel PSM anteriore. Questi risultati suggeriscono una spiegazione per un puzzle di vecchia data per quanto riguarda le funzioni delle due proteine Delta nell'orologio di segmentazione somite - una spiegazione che si basa sulla proposizione che associano heterophilically per attivare la tacca.
Basigin è Un Recettore Essenziale Per Invasione Degli Eritrociti Da Plasmodium Falciparum
L'invasione degli eritrociti da Plasmodium falciparum è centrale nella patogenesi della malaria. Invasione richiede una serie di eventi di riconoscimento extracellulare tra eritrociti recettori e ligandi sul merozoite, forma invasiva del parassita. Nessuna delle interazioni recettore-ligando noti pochi coinvolte sono tenuta in tutti i ceppi del parassita, che indica che il parassita è in grado di accedere a molteplici percorsi ridondanti invasione. Qui, ci mostra che abbiamo identificato un accoppiamento recettore-ligando che è essenziale per l'invasione degli eritrociti in tutti i ceppi testati p. falciparum. Di screening sistematicamente una libreria delle proteine degli eritrociti, abbiamo trovato che l'antigene di gruppo sanguigno Ok, basigin, è un recettore per PfRh5, un ligando di parassita che è essenziale per la crescita di fase di sangue. Invasione degli eritrociti era potentemente inibiti da solubile basigin o da basigin atterramento, e invasione potrebbe essere completamente bloccata con basse concentrazioni di anticorpi anti-basigin; soprattutto, questi effetti sono stati osservati attraverso tutti i ceppi adattati in laboratorio e campi testati. Inoltre, Ok(a-) eritrociti, che esprimono una variante di basigin che ha un'affinità di legame più debole per PfRh5, avevano ridotto efficienze di invasione. La nostra scoperta di una dipendenza di croce-ceppo su una coppia singola extracellulare del recettore-ligando per invasione degli eritrociti da p. falciparum fornisce un fuoco per nuove terapie contro la malaria.
Stipite E Jamc Sono Essenziali Per La Fusione Del Miocita Vertebrati
Fusione cellulare è necessaria allo sviluppo di diversi tessuti, compresi i muscoli scheletrici. Nei vertebrati, questo processo è capito male e manca di una cella convalidata dal vivo in coppia recettore eterofile che è necessaria per la fusione di superficie. Identificazione delle interazioni superficie cellulare essenziale tra cellule di fusione è un passo importante nel chiarire il meccanismo molecolare della fusione cellulare. Mostriamo qui che il orthologues zebrafish di recettori JAM-B e C-JAM sono essenziali per la fusione dei precursori del miocita fibre muscolari sinciziale forma. Stipite sia jamc sono espressi in modo dinamico lo sviluppo di muscoli e codificare i recettori che interagiscono fisicamente. Mutazioni ereditarie o gene prevenire la fusione del miocita in vivo, risultante in una sovrabbondanza di fibre mononucleate, ma altrimenti muscolari rapide apertamente normale, funzionale. Esperimenti di trapianto mostrano che i recettori stipite e Jamc devono interagire tra cellule vicine (in trans) per fusione a verificarsi. Mostriamo anche quello jamc ectopically è espresso in prdm1a precursori di muscolo lento mutante, che impropriamente fusibile con altri miociti, suggerendo che il controllo della fusione del miocita attraverso la regolazione dell'espressione jamc ha implicazioni importanti per la crescita e la creazione di una serie di muscoli. La nostra scoperta di una coppia di recettore-ligando critica per la fusione in vivo ha importanti implicazioni per comprendere i meccanismi molecolari responsabili del miocita fusion e relativo regolamento in vertebrati myogenesis.
L'antigene Di Malaria Sangue-fase PfRH5 è Suscettibile Di Vaccino-inducible Anticorpo Neutralizzante Cross-ceppo
Attuali strategie di vaccino contro la fase asessuata sangue del Plasmodium falciparum sono principalmente focalizzati su antigeni merozoite ben studiata che inducono la risposta immunitaria dopo esposizione naturale, ma ancora devono indurre protezione robusta in ogni sperimentazione clinica. Qui confrontiamo umano-compatibile con vettore virale vaccini dieci antigeni diversi sangue-fase di targeting. Dimostriamo che l'omologo di reticolociti-binding protein full-length p. falciparum 5 (PfRH5) è altamente suscettibile di croce-ceppo neutralizzando gli anticorpi vaccino-indotta, prestazioni di tutti gli altri antigeni consegnati dalla stessa piattaforma di vaccino. Troviamo che, pur essendo suscettibile di anticorpo, PfRH5 è improbabile da essere sotto pressione di selezione sistema immunitario notevoli; c'è la minima acquisizione di anticorpi IgG anti-PfRH5 in malaria-esposti keniani. Questi dati sfidano la credenza diffusa che qualsiasi antigene merozoite che è altamente suscettibile di attacco immunitario sarebbe soggetta a livelli significativi di polimorfismo antigenica, e tale invasione degli eritrociti da p. falciparum è un processo degenerato che coinvolge una serie di percorsi paralleli ridondanti.
Una Benchmark Proteina Microarray-piattaforma Per L'identificazione Delle Interazioni Proteina Extracellulare Romanzo Bassa Affinità
Interazioni proteina extracellulare bassa affinità sono fondamentali per i processi di riconoscimento cellulare, ma i metodi esistenti per individuarli sono limitati in scala facendo schermi genome-wide interazione tecnicamente impegnativo. Per risolvere questo problema, riportiamo qui la miniaturizzazione del dosaggio AVEXIS (basata sull'avidità extracellulare interazione schermo) utilizzando la tecnologia di microarray della proteina. Per raggiungere questo obiettivo, abbiamo sviluppato la proteina tag e metodi di preparazione del campione che permettono la depurazione parallela di centinaia di proteine ricombinanti espresse in cellule di mammifero. Abbiamo analizzate il dosaggio basato su microarray della proteina contro un set di coppie conosciute quantificati recettore-ligando e mostrano che è abbastanza sensibile per rilevare anche molto deboli interazioni che sono tipiche di questa classe di interazioni. L'aumento di scala permette lo screening di interazione contro una serie di diluizione di proteine immobilizzate su microarray consentendo l'osservazione di saturazione associazione comportamenti per mostrare la specificità di interazione e anche la stima delle affinità di interazione direttamente dalla schermata principale. Questi miglioramenti metodologici ora permettono lo screening per le interazioni recettore-ligando extracellulare romanzo su una scala genome-wide.
